現(xiàn)代藥理實(shí)驗(yàn)方法（上下冊(cè)）

內(nèi)容概要

　　《現(xiàn)代藥理實(shí)驗(yàn)方法》是一部集中了現(xiàn)代藥理學(xué)研究方法和技術(shù)的專著，該書收集了現(xiàn)代藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)方法，包括動(dòng)物實(shí)驗(yàn)方法、分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)方法、細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)方法、生物化學(xué)方法、儀器分析方法、電生理技術(shù)方法、放射性核素標(biāo)記技術(shù)方法等，比較系統(tǒng)地介紹了現(xiàn)代藥理研究中應(yīng)用的各種技術(shù)方法，為藥理學(xué)工作者提供了一部內(nèi)容豐富，實(shí)用性強(qiáng)的工具書，對(duì)于提高我國藥理學(xué)研究水平發(fā)揮了積極的作用。

書籍目錄

上冊(cè)
　第一編 分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)方法與技術(shù)
　第二編 細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)方法與技術(shù)
　第三編 信息傳遞的研究方法和技術(shù)
　第四編 鈣研究方法與技術(shù)
　第五編 放射配體受體結(jié)合實(shí)驗(yàn)方法與技術(shù)
　第六編 神經(jīng)遞質(zhì)、肽、神經(jīng)營養(yǎng)因子的研究方法與技術(shù)
　第七編 免疫學(xué)試驗(yàn)方法與技術(shù)
　第八篇 磷脂測定方法及其在藥理學(xué)研究中的應(yīng)用
　第九篇 一氧化氮、一氧化碳及其合成酶的研究方法與技術(shù)
　第十篇 激素的研究方法與技術(shù)
　第十一篇 抗氧化及自由基實(shí)驗(yàn)方法與技術(shù)
　第十二篇 線粒體研究方法
　第十三篇 電生理實(shí)驗(yàn)方法
　第十四篇 核磁共振實(shí)驗(yàn)技術(shù)在藥理學(xué)研究中的應(yīng)用
下冊(cè)
　第十五篇 微陣列基因分析在新藥研發(fā)中的應(yīng)用
　第十六篇 熒光可視化實(shí)驗(yàn)方法的應(yīng)用
　第十七篇 藥物代謝實(shí)驗(yàn)方法和技術(shù)
　第十八篇 行為藥理實(shí)驗(yàn)方法與技術(shù)
　第十九篇 抗帕金森病實(shí)驗(yàn)方法與技術(shù)
　第二十篇 抗衰老及阿爾茨海默病的藥物研究方法
　第二十一篇 腦卒中的實(shí)驗(yàn)方法與技術(shù)
　第二十二篇 抗血栓形成及相關(guān)研究方法與技術(shù)
　第二十三篇 動(dòng)脈粥樣硬化與心肌缺血預(yù)適應(yīng)研究方法
　第二十四篇 治療糖尿病藥物藥理實(shí)驗(yàn)方法與技術(shù)
　第二十五篇 腫瘤藥理實(shí)驗(yàn)方法與技術(shù)
　第二十六篇 抗炎、抗過敏及肝損傷實(shí)驗(yàn)方法與技術(shù)
　第二十七篇 組織器官纖維化的研究方法與技術(shù)
　第二十八篇 計(jì)劃生育藥物研究方法與技術(shù)
　第二十九篇 抗菌、抗病毒藥物的實(shí)驗(yàn)方法與技術(shù)
　第三十篇 藥物毒理學(xué)實(shí)驗(yàn)方法與技術(shù)
　第三十一篇 時(shí)間藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)方法
　第三十二篇 藥物的化學(xué)結(jié)構(gòu)與活性的關(guān)系
　第三十三篇 藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)與數(shù)據(jù)處理技術(shù)
　第三十四篇 基于受體結(jié)構(gòu)的藥物分子設(shè)計(jì)
　第三十五篇 興奮劑檢測方法與技術(shù)
　第三十六篇 新藥研究開發(fā)過程及有關(guān)原則、技術(shù)與方法

章節(jié)摘錄

　　一、組織與細(xì)胞的固定　　進(jìn)行原位雜交的組織和細(xì)胞必須經(jīng)過固定處理。理想的原位雜交的固定液應(yīng)具備：①能很好地保持組織細(xì)胞的形態(tài)；②對(duì)核酸無抽提、修飾與降解作用；③不改變核酸在組織細(xì)胞內(nèi)的定位；④不影響核酸與探針的雜交；⑤對(duì)雜交信號(hào)無遮蔽作用。常用的固定液有10%甲醛、4010多聚甲醛、乙醇：冰醋酸（3：1）、戊二醛、Carnoy固定液、Bouin固定液等，各種固定液有不同的優(yōu)缺點(diǎn)。4%多聚甲醛是應(yīng)用最廣泛的固定液之一，它能較好地保持組織或細(xì)胞內(nèi)的RNA，固定時(shí)間為10~15min時(shí)RNA含量比較恒定。過度延長固定時(shí)間會(huì)引起細(xì)胞質(zhì)內(nèi)生物大分子的過度交聯(lián)，影響探針的穿透力，降低雜交效率。固定時(shí)間亦是影響原位雜交的重要因素，需根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)摸索出適于自己要求的固定液及固定時(shí)間?！　≡浑s交在載片上進(jìn)行，載片的處理對(duì)雜交的成功至關(guān)重要，必須保持清潔，且不能有任何核酸酶的污染。為防止雜交及檢測過程中組織或細(xì)胞從載片上脫落，可用新鮮配制的1mg／ml多聚賴氨酸液涂于載片上，作為細(xì)胞和組織的黏附劑，待其干燥后再進(jìn)行細(xì)胞涂片或組織切片。明膠液也是一種常用的黏附劑?！　《?、組織和細(xì)胞雜交前的預(yù)處理　　原位雜交同樣遵循核酸雜交的一般原則，但與濾膜雜交不同的是組織細(xì)胞中的核酸都與細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)結(jié)合，以核蛋白體的形式存在于細(xì)胞中，固定過程中固定液的交聯(lián)作用使細(xì)胞中的各種生物大分子形成網(wǎng)絡(luò)，影響探針的穿透，阻礙雜交體的形成，雜交前必須用去垢劑或／和蛋白酶對(duì)組織細(xì)胞進(jìn)行部分消化，以去除核酸表面的蛋白質(zhì)，使探針易與靶核酸雜交。Triton-X-100和SDS是常用的去垢劑。常用的蛋白酶是蛋白酶K，其濃度及消化時(shí)間在不同的組織細(xì)胞中相差極大，可通過預(yù)實(shí)驗(yàn)確定適當(dāng)?shù)臐舛燃跋瘯r(shí)間，要注意防止過度消化導(dǎo)致細(xì)胞結(jié)構(gòu)的破壞和核酸從載片上的脫落，從而導(dǎo)致假陰性結(jié)果。　　三、探針的選擇及標(biāo)記　　原位雜交的探針可以是單、雙鏈DNA、RNA或寡核苷酸，長度以50~300hp為宜，此長度的探針在細(xì)胞中的穿透力好，雜交效率高，某些特殊情況，如染色體基因定位或?yàn)槭固结樈宦?lián)成網(wǎng)絡(luò)而增強(qiáng)雜交信號(hào)時(shí)，可采用長達(dá)1.5kb的探針。放射性核素和非放射性標(biāo)記探針均可用于原位雜交。　　四、雜交　　原位雜交的特異性，依賴于探針的結(jié)構(gòu)、雜交溫度、雜交液中甲酰胺、鹽離子濃度及pH值等。嚴(yán)格控制雜交條件，探針只能同高度同源的靶核酸雜交。為防止雜交液中液體蒸發(fā)造成雜交液濃縮或干燥而使探針非特異性吸附增多、本底升高，需使用密閉的濕盒，其底部的液體與雜交液鹽濃度相同。為了提高探針的濃度，雜交液的體積應(yīng)盡可能縮小，每張切片為10~20μι，其中含有2ng放射性核素標(biāo)記的ds-DNA或RNA探針，或含有10~20ng非放射性核素如生物素標(biāo)記探針。常用的雜交液多為50010甲酰胺、2×SSC、10%硫酸葡聚糖。雜交溫度為37~60C，CDNA與RNA探針在原位雜交中的最佳溫度為50C，DNA探針的雜交可在2～4h內(nèi)完成，RNA探針則需雜交12個(gè)h以上。進(jìn)行細(xì)胞內(nèi)DNA的原位雜交時(shí)應(yīng)將組織切片加熱至95℃5~15min，以使靶DNA變性。　　五、雜交結(jié)果的檢測　　放射性核素標(biāo)記的探針雜交經(jīng)放射自顯影即可對(duì)被檢測核酸進(jìn)行定位、定量研究。非放射性核素標(biāo)記的探針主要是化學(xué)顯色顯示雜交結(jié)果。　　六、核酸原位雜交的操作方法　?。ㄒ唬┣衅闹苽洹　?.冷凍切片的制備　?。?）手術(shù)切塊或新鮮活檢標(biāo)本，用PBS沖洗兩次，用冷凍切片機(jī)切片，將切片標(biāo)本附于涂有1mg/ml多聚賴氨酸的載片上，室溫空氣干燥3min。　　……

圖書封面

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