分子雜交理論與技術(shù)

前言

　　21世紀(jì)是生命科學(xué)飛速發(fā)展的時(shí)代。如果說20世紀(jì)后半葉是信息時(shí)代，那么21世紀(jì)上半葉，生命科學(xué)將成為主宰。隨著我國(guó)加入WT0后與世界科技日益接軌，技術(shù)的競(jìng)爭(zhēng)已呈現(xiàn)出其核心地位和作用。正是在此背景下，為適應(yīng)我國(guó)21世紀(jì)生物技術(shù)發(fā)展和需求，科學(xué)出版社組織編寫了這套融基礎(chǔ)理論和實(shí)踐技術(shù)為一體、獨(dú)具特色、主要面向一線科技人員的學(xué)術(shù)著作——《21世紀(jì)生物技術(shù)叢書》。本套叢書共有八本，包括《組織細(xì)胞化學(xué)理論與技術(shù)》、《神經(jīng)細(xì)胞培養(yǎng)理論與技術(shù)》、《蛋白質(zhì)理論與技術(shù)》、《分子雜交理論與技術(shù)》、《PcR理論與技術(shù)》、《基因克隆理論與技術(shù)》、《抗體理論與技術(shù)》、《干細(xì)胞理論與技術(shù)》。自2005年3月本套叢書問世以來，即得到了廣大生物技術(shù)科技工作者的喜愛，2006年1月即進(jìn)行了重印。本套叢書對(duì)滿足日益擴(kuò)大的研究生實(shí)踐需求，以及我國(guó)21世紀(jì)生物技術(shù)的普及和發(fā)展起到了積極的促進(jìn)作用。　　由于生物技術(shù)發(fā)展迅速和需求日益擴(kuò)大，本套叢書于2009年再版。第二版在第一版的基礎(chǔ)上，主要對(duì)實(shí)驗(yàn)技術(shù)進(jìn)行了全面增補(bǔ)和修訂，新增內(nèi)容20余章。補(bǔ)充了神經(jīng)形態(tài)示蹤、腫瘤干細(xì)胞培養(yǎng)、神經(jīng)干細(xì)胞移植、轉(zhuǎn)基因干細(xì)胞構(gòu)建、抗體封閉、細(xì)胞凋亡染色、免疫熒光染色、蛋白質(zhì)組和基因組等實(shí)用技術(shù)，并對(duì)各技術(shù)的相關(guān)實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)進(jìn)行了更全面的總結(jié)。叢書從形態(tài)、細(xì)胞、分子生物學(xué)三個(gè)層面介紹了目前常用生物技術(shù)的基本理論、進(jìn)展及其相關(guān)技術(shù)與應(yīng)用。從培養(yǎng)科學(xué)思維能力和科研工作能力的目標(biāo)出發(fā)，以實(shí)用性和可操作性為目的，面向我國(guó)日益增多的研究生和廣大的一線科研人員。在編寫方式和風(fēng)格方面。力求強(qiáng)調(diào)基本概念和理論的闡述，注重基本技術(shù)的實(shí)踐，并提供了大量原版彩圖及實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn)體會(huì)，使叢書更具實(shí)用價(jià)值?！　”咎讌矔晌覈?guó)神經(jīng)科學(xué)青年專家王廷華教授牽頭，邀請(qǐng)國(guó)內(nèi)外一批知名專家教授參加編寫和審閱。本套叢書是全體參編人員實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)的總結(jié)。對(duì)從事科研的研究生和一線研究人員有很好的參考價(jià)值。由于時(shí)間有限，加之科學(xué)技術(shù)發(fā)展迅速，錯(cuò)誤和不足之處在所難免，懇請(qǐng)各位讀者批評(píng)指正?！　≈当咎讌矔霭嬷H，感謝為我國(guó)生物技術(shù)及科學(xué)發(fā)展孜孜不倦、奉獻(xiàn)一生的老一輩科學(xué)家，是他們的指導(dǎo)、培養(yǎng)和杰出工作為我國(guó)中青年一代的發(fā)展奠定了基礎(chǔ)。感謝國(guó)內(nèi)外一批知名專家教授組成的編審委員會(huì)對(duì)叢書的認(rèn)真審閱，感謝編者們所付出的辛勤勞動(dòng)。感謝中國(guó)解剖學(xué)會(huì)對(duì)本套叢書的組織工作給予的支持。感謝各位同道給予的鼓勵(lì)和關(guān)心。

內(nèi)容概要

《分子雜交理論與技術(shù)》是《21世紀(jì)生物技術(shù)叢書》的一個(gè)分冊(cè)。本書于2005年出版，2006年進(jìn)行二次印刷。隨著當(dāng)今生物技術(shù)的迅速發(fā)展和需求的日益擴(kuò)大，現(xiàn)予以再版。    全書系統(tǒng)地介紹了分子雜交的基本理論。對(duì)地高辛原位雜交技術(shù)、熒光原位雜交技術(shù)、抑制消減雜交、輻射性雜交、反義核酸分子雜交、基因芯片理論與進(jìn)展作了詳細(xì)闡述。對(duì)Southern印跡雜交、Northern印跡雜交、Western印跡雜交、cRNA探針原位雜交、寡核苷酸探針原位雜交以及原位分子雜交雙標(biāo)技術(shù)給出了具體的實(shí)例分析。    本書第二版在第一版的基礎(chǔ)上增加了實(shí)驗(yàn)技術(shù)等內(nèi)容，更具實(shí)用價(jià)值和可操作性，可供生物醫(yī)學(xué)專業(yè)研究生、本科生以及從事分子雜交的科研人員閱讀和實(shí)驗(yàn)時(shí)參考。

書籍目錄

第一章 分子雜交概論　第一節(jié) 分子雜交技術(shù)及其意義　第二節(jié) 核酸分子雜交　第三節(jié) 核酸探針第二章 原位雜交技術(shù)的基本理論　第一節(jié) 原位雜交技術(shù)的發(fā)展及研究歷史　第二節(jié) 原位雜交技術(shù)的基本方法和主要內(nèi)容第三章 地高辛原位雜交技術(shù)　第一節(jié) 實(shí)驗(yàn)原理　第二節(jié) 地高辛原位雜交技術(shù)的研究歷史與發(fā)展　第三節(jié) 實(shí)驗(yàn)所需設(shè)備、試劑及配制　第四節(jié) 詳細(xì)實(shí)驗(yàn)步驟、結(jié)果及分析　第五節(jié) cRNA探針原位雜交實(shí)驗(yàn)中存在的問題和經(jīng)驗(yàn)體會(huì)第四章 熒光原位雜交技術(shù)　第一節(jié) 實(shí)驗(yàn)原理　第二節(jié) 熒光原位雜交技術(shù)的研究歷史與發(fā)展　第三節(jié) 操作步驟　第四節(jié) 實(shí)驗(yàn)所需設(shè)備、試劑及配制　第五節(jié) 詳細(xì)實(shí)驗(yàn)步驟、結(jié)果及分析　第六節(jié) 實(shí)驗(yàn)中存在的問題和經(jīng)驗(yàn)體會(huì)第五章 抑制消減雜交　第一節(jié) 抑制消減雜交的概念　第二節(jié) 抑制消減雜交產(chǎn)生的背景及內(nèi)涵　第三節(jié) 抑制消減雜交的原理　第四節(jié) 抑制消減雜交實(shí)驗(yàn)操作步驟　第五節(jié) 結(jié)果與分析　第六節(jié) 問題與解答第六章 輻射性雜交　第一節(jié) 輻射性雜交的基本原理與發(fā)展歷程　第二節(jié) 構(gòu)建輻射性雜交圖譜的方法　第三節(jié) 輻射性雜交圖譜的應(yīng)用第七章 反義核酸分子雜交技術(shù)及其應(yīng)用　第一節(jié) 反義RNA　第二節(jié) 反義DNA　第三節(jié) 反義核酸的特性　第四節(jié) 人工合成反義寡核苷酸的類型　第五節(jié) 反義寡核苷酸的化學(xué)改造　第六節(jié) 制備反義寡核苷酸要考慮的因素　第七節(jié) 反義寡聚核苷酸導(dǎo)入細(xì)胞的方法　第八節(jié) 核酶　第九節(jié) 反義核酸分子雜交技術(shù)的應(yīng)用第八章 基因芯片固相分子雜交技術(shù)理論與進(jìn)展　第一節(jié) 基因芯片的制備方法　第二節(jié) 基因芯片檢測(cè)的樣品制備　第三節(jié) 基因芯片雜交　第四節(jié) 基因芯片檢測(cè)原理　第五節(jié) 基因芯片雜交的結(jié)果分析　第六節(jié) 基因芯片的應(yīng)用　第七節(jié) 國(guó)內(nèi)外基因芯片研究及開發(fā)情況第九章 基因芯片分子雜交技術(shù)在腦出血周圍帶基因組分析中的應(yīng)用　第一節(jié) 實(shí)驗(yàn)原理　第二節(jié) 材料和方法　第三節(jié) 實(shí)驗(yàn)結(jié)果　第四節(jié) 注意事項(xiàng)與經(jīng)驗(yàn)體會(huì)第十章 Southern印跡雜交　第一節(jié) 實(shí)驗(yàn)原理　第二節(jié) 實(shí)驗(yàn)方法　第三節(jié) 實(shí)驗(yàn)結(jié)果及注意事項(xiàng)第十一章 Northern印跡雜交　第一節(jié) 實(shí)驗(yàn)原理　第二節(jié) 實(shí)驗(yàn)方法第十二章 Western雜交　第一節(jié) 蛋白質(zhì)樣品的制備　第二節(jié) 蛋白質(zhì)樣品的分離——不連續(xù)SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳　第三節(jié) 轉(zhuǎn)移電泳　第四節(jié) 免疫檢測(cè)……第十三章 cRNA探針原位分子雜交單、雙標(biāo)技術(shù)的應(yīng)用第十四章 寡核苷酸探針原位雜交技術(shù)檢測(cè)大鼠脊髓中NGF家族及其受體mRNA的表達(dá)第十五章 Western blot技術(shù)在檢測(cè)全橫斷脊髓損傷大鼠神經(jīng)干細(xì)胞移植后NGF變化中的應(yīng)用第十六章 Northern印跡雜交檢測(cè)小鼠乳房腫瘤組織的總RNA第十七章 基因芯片技術(shù)檢測(cè)鎮(zhèn)刺促進(jìn)脊髓損傷修復(fù)中的基因表達(dá)彩圖

章節(jié)摘錄

　　一、地高辛原位雜交技術(shù)與免疫組織化學(xué)雙標(biāo)技術(shù)地高辛原位雜交技術(shù)和免疫組化技術(shù)都可在組織、細(xì)胞原位檢測(cè)基因表達(dá)。所不同的是，免疫組化檢測(cè)的是組織、細(xì)胞內(nèi)的抗原／蛋白成分，即在蛋白水平觀察基因的表達(dá)；地高辛原位雜交檢測(cè)的則是DNA或RNA，即在核酸水平觀察基因的表達(dá)。將這兩種方法聯(lián)合應(yīng)用即派生出地高辛原位雜交與免疫組織化學(xué)雙標(biāo)技術(shù)，利用該技術(shù)可在同一細(xì)胞中顯示出某種mlRNA或相應(yīng)的蛋白、多肽及其他抗原；既能提示細(xì)胞內(nèi)是否存在特定的基因或該基因轉(zhuǎn)錄的tuRNA。又能證明是否存在由該基因指導(dǎo)下合成的蛋白質(zhì)，從而可更好地了解某一基因的轉(zhuǎn)錄和蛋白、多肽合成的動(dòng)力學(xué)，為進(jìn)一步深入探討細(xì)胞遺傳信息的表達(dá)提供了方便。與單一地高辛原位雜交技術(shù)或單一免疫組化技術(shù)相比，地高辛原位雜交與免疫組織化學(xué)雙標(biāo)技術(shù)可用于分析同一細(xì)胞，克服了相鄰切片上分別做原位雜交和免疫組化所產(chǎn)生的空間誤差和樣本誤差。此技術(shù)同樣可用于石蠟切片、細(xì)胞培養(yǎng)標(biāo)本及涂片標(biāo)本。因此，具有很大的應(yīng)用潛力?！　〉馗咝猎浑s交與免疫組織化學(xué)雙標(biāo)技術(shù)最突出的優(yōu)點(diǎn)是，能夠?qū)δ撤N基因在組織細(xì)胞內(nèi)的分布進(jìn)行精確定位。將該技術(shù)與其他能夠?qū)虮磉_(dá)進(jìn)行定量分析的技術(shù)如Westelnblotting相結(jié)合，人們可了解并掌握與各種疾病具有密切聯(lián)系的因子在疾病發(fā)生發(fā)展過程中的表達(dá)變化規(guī)律及表達(dá)變化水平，這些因子可能對(duì)疾病的發(fā)生發(fā)展起促進(jìn)作用（即有害因子），也可能對(duì)疾病的發(fā)生發(fā)展起抑制作用（即有益因子），從而為人類揭示疾病的本質(zhì)、探明與疾病發(fā)展有關(guān)的各種因素之間的內(nèi)在聯(lián)系提供可能，并由此尋找到攻克疾病、改善病理狀態(tài)的有效線索及方法。另一方面，當(dāng)人們已經(jīng)明確某種因子對(duì)于某種疾病是有害因素時(shí)，若通過該技術(shù)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)某種外源性物質(zhì)（如藥物等）能夠有效阻止或抑制這種有害因子在該疾病發(fā)展過程中的基因表達(dá)，則提示這種外源性物質(zhì)可能對(duì)治療該疾病有效，反之亦然。可見，該技術(shù)的應(yīng)用也為人們對(duì)藥物或治療方法進(jìn)行初步篩選甄別提供了可能。　　二、地高辛原位雜交技術(shù)在FISH技術(shù)中的應(yīng)用　　FISH技術(shù)，即熒光原位雜交技術(shù)，在基因定位、基因圖譜的繪制以及染色體結(jié)構(gòu)的分析中發(fā)揮著極為重要的作用。在FISH技術(shù)中，一個(gè)重要的環(huán)節(jié)是對(duì)探針進(jìn)行有效的標(biāo)記。FISH探針標(biāo)記的質(zhì)量直接影響著對(duì)雜交體的熒光檢測(cè)效果。目前，F(xiàn)ISH探針的標(biāo)記分為直接標(biāo)記和間接標(biāo)記兩種。直接標(biāo)記法是將探針直接連上各種熒光分子而得，這種方法雖然較簡(jiǎn)便、快速、干擾背景也較小，但雜交信號(hào)弱，因而不夠靈敏。為了獲得較好的FISH雜交信號(hào)，增加FISH技術(shù)的靈敏度，人們用地高辛等中間分子標(biāo)記探針（即間接標(biāo)記法），然后用該探針與靶DNA先進(jìn)行原位雜交后，再用與該地高辛等中間分子的親和物或抗體偶聯(lián)的熒光分子進(jìn)行檢測(cè)，這樣可放大被檢測(cè)信號(hào)，增加FISH技術(shù)的敏感性。

圖書封面

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