PCR理論與技術(shù)

內(nèi)容概要

《PCR理論與技術(shù)》是《21世紀(jì)生物技術(shù)叢書》的一個分冊，是分子生物學(xué)研究的重要理論和工具。該書第一版于2005年出版，隨著當(dāng)今生物技術(shù)的迅速發(fā)展和需求的日益擴大，現(xiàn)予以再版。第二版在第一版基礎(chǔ)上主要增加了實驗技術(shù)，從而使該書更具可操作性。    本書分上、下篇，共13章。上篇介紹PCR基礎(chǔ)理論和技術(shù)操作知識，以及可能遇到的各種問題的處理方法。下篇介紹PCR技術(shù)的應(yīng)用，特別是第二版中通過RT+PCR技術(shù)檢測全橫斷損傷脊髓中TGF-B1表達(dá)的實例分析，系統(tǒng)闡述了從RNA提取、反轉(zhuǎn)錄、PCR引物設(shè)計到PCR擴增、電泳及圖像分析等具體操作步驟，使學(xué)習(xí)者能夠全面掌握RT-PCR技術(shù)，做到無師自通。本書是編者在一線長期從事分子生物學(xué)實驗技術(shù)的總結(jié)，基本涵蓋了目前實驗室所需的PCR理論與技術(shù)，有較好的實用價值。    本書可供生物醫(yī)學(xué)專業(yè)研究生、本科學(xué)生及從事分子生物學(xué)的科研人員閱讀和實驗時參考。

書籍目錄

上篇 PCR的基本理論與技術(shù)  第一章 聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)    第一節(jié) PCR技術(shù)的原理    第二節(jié) PCR反應(yīng)體系    第三節(jié) PCR的反應(yīng)溫度和循環(huán)參數(shù)    第四節(jié) PCR反應(yīng)條件的優(yōu)化    第五節(jié) PCR產(chǎn)物的檢測    第六節(jié) PCR產(chǎn)物的純化  第二章 DNA模板的制備及PCR技術(shù)中常見問題的處理    第一節(jié) DNA模板的制備    第二節(jié) PCR常見問題及處理    第三節(jié) PCR技術(shù)中污染問題    第四節(jié) PCR技術(shù)實驗室的質(zhì)量控制  第三章 原位PCR相關(guān)技術(shù)    第一節(jié) 原位PCR      第二節(jié) 原位PCR的分類    第三節(jié) 原位PCR技術(shù)  第四章 定量PCR技術(shù)    第一節(jié) 概述    第二節(jié) 基本概念    第三節(jié) 定量PCR技術(shù)基本原理    第四節(jié) 定量PCR技術(shù)的種類    第五節(jié) 定量PCR的主要影響因素    第六節(jié) 常用的定量PCR技術(shù)及其在臨床上的應(yīng)用    第七節(jié) PCR產(chǎn)物的檢測與定量技術(shù)    第八節(jié) 目前存在的問題及展望  第五章 其他相關(guān)PCR技術(shù)    第一節(jié) 反轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)    第二節(jié) 套式PCR    第三節(jié) 多重PCR    第四節(jié) PCR結(jié)合等位基因特異性的寡核苷酸探針法    第五節(jié) PCR結(jié)合序列特異性引物技術(shù)    第六節(jié) 單鏈構(gòu)型多態(tài)性分析    第七節(jié) 限制性酶切片段長度多態(tài)性分析    第八節(jié) MVR-PCR    第九節(jié) RAPD技術(shù)下篇 PCR相關(guān)技術(shù)的應(yīng)用  第六章 PCR技術(shù)用于構(gòu)建cDNA文庫、測序及基因突變的檢測    第一節(jié) cDNA文庫構(gòu)建的基本技術(shù)    第二節(jié) PCR測序    第三節(jié) PCR技術(shù)用于基因突變的檢測  第七章 PCR技術(shù)分析DNA序列多態(tài)性    第一節(jié) DNA的兩種多態(tài)性和遺傳標(biāo)記分類    第二節(jié) PCR技術(shù)分析DNA序列多態(tài)性  第八章 用PCR技術(shù)分析VNTR和STR    第一節(jié) 概述    第二節(jié) 擴增片段長度多態(tài)性分析分型技術(shù)基本原理    第三節(jié) 用PCR技術(shù)分析小衛(wèi)星VNTR基因座分型的基本技術(shù)    第四節(jié) 用PCR技術(shù)分析微衛(wèi)星(STR)基因座  第九章 用PCR技術(shù)對性別染色體進(jìn)行分析    第一節(jié) 概述    第二節(jié) PCR擴增的基本方法    第三節(jié) 討論  第十章 用PCR技術(shù)對動植物、微生物DNA進(jìn)行分析    第一節(jié) 概述    第二節(jié) 實驗方法與步驟    第三節(jié) 結(jié)果與討論  第十一章 PCR技術(shù)檢測CDK4敲入轉(zhuǎn)基因鼠的基因型    第一節(jié) 實驗原理    第二節(jié) 實驗方法    第三節(jié) 實驗結(jié)果    第四節(jié) 結(jié)果分析及注意事項    ……  第十二章 PCR體系中模板DNA濃度與PCR擴增效率的關(guān)系  第十三章 RP-PCR技術(shù)檢測全橫斷損傷脊髓中TGF-B1的表達(dá)

章節(jié)摘錄

　　上篇 PCR的基本理論與技術(shù)　　第一章 聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)　　分子克?。╩olecular cloning）、DNA測序（DNA sequencing）和聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（polymer-ase chain reaction，PCR）是分子生物學(xué)的三大主流技術(shù)。在這三種技術(shù)中，PCR技術(shù)在實踐中的應(yīng)用日益廣泛，并隨著分子生物學(xué)實驗技術(shù)的成熟而不斷創(chuàng)新和拓展。早在20世紀(jì)70年代初期，H.Ghobind Khorana和他的同事就提出了用PCR技術(shù)來減少基因化學(xué)合成中的工作量的想法。由于當(dāng)時技術(shù)條件的限制，基因測序、引物合成等方面的研究都存在一定的局限性，特別是還沒有發(fā)現(xiàn)穩(wěn)定的耐熱DNA聚合酶（thermostable DNA polymerase）等諸多因素，使得Khorana的想法在當(dāng)時看來還不可能實現(xiàn)，并且很快就被人們所遺忘。然而，隨著耐熱DNA聚合酶的發(fā)現(xiàn)，15年后，美國PE.Cetus公司的Kary Mullis和他的同事通過使用E coli DNA聚合酶I的Klenow片段成功地在體外擴增了哺乳動物的基因，從而實現(xiàn)了Khorana的設(shè)想，并將這一技術(shù)命名為聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）。隨著耐熱菌Termus aquaticus中耐熱DNA聚合酶的發(fā)現(xiàn)和應(yīng)用，大大地提高了PCR的效率并推動了其向PCR自動化技術(shù)的發(fā)展。此后，利用PCR技術(shù)，人們能在數(shù)小時內(nèi)通過試管中的反應(yīng)將特定的DNA片段擴增數(shù)百萬倍。PCR技術(shù)成為生物科學(xué)研究的一種重要方法，為醫(yī)學(xué)、遺傳學(xué)和考古學(xué)等學(xué)科的研究提供了新的技術(shù)手段。目前，與PCR相關(guān)的技術(shù)已經(jīng)不斷地被開發(fā)應(yīng)用?！　〉谝还?jié) PCR技術(shù)的原理　　聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）是一種選擇性體外擴增DNA或RNA片段的方法，即通過試管中進(jìn)行的DNA復(fù)制反應(yīng)，使極少量的基因組DNA或RNA樣品中的特定基因片段在短短幾小時內(nèi)擴增上百萬倍。其反應(yīng)原理與細(xì)胞內(nèi)的DNA復(fù)制相似，但PCR的反應(yīng)體系要簡單得多，主要包括DNA靶序列、與DNA靶序列單鏈3’末端互補的合成引物、4種dNTP、耐熱DNA聚合酶及合適的緩沖液體系。

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