流式細(xì)胞術(shù)基本原理與實(shí)用技術(shù)

前言

　　近年來(lái)，流式細(xì)胞術(shù)（flowcytometry，F(xiàn)CM）日益廣泛地被應(yīng)用于基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)和臨床醫(yī)學(xué)，尤其是細(xì)胞生物學(xué)、細(xì)胞遺傳學(xué)、生物化學(xué)、免疫學(xué)、腫瘤學(xué)、血液學(xué)等領(lǐng)域。流式細(xì)胞術(shù)是集物理電子技術(shù)、激光技術(shù)、計(jì)算機(jī)技術(shù)為一體的現(xiàn)代實(shí)驗(yàn)技術(shù)，作為生物學(xué)、醫(yī)學(xué)專(zhuān)業(yè)人員，實(shí)際應(yīng)用中并沒(méi)必要了解其深?yuàn)W的理論和技術(shù)細(xì)節(jié)，關(guān)鍵是掌握相關(guān)的基本原理與實(shí)驗(yàn)操作，并將該技術(shù)應(yīng)用于科研和臨床實(shí)踐?！　』诖?，編者從科研和臨床專(zhuān)業(yè)人員的實(shí)際需要出發(fā)，在總結(jié)多年的研究、教學(xué)工作與實(shí)際操作經(jīng)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，編撰了《流式細(xì)胞術(shù)基本原理與實(shí)用技術(shù)》一書(shū)。本書(shū)具有以下幾方面的特點(diǎn)?！　。?）深入淺出：全書(shū)文字淺顯易懂、圖文并茂，簡(jiǎn)明扼要地介紹流式細(xì)胞術(shù)的基本原理?！　。?）內(nèi)容詳實(shí)：全書(shū)按照細(xì)胞生物學(xué)、免疫學(xué)、腫瘤學(xué)、血液學(xué)、細(xì)胞遺傳學(xué)、生物化學(xué)等學(xué)科的應(yīng)用領(lǐng)域進(jìn)行歸類(lèi)，全面而詳盡地介紹流式細(xì)胞術(shù)的應(yīng)用范圍，涉及細(xì)胞表面分子、細(xì)胞內(nèi)或細(xì)胞核內(nèi)抗原、細(xì)胞凋亡、DNA含量與細(xì)胞周期、細(xì)胞增殖、細(xì)胞毒作用、可溶性蛋白質(zhì)分子、報(bào)告基因等的檢測(cè)和分析，并介紹了流式細(xì)胞術(shù)的其他用途?！　。?）注重實(shí)際：全書(shū)在兼顧流式細(xì)胞術(shù)最新進(jìn)展的同時(shí)，重點(diǎn)介紹經(jīng)典和常用的實(shí)驗(yàn)技術(shù)，包括詳盡的操作步驟，并借助圖釋介紹資料數(shù)據(jù)的分析?！　。?）經(jīng)驗(yàn)之談：本書(shū)編者均經(jīng)歷了研究生階段的嚴(yán)格科研訓(xùn)練，有較扎實(shí)的免疫學(xué)、分子生物學(xué)和細(xì)胞生物學(xué)的理論基礎(chǔ)，并多年從事流式細(xì)胞術(shù)相關(guān)的實(shí)驗(yàn)研究。在此基礎(chǔ)上，他們結(jié)合自身豐富的實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)和體會(huì)，針對(duì)性地介紹與流式細(xì)胞術(shù)應(yīng)用相關(guān)的內(nèi)容，既為拋磚引玉，也期望與同行們交流經(jīng)驗(yàn)。　　本人相信，該書(shū)作為流式細(xì)胞術(shù)的入門(mén)讀物和實(shí)驗(yàn)指南，是一本有價(jià)值的工具書(shū)，并將受到廣大讀者的歡迎。

內(nèi)容概要

本書(shū)按照細(xì)胞生物學(xué)、免疫學(xué)、腫瘤學(xué)、血液學(xué)、細(xì)胞遺傳學(xué)、生物化學(xué)等學(xué)科的應(yīng)用領(lǐng)域進(jìn)行歸類(lèi)，全面而詳盡地介紹流式細(xì)胞術(shù)的應(yīng)用范圍，涉及細(xì)胞表面分子、細(xì)胞內(nèi)或細(xì)胞核內(nèi)抗原、細(xì)胞凋亡、DNA含量與細(xì)胞周期、細(xì)胞增殖、細(xì)胞毒作用、可溶性蛋白質(zhì)分子、報(bào)告基因等的檢測(cè)和分析，并介紹了流式細(xì)胞術(shù)的其他用途。

書(shū)籍目錄

第1章  流式細(xì)胞儀基本結(jié)構(gòu)與原理  1.1 流式細(xì)胞儀基本結(jié)構(gòu)與功能    1.1.1 流式細(xì)胞儀基本結(jié)構(gòu)    1.1.2 流式細(xì)胞儀的基本功能與應(yīng)用  1.2 流式細(xì)胞術(shù)的重要術(shù)語(yǔ)    1.2.1 前向散射與側(cè)向散射    1.2.2 Coulter效應(yīng)與電子體積    1.2.3 熒光信號(hào)及其面積與寬度    1.2.4 光譜重疊與熒光補(bǔ)償    1.2.5 細(xì)胞基礎(chǔ)熒光域值與陰性對(duì)照置信區(qū)間  1.3 流式細(xì)胞術(shù)基本原理    1.3.1 流式細(xì)胞術(shù)分析的基本原理    1.3.2 流式細(xì)胞術(shù)分選的基本原理    1.3.3 流式細(xì)胞儀熒光補(bǔ)償設(shè)置  1.4 流式細(xì)胞術(shù)的樣本設(shè)置    1.4.1 常用對(duì)照    1.4.2 一套完整的流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)樣本設(shè)置  1.5 流式細(xì)胞術(shù)的數(shù)據(jù)分析    1.5.1 數(shù)據(jù)顯示與分析    1.5.2 設(shè)門(mén)    1.5.3 數(shù)據(jù)分析中幾種常見(jiàn)圖形及分析原則第2章  抗原抗體反應(yīng)基本特點(diǎn)與流式抗體及熒光染料的選擇  2.1 抗原抗體反應(yīng)基本特點(diǎn)    2.1.1 抗原抗體結(jié)合具有特異性    2.1.2 抗原與抗體的結(jié)合是可逆的化學(xué)反應(yīng)  2.2 抗原抗體反應(yīng)影響因素    2.2.1 電解質(zhì)      2.2.2 反應(yīng)溫度與時(shí)間    2.2.3 pH值  2.3 流式抗體的選擇    2.3.1 盡量使用直標(biāo)抗體    2.3.2 注意流式抗體的應(yīng)用級(jí)別    2.3.3 抗體滴度或標(biāo)記量的選擇    2.3.4 根據(jù)流式細(xì)胞儀的類(lèi)型及熒光素的熒光光譜選擇熒光抗體      2.3.5 根據(jù)檢測(cè)物（抗原）表達(dá)量選擇熒光染料  2.4 熒光染料特性及其應(yīng)用    2.4.1 抗體標(biāo)記熒光染料特性及其應(yīng)用    2.4.2 核酸熒光染料的特性及其應(yīng)用    2.4.3 細(xì)胞膜及其他熒光探針的特性及其應(yīng)用  第3章  細(xì)胞表面分子的檢測(cè)與分析  3.1 流式細(xì)胞術(shù)在細(xì)胞表面分子的檢測(cè)與分析中的應(yīng)用    3.1.1 免疫細(xì)胞及其亞群的檢測(cè)與功能分析    3.1.2 血液系統(tǒng)細(xì)胞表面標(biāo)志的研究    3.1.3 細(xì)胞群體及細(xì)胞表面標(biāo)志變化的監(jiān)測(cè)    3.1.4 細(xì)胞表面標(biāo)志構(gòu)成性質(zhì)的分析  3.2 標(biāo)本制備    3.2.1 血液或骨髓標(biāo)本的制備    3.2.2 體液、灌洗液或懸浮培養(yǎng)細(xì)胞的制備    3.2.3 貼壁細(xì)胞的制備    3.2.4 組織標(biāo)本的制備  3.3 細(xì)胞表面分子免疫標(biāo)記方法    3.3.1 直接免疫熒光法    3.3.2 間接免疫熒光法    3.3.3 全血直接標(biāo)記法    3.3.4 直接與間接免疫熒光混合染色法  3.4 常用的免疫細(xì)胞表面標(biāo)志的檢測(cè)與分析    3.4.1 T淋巴細(xì)胞及其亞類(lèi)檢測(cè)    3.4.2 B淋巴細(xì)胞及其亞類(lèi)檢測(cè)    3.4.3 NK細(xì)胞與NKT細(xì)胞檢測(cè)第4章  細(xì)胞內(nèi)或細(xì)胞核內(nèi)抗原檢測(cè)與分析  4.1 流式細(xì)胞術(shù)分析細(xì)胞內(nèi)或細(xì)胞核內(nèi)抗原基本步驟    4.1.1 細(xì)胞固定劑和穿膜劑的選擇    4.1.2 最佳抗體濃度的選擇    4.1.3 細(xì)胞膜內(nèi)外FCR的封閉  4.2 胞內(nèi)抗原的檢測(cè)與分析——胞內(nèi)細(xì)胞因子的檢測(cè)與分析  4.3 核內(nèi)抗原的檢測(cè)與分析——調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（Treg，CD4+CD25+Foxp3+）的檢測(cè)與分析第5章  細(xì)胞凋亡的檢測(cè)與分析  5.1 樣品來(lái)源與收集  5.2 PI單染法——亞“G1”峰檢測(cè)法  5.3 Annexin-V-PI復(fù)染法  5.4 末端轉(zhuǎn)移酶標(biāo)記技術(shù)（TUNEL）  5.5 細(xì)胞周期特異性細(xì)胞凋亡的檢測(cè)（PI-Annexin-V，PA法）  第6章  DNA含量檢測(cè)與細(xì)胞周期的分析  6.1 常用DNA和RNA染料  6.2 DNA倍體分析在腫瘤診斷和治療中的意義    6.2.1 DNA倍體分析的判定標(biāo)準(zhǔn)    6.2.2 DNA倍體分析在腫瘤診斷和治療中的意義  6.3 細(xì)胞DNA檢測(cè)的內(nèi)參考標(biāo)準(zhǔn)    6.3.1 雞紅細(xì)胞    6.3.2 人淋巴細(xì)胞    6.3.3 鱉紅細(xì)胞    6.4 DNA樣品的制備和檢測(cè)    6.4.1 DNA樣品的制備和檢測(cè)的影響因素與注意事項(xiàng)      6.4.2 培養(yǎng)細(xì)胞或懸浮樣品的DNA含量檢測(cè)    6.4.3 新鮮組織細(xì)胞核的DNA含量檢測(cè)      6.4.4 石蠟包埋組織塊切片的DNA含量檢測(cè)    6.4.5 FCM在腫瘤脫落細(xì)胞學(xué)檢查的應(yīng)用  6.5 數(shù)據(jù)采集后的軟件分析    6.5.1 運(yùn)用ModFit LT進(jìn)行自動(dòng)分析      6.5.2 運(yùn)用ModFit LT進(jìn)行手動(dòng)分析      6.5.3 運(yùn)用ModFit進(jìn)行同步化分析    6.5.4 運(yùn)用ModFit LT進(jìn)行增殖分析    6.6 藥物對(duì)細(xì)胞周期的影響  6.7 流式細(xì)胞核型分析  6.8 FCM-DNA檢測(cè)的質(zhì)量控制    6.8.1 標(biāo)本采集和固定方法的質(zhì)控    6.8.2 單細(xì)胞懸液制備的質(zhì)控制備      6.8.3 石蠟包埋組織單細(xì)胞懸液制備的質(zhì)控    6.8.4 脫落細(xì)胞樣品的采集    6.8.5 細(xì)胞懸液熒光染色的質(zhì)控    6.8.6 流式細(xì)胞儀器操作技術(shù)質(zhì)控    6.8.7 流式細(xì)胞分析資料處理的質(zhì)控    6.8.8 定量熒光細(xì)胞染色技術(shù)的評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)第7章  細(xì)胞增殖的檢測(cè)與分析  7.1 以檢測(cè)細(xì)胞增殖抗原標(biāo)志物為基礎(chǔ)的分析法    7.1.1 BrdU／DNA雙參數(shù)法    7.1.2 Ki-67檢測(cè)與分析      7.1.3 PCNA／DNA雙參數(shù)法    7.1.4 Cyclins／DNA雙參數(shù)法    7.2 以檢測(cè)細(xì)胞分裂情況為基礎(chǔ)的分析法    7.2.1 檢測(cè)細(xì)胞增殖的常用熒光染料及其分析原理    7.2.2 以檢測(cè)細(xì)胞分裂情況為基礎(chǔ)的分析法的應(yīng)用第8章  細(xì)胞毒的檢測(cè)與分析  8.1 體外細(xì)胞毒檢測(cè)方法    8.1.1 CFSE／PI或PKH-67／PI檢測(cè)法    8.1.2 GFP／PI檢測(cè)法——以NK殺傷活性為例    8.2 體內(nèi)CTL細(xì)胞毒檢測(cè)方法——CFSE標(biāo)記法第9章  可溶性蛋白質(zhì)分子的檢測(cè)與分析  9.1 可溶性蛋白質(zhì)分子的定性、定量檢測(cè)與分析  9.2 可溶性蛋白質(zhì)分子的定量檢測(cè)與分析——液相芯片技術(shù)（LabMAPTM和CBA技術(shù)）    9.2.1 液相芯片技術(shù)的基本原理    9.2.2 液相芯片的技術(shù)優(yōu)勢(shì)    9.2.3 液相芯片的主要實(shí)驗(yàn)步驟    9.2.4 LabMAPTM技術(shù)    9.2.5 BD微球陣列分析技術(shù)（CBA技術(shù)）第10章  報(bào)告基因的檢測(cè)和分析  10.1 報(bào)告基因GFP及其突變體  10.2 報(bào)告基因GFP及其突變體在生物學(xué)中的應(yīng)用    10.2.1 篩選新的藥物    10.2.2 發(fā)育分子機(jī)理研究    10.2.3 細(xì)胞篩選或分選標(biāo)記物      10.2.4 基因產(chǎn)物功能及基因定位研究    10.2.5 細(xì)胞功能活動(dòng)的動(dòng)態(tài)觀察    10.2.6 細(xì)胞、分子之間的相互作用研究      10.2.7 體內(nèi)示蹤與應(yīng)用    10.2.8 在RNA干擾與核酶體研究中的應(yīng)用    10.2.9 免疫反應(yīng)示蹤標(biāo)志物    10.2.10 在細(xì)胞凋亡相關(guān)基因研究中的應(yīng)用  10.3 報(bào)告基因（GFP）的檢測(cè)與分析    10.3.1 報(bào)告基因轉(zhuǎn)染效率和（或）GFP融合蛋白表達(dá)的檢測(cè)與分析      10.3.2 GFP融合基因的細(xì)胞周期檢測(cè)與分析——GFP／PI雙標(biāo)記法    10.3.3 在細(xì)胞凋亡相關(guān)基因研究中的應(yīng)用一GFP／Annexin-V／PI三色標(biāo)記法第11章  其他流式細(xì)胞術(shù)應(yīng)用技術(shù)    11.1 胞內(nèi)活性氧水平的檢測(cè)與分析    11.1.1 DCFH-DA單染色法      11.1.2 DCFH／PI染色法    11.1.3 雙氫羅丹明（Rhodamine）123染色法  11.2 細(xì)胞膜電位的檢測(cè)與分析    11.2.1 檢測(cè)細(xì)胞膜電位的染料及其檢測(cè)原理    11.2.2 Cyanine（花青苷）染色法    11.2.3 羅丹明123染色法    11.2.4 JC-1染色法  11.3 細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度的檢測(cè)與分析    11.3.1 檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度的熒光探針與檢測(cè)原理    11.3.2 細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度的檢測(cè)與分析——Fluo-3／AM染色法    11.4 熒光共振能量轉(zhuǎn)移技術(shù)及應(yīng)用  11.5 干細(xì)胞（SP）的檢測(cè)——Hoechst33342法第12章  流式細(xì)胞儀的發(fā)展和商品化儀器  12.1 流式細(xì)胞儀的發(fā)展歷史和趨勢(shì)    12.1.1 專(zhuān)業(yè)化的流式細(xì)胞儀紛紛面世    12.1.2 儀器全面自動(dòng)化    12.1.3 多色多參數(shù)分析迅速發(fā)展  12.2 流式細(xì)胞儀商品儀器概述    12.2.1 激發(fā)光源及其熒光染料      12.2.2 液流系統(tǒng)    12.2.3 信號(hào)檢測(cè)和光電轉(zhuǎn)換    12.2.4 分選系統(tǒng)    12.2.5 數(shù)據(jù)處理與分析    12.2.6 流式微球芯片    12.2.7 圖像流式細(xì)胞儀  12.3 流式細(xì)胞儀的主要技術(shù)指標(biāo)    12.3.1 熒光分辨率    12.3.2 熒光靈敏度    12.3.3 前向角散射光靈敏度    12.3.4 前向角散射光分辨率    12.3.5 分析速度    12.3.6 分選指標(biāo)附錄1 常見(jiàn)流式細(xì)胞術(shù)及熒光顯微鏡熒光染料激發(fā)波長(zhǎng)與發(fā)射波長(zhǎng)快查表附錄2　2.1 常用溶液的配制  2.2 Hanks液的配制  2.3 磷酸鹽緩沖液（PB）的配制參考文獻(xiàn)

章節(jié)摘錄

　　第1章　流式細(xì)胞儀基本結(jié)構(gòu)與原理　　1.1 流式細(xì)胞儀基本結(jié)構(gòu)與功能　　1.1.1 流式細(xì)胞儀基本結(jié)構(gòu)　　流式細(xì)胞儀（flow cytometer,FCM）是集現(xiàn)代物理電子技術(shù)、激光技術(shù)、計(jì)算機(jī)技術(shù)于一體的先進(jìn)科學(xué)技術(shù)設(shè)備，是生命科學(xué)研究領(lǐng)域中先進(jìn)的儀器之一。概括來(lái)說(shuō)，流式細(xì)胞術(shù)就是利用流式細(xì)胞儀對(duì)處于快速直線流動(dòng)狀態(tài)中的單列細(xì)胞或生物顆料進(jìn)行逐個(gè)

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