環(huán)境微生物實驗技術(shù)

內(nèi)容概要

本書主要介紹環(huán)境生物工程領(lǐng)域內(nèi)的環(huán)境微生物實驗技術(shù)以及污染物處理和環(huán)境生物修復(fù)實驗技術(shù)。本書共分十章，分別為：環(huán)境微生物分子檢測技術(shù)、環(huán)境微生物種群多樣性檢測技術(shù)、環(huán)境微生物生理活性檢測技術(shù)、環(huán)境質(zhì)量檢測與評估的微生物技術(shù)、難降解化合物的微生物降解實驗技術(shù)、廢水好氧處理實驗技術(shù)、廢水厭氧處理實驗技術(shù)、危險性化合物污染場地生物修復(fù)實驗技術(shù)與評價方法、廢棄物類生物質(zhì)的生物處理實驗技術(shù)、廢氣的生物處理技術(shù)?！　”緯晒氖颅h(huán)境生物工程研究領(lǐng)域的教師、研究生和其他研究者參考。

書籍目錄

第一章　環(huán)境微生物分子檢測技術(shù)  第一節(jié)　環(huán)境樣品DNA的提取    一、概述    二、處理焦化廢水的活性污泥中微生物總DNA的提取    三、處理生活污水的活性污泥中微生物總DNA的提取    四、土壤樣品中微生物總DNA的提取　第二節(jié)　環(huán)境樣品RNA提取技術(shù)    一、概述    二、從活性污泥中提取微生物RNA    三、從土壤樣品中提取微生物RNA    四、從水體樣品中提取微生物RNA    五、試劑盒法    六、提取方法總結(jié)　第三節(jié)　熒光原位雜交技術(shù)監(jiān)測環(huán)境中微生物    一、概述    二、熒光原位雜交技術(shù)基本操作步驟    三、熒光原位雜交法檢測活性污泥中硝化細(xì)菌    四、熒光原位雜交法檢測雙歧桿菌　第四節(jié)　熒光定量PCR檢測技術(shù)    一、概述    二、熒光定量PCR的原理    三、TaqMan熒光定量PCR檢測賈第鞭毛蟲和隱孢子蟲兩種腸道病原菌數(shù)量    四、熒光定量PCR方法檢測鼠傷寒沙門菌    五、SYBR Green熒光定量PCR檢測RbAp46基因表達(dá)    六、結(jié)果和討論　第五節(jié)　環(huán)境污染物降解基因的PCR檢測技術(shù)    一、概述    二、撲草凈降解基因保守序列的PCR檢測    三、芳香烴降解基因的PCR檢測    四、鹵代芳香烴降解基因的PCR檢測　第六節(jié)　反轉(zhuǎn)錄PCR檢測技術(shù)  　一、概述　  二、RT-PCR一般實驗方法和步驟  　三、RT—PCR其他方法和步驟　第七節(jié)　原位PCR檢測技術(shù)  　一、概述　  二、原位PCR技術(shù)檢測環(huán)境中霍亂弧菌ctzAB基因      三、結(jié)合流式細(xì)胞儀檢測技術(shù)的菌體原位PCR擴增  參考文獻(xiàn)第二章　環(huán)境微生物種群多樣性檢測技術(shù)  第一節(jié)  變性梯度凝膠電泳技術(shù)分析環(huán)境樣品中微生物多樣性    一、概述    二、DGGE/TGGE的發(fā)展和技術(shù)原理    三、DGGE技術(shù)的關(guān)鍵環(huán)節(jié)　和系統(tǒng)優(yōu)化    四、DGGE技術(shù)在微生物分子生態(tài)學(xué)中的應(yīng)用    五、DGGE技術(shù)應(yīng)用的局限性    六、DGGE技術(shù)分析活性污泥中微生物群落的多樣性  第二節(jié)　末端限制性片段長度多態(tài)性分析技術(shù)    一、概述    二、好氧顆粒污泥中細(xì)菌組成的檢測    三、運用T—RFLP技術(shù)快速鑒定分枝桿菌  第三節(jié)　Biolog方法測定環(huán)境微生物群落  第四節(jié)　環(huán)境微生物磷脂脂肪酸譜圖分析技術(shù)    一、概述    二、實驗方案  第五節(jié)　穩(wěn)定性同位素檢測技術(shù)    一、概述    二、C檢測：硫酸鹽還原菌（SRB）穩(wěn)定性碳同位素的分餾測定  參考文獻(xiàn)第三章　環(huán)境微生物生理活性檢測技術(shù)  第一節(jié)　微生物篩選與馴化實驗    一、概述    二、實驗方案  第二節(jié)　土壤呼吸強度的測定    一、概述    二、土壤呼吸強度測定實驗  第三節(jié)　天然水體和生活污水中細(xì)菌總數(shù)及大腸菌群的監(jiān)測    一、概述    二、實驗方案  第四節(jié)　硝化及反硝化活性實驗    一、概述    二、實驗方案  參考文獻(xiàn)第四章　環(huán)境質(zhì)量檢測與評價的微生物技術(shù)  第一節(jié)　應(yīng)用Ames實驗檢測河水中致突變污染物  　一、概述　  二、實驗材料與設(shè)備　  三、操作過程　……第五章  難降解化合物的微生物降解實驗技術(shù)第六章  廢水好氧處理實驗技術(shù)第七章  廢水厭氧處理實驗技術(shù)第八章  危險性化合物污染場地生物修復(fù)實驗技術(shù)與評價方法第九章  廢棄物類生物質(zhì)的生物處理實驗技術(shù)第十章  廢氣的生物處理技術(shù)

章節(jié)摘錄

第一章 環(huán)境微生物分子檢測技木第一節(jié) 環(huán)境樣品DNA的提取一、概述微生物分子生態(tài)學(xué)是通過分析樣品中DNA分子的種類、數(shù)量等基因組信息來反映微生物種群結(jié)構(gòu)等信息的。用分子生物學(xué)方法對環(huán)境微生物多樣性、群落結(jié)構(gòu)及變化規(guī)律的研究近年來得到快速發(fā)展，已成為最富于活力的生態(tài)學(xué)科前沿領(lǐng)域之一，因此對環(huán)境樣品中的細(xì)菌基因組DNA組成狀況進(jìn)行分析評價，必須建立高效、可靠的DNA提取方法。由于環(huán)境樣品中微生物的種類組成復(fù)雜且常?；祀s有大量有毒物質(zhì)，如何使所有細(xì)胞裂解、充分釋放DNA并有效去除雜質(zhì)，得到可以進(jìn)行分子生物學(xué)操作的高純度DNA是研究環(huán)境樣品中微生物種群結(jié)構(gòu)與功能關(guān)系的關(guān)鍵所在。因此，應(yīng)用分子生物學(xué)技術(shù)分析復(fù)雜的基因組，首先必須制備高純度的DNA。環(huán)境樣品的微生物總DNA的提取和純化方法主要由兩部分組成：①溫和裂解細(xì)胞及溶解DNA的技術(shù)，包括通過物理、化學(xué)或酶解作用裂解細(xì)胞，使DNA釋放出來。常用的物理方法包括煮沸、凍融、微波、超聲、研磨等，化學(xué)方法包括高鹽、表面活性劑SDS、熱酚等，酶解法包括裂解酶、溶菌酶、蛋白酶K等。②在環(huán)境樣品DNA得到充分釋放后，通常采用幾種化學(xué)和酶學(xué)方法中的任一種來去除雜蛋白、RNA及其他的大分子。一般傳統(tǒng)的DNA制備方法是依賴上述方法裂解細(xì)胞，某些情況需要用酶來消化蛋白質(zhì)或降解一些細(xì)胞組分，然后細(xì)胞材料用溶劑抽提，通常為酚/氯仿。分離成兩相后，核酸存留在水相中。核酸進(jìn)一步純化可用乙醇沉淀法，再重新溶解在適宜的緩沖液中。用這些技術(shù)得到的DNA是高純度的，并適用于大部分分子生物學(xué)操作。近年來，色譜技術(shù)在DNA提取中的應(yīng)用打破了傳統(tǒng)方法的統(tǒng)治地位，這些新的方法主要有螯合樹脂／純化柱法、玻璃粉吸附法、磁珠吸附法、免疫親和法等。實際上分子生物學(xué)的所有方法從某種程度上都需要進(jìn)行核酸的分級分離（表1—1）。色譜技術(shù)對于某些應(yīng)用是合適的，比如分離雙鏈核酸和單鏈核酸、分離質(zhì)粒與基因組DNA以及從細(xì)胞裂解物碎片中分離基因組DNA。然而，凝膠電泳法比其他方法具有更高的分辨率，因而成為一般情況下首選的分離方法。凝膠電泳分離法既可以是分析型的，也可以是制備型的，分離片段的分子質(zhì)量范圍在1000～108Da之間。

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《環(huán)境微生物實驗技術(shù)》可供從事環(huán)境生物工程研究領(lǐng)域的教師、研究生和其他研究者參考。

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