分子雜交理論與技術

前言

　　21世紀是生命科學飛速發(fā)展的時代。如果說20世紀后半葉是信息時代，那么21世紀上半葉，生命科學將成為主宰。隨著我國加入WT0后與世界科技日益接軌，技術的競爭已呈現(xiàn)出其核心地位和作用。正是在此背景下，為適應我國21世紀生物技術發(fā)展和需求，科學出版社組織編寫了這套融基礎理論和實踐技術為一體、獨具特色、主要面向一線科技人員的學術著作——《21世紀生物技術叢書》。本套叢書共有八本，包括《組織細胞化學理論與技術》、《神經(jīng)細胞培養(yǎng)理論與技術》、《蛋白質(zhì)理論與技術》、《分子雜交理論與技術》、《PcR理論與技術》、《基因克隆理論與技術》、《抗體理論與技術》、《干細胞理論與技術》。自2005年3月本套叢書問世以來，即得到了廣大生物技術科技工作者的喜愛，2006年1月即進行了重印。本套叢書對滿足日益擴大的研究生實踐需求，以及我國21世紀生物技術的普及和發(fā)展起到了積極的促進作用?！　∮捎谏锛夹g發(fā)展迅速和需求日益擴大，本套叢書于2009年再版。第二版在第一版的基礎上，主要對實驗技術進行了全面增補和修訂，新增內(nèi)容20余章。補充了神經(jīng)形態(tài)示蹤、腫瘤干細胞培養(yǎng)、神經(jīng)干細胞移植、轉(zhuǎn)基因干細胞構建、抗體封閉、細胞凋亡染色、免疫熒光染色、蛋白質(zhì)組和基因組等實用技術，并對各技術的相關實踐經(jīng)驗進行了更全面的總結。叢書從形態(tài)、細胞、分子生物學三個層面介紹了目前常用生物技術的基本理論、進展及其相關技術與應用。從培養(yǎng)科學思維能力和科研工作能力的目標出發(fā)，以實用性和可操作性為目的，面向我國日益增多的研究生和廣大的一線科研人員。在編寫方式和風格方面。力求強調(diào)基本概念和理論的闡述，注重基本技術的實踐，并提供了大量原版彩圖及實驗經(jīng)驗體會，使叢書更具實用價值?！　”咎讌矔晌覈窠?jīng)科學青年專家王廷華教授牽頭，邀請國內(nèi)外一批知名專家教授參加編寫和審閱。本套叢書是全體參編人員實踐經(jīng)驗的總結。對從事科研的研究生和一線研究人員有很好的參考價值。由于時間有限，加之科學技術發(fā)展迅速，錯誤和不足之處在所難免，懇請各位讀者批評指正?！　≈当咎讌矔霭嬷H，感謝為我國生物技術及科學發(fā)展孜孜不倦、奉獻一生的老一輩科學家，是他們的指導、培養(yǎng)和杰出工作為我國中青年一代的發(fā)展奠定了基礎。感謝國內(nèi)外一批知名專家教授組成的編審委員會對叢書的認真審閱，感謝編者們所付出的辛勤勞動。感謝中國解剖學會對本套叢書的組織工作給予的支持。感謝各位同道給予的鼓勵和關心。

內(nèi)容概要

《分子雜交理論與技術》是《21世紀生物技術叢書》的一個分冊。本書于2005年出版，2006年進行二次印刷。隨著當今生物技術的迅速發(fā)展和需求的日益擴大，現(xiàn)予以再版。    全書系統(tǒng)地介紹了分子雜交的基本理論。對地高辛原位雜交技術、熒光原位雜交技術、抑制消減雜交、輻射性雜交、反義核酸分子雜交、基因芯片理論與進展作了詳細闡述。對Southern印跡雜交、Northern印跡雜交、Western印跡雜交、cRNA探針原位雜交、寡核苷酸探針原位雜交以及原位分子雜交雙標技術給出了具體的實例分析。    本書第二版在第一版的基礎上增加了實驗技術等內(nèi)容，更具實用價值和可操作性，可供生物醫(yī)學專業(yè)研究生、本科生以及從事分子雜交的科研人員閱讀和實驗時參考。

書籍目錄

第一章 分子雜交概論　第一節(jié) 分子雜交技術及其意義　第二節(jié) 核酸分子雜交　第三節(jié) 核酸探針第二章 原位雜交技術的基本理論　第一節(jié) 原位雜交技術的發(fā)展及研究歷史　第二節(jié) 原位雜交技術的基本方法和主要內(nèi)容第三章 地高辛原位雜交技術　第一節(jié) 實驗原理　第二節(jié) 地高辛原位雜交技術的研究歷史與發(fā)展　第三節(jié) 實驗所需設備、試劑及配制　第四節(jié) 詳細實驗步驟、結果及分析　第五節(jié) cRNA探針原位雜交實驗中存在的問題和經(jīng)驗體會第四章 熒光原位雜交技術　第一節(jié) 實驗原理　第二節(jié) 熒光原位雜交技術的研究歷史與發(fā)展　第三節(jié) 操作步驟　第四節(jié) 實驗所需設備、試劑及配制　第五節(jié) 詳細實驗步驟、結果及分析　第六節(jié) 實驗中存在的問題和經(jīng)驗體會第五章 抑制消減雜交　第一節(jié) 抑制消減雜交的概念　第二節(jié) 抑制消減雜交產(chǎn)生的背景及內(nèi)涵　第三節(jié) 抑制消減雜交的原理　第四節(jié) 抑制消減雜交實驗操作步驟　第五節(jié) 結果與分析　第六節(jié) 問題與解答第六章 輻射性雜交　第一節(jié) 輻射性雜交的基本原理與發(fā)展歷程　第二節(jié) 構建輻射性雜交圖譜的方法　第三節(jié) 輻射性雜交圖譜的應用第七章 反義核酸分子雜交技術及其應用　第一節(jié) 反義RNA　第二節(jié) 反義DNA　第三節(jié) 反義核酸的特性　第四節(jié) 人工合成反義寡核苷酸的類型　第五節(jié) 反義寡核苷酸的化學改造　第六節(jié) 制備反義寡核苷酸要考慮的因素　第七節(jié) 反義寡聚核苷酸導入細胞的方法　第八節(jié) 核酶　第九節(jié) 反義核酸分子雜交技術的應用第八章 基因芯片固相分子雜交技術理論與進展　第一節(jié) 基因芯片的制備方法　第二節(jié) 基因芯片檢測的樣品制備　第三節(jié) 基因芯片雜交　第四節(jié) 基因芯片檢測原理　第五節(jié) 基因芯片雜交的結果分析　第六節(jié) 基因芯片的應用　第七節(jié) 國內(nèi)外基因芯片研究及開發(fā)情況第九章 基因芯片分子雜交技術在腦出血周圍帶基因組分析中的應用　第一節(jié) 實驗原理　第二節(jié) 材料和方法　第三節(jié) 實驗結果　第四節(jié) 注意事項與經(jīng)驗體會第十章 Southern印跡雜交　第一節(jié) 實驗原理　第二節(jié) 實驗方法　第三節(jié) 實驗結果及注意事項第十一章 Northern印跡雜交　第一節(jié) 實驗原理　第二節(jié) 實驗方法第十二章 Western雜交　第一節(jié) 蛋白質(zhì)樣品的制備　第二節(jié) 蛋白質(zhì)樣品的分離——不連續(xù)SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳　第三節(jié) 轉(zhuǎn)移電泳　第四節(jié) 免疫檢測……第十三章 cRNA探針原位分子雜交單、雙標技術的應用第十四章 寡核苷酸探針原位雜交技術檢測大鼠脊髓中NGF家族及其受體mRNA的表達第十五章 Western blot技術在檢測全橫斷脊髓損傷大鼠神經(jīng)干細胞移植后NGF變化中的應用第十六章 Northern印跡雜交檢測小鼠乳房腫瘤組織的總RNA第十七章 基因芯片技術檢測鎮(zhèn)刺促進脊髓損傷修復中的基因表達彩圖

章節(jié)摘錄

　　一、地高辛原位雜交技術與免疫組織化學雙標技術地高辛原位雜交技術和免疫組化技術都可在組織、細胞原位檢測基因表達。所不同的是，免疫組化檢測的是組織、細胞內(nèi)的抗原／蛋白成分，即在蛋白水平觀察基因的表達；地高辛原位雜交檢測的則是DNA或RNA，即在核酸水平觀察基因的表達。將這兩種方法聯(lián)合應用即派生出地高辛原位雜交與免疫組織化學雙標技術，利用該技術可在同一細胞中顯示出某種mlRNA或相應的蛋白、多肽及其他抗原；既能提示細胞內(nèi)是否存在特定的基因或該基因轉(zhuǎn)錄的tuRNA。又能證明是否存在由該基因指導下合成的蛋白質(zhì)，從而可更好地了解某一基因的轉(zhuǎn)錄和蛋白、多肽合成的動力學，為進一步深入探討細胞遺傳信息的表達提供了方便。與單一地高辛原位雜交技術或單一免疫組化技術相比，地高辛原位雜交與免疫組織化學雙標技術可用于分析同一細胞，克服了相鄰切片上分別做原位雜交和免疫組化所產(chǎn)生的空間誤差和樣本誤差。此技術同樣可用于石蠟切片、細胞培養(yǎng)標本及涂片標本。因此，具有很大的應用潛力?！　〉馗咝猎浑s交與免疫組織化學雙標技術最突出的優(yōu)點是，能夠?qū)δ撤N基因在組織細胞內(nèi)的分布進行精確定位。將該技術與其他能夠?qū)虮磉_進行定量分析的技術如Westelnblotting相結合，人們可了解并掌握與各種疾病具有密切聯(lián)系的因子在疾病發(fā)生發(fā)展過程中的表達變化規(guī)律及表達變化水平，這些因子可能對疾病的發(fā)生發(fā)展起促進作用（即有害因子），也可能對疾病的發(fā)生發(fā)展起抑制作用（即有益因子），從而為人類揭示疾病的本質(zhì)、探明與疾病發(fā)展有關的各種因素之間的內(nèi)在聯(lián)系提供可能，并由此尋找到攻克疾病、改善病理狀態(tài)的有效線索及方法。另一方面，當人們已經(jīng)明確某種因子對于某種疾病是有害因素時，若通過該技術檢測發(fā)現(xiàn)某種外源性物質(zhì)（如藥物等）能夠有效阻止或抑制這種有害因子在該疾病發(fā)展過程中的基因表達，則提示這種外源性物質(zhì)可能對治療該疾病有效，反之亦然。可見，該技術的應用也為人們對藥物或治療方法進行初步篩選甄別提供了可能?！　《⒌馗咝猎浑s交技術在FISH技術中的應用　　FISH技術，即熒光原位雜交技術，在基因定位、基因圖譜的繪制以及染色體結構的分析中發(fā)揮著極為重要的作用。在FISH技術中，一個重要的環(huán)節(jié)是對探針進行有效的標記。FISH探針標記的質(zhì)量直接影響著對雜交體的熒光檢測效果。目前，F(xiàn)ISH探針的標記分為直接標記和間接標記兩種。直接標記法是將探針直接連上各種熒光分子而得，這種方法雖然較簡便、快速、干擾背景也較小，但雜交信號弱，因而不夠靈敏。為了獲得較好的FISH雜交信號，增加FISH技術的靈敏度，人們用地高辛等中間分子標記探針（即間接標記法），然后用該探針與靶DNA先進行原位雜交后，再用與該地高辛等中間分子的親和物或抗體偶聯(lián)的熒光分子進行檢測，這樣可放大被檢測信號，增加FISH技術的敏感性。

圖書封面

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