蛋白質(zhì)電泳與分析

內(nèi)容概要

本書(shū)為國(guó)家“十一五”重點(diǎn)圖書(shū)出版項(xiàng)目——生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)叢書(shū)的分冊(cè)之二。全面系統(tǒng)地介紹了蛋白質(zhì)電泳技術(shù)，包括發(fā)展簡(jiǎn)史、電泳的基本原理、分類(lèi)和應(yīng)用以及影響電泳遷移的因素。重點(diǎn)闡述了7種蛋白質(zhì)電泳技術(shù)的原理、方法和具體應(yīng)用，特別是對(duì)電泳中可能出現(xiàn)的問(wèn)題以及解決的方法作了詳細(xì)介紹。本書(shū)具有實(shí)用性、操作性強(qiáng)的特征，是一本關(guān)于蛋白質(zhì)電泳方面非常實(shí)用的工具書(shū)。本書(shū)適用于生物化學(xué)、生物技術(shù)和生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室工作人員及本科和研究生的實(shí)驗(yàn)教學(xué)。

書(shū)籍目錄

第一章  總論　1　電泳技術(shù)發(fā)展簡(jiǎn)史　2　電泳的基本原理　3　電泳技術(shù)分類(lèi)　4　電泳技術(shù)的應(yīng)用　5　影響電泳遷移率的因素　6　常用電泳方法　7  電泳儀器第二章　醋酸纖維素薄膜電泳　1　醋酸纖維素薄膜電泳的原理　2　應(yīng)用舉例：醋酸纖維素薄膜電泳分離血清蛋白第三章　聚丙烯酰胺凝膠電泳　1　聚丙烯酰胺凝膠電泳的原理　2　聚丙烯酰胺凝膠電泳的應(yīng)用　3  十二烷基硫酸鈉（SDS）—聚丙烯酰胺凝膠電泳　4　非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳　5　常見(jiàn)問(wèn)題分析第四章　等電聚焦　1　等電聚焦技術(shù)的發(fā)展過(guò)程　2　等電聚焦技術(shù)的原理　3　載體兩性電解質(zhì)pH梯度等電聚焦　4  固相pH梯度等電聚焦電泳第五章　免疫電泳　1　一般免疫電泳　2　對(duì)流免疫電泳　3　火箭免疫電泳  4　交叉免疫電泳  5　免疫共沉淀第六章　蛋白免疫印跡試驗(yàn)　1　傳統(tǒng)的蛋白質(zhì)免疫印跡技術(shù)　2　蛋白免疫印跡試驗(yàn)中的新儀器、新方法第七章　雙向電泳  1　實(shí)驗(yàn)方法  2　雙向熒光差異凝膠電泳（2-D DIGE）技術(shù)  3　雙向電泳常見(jiàn)的失誤與解決方法第八章　毛細(xì)管電泳　1　概論　2　理論基礎(chǔ)　3　基本操作和實(shí)驗(yàn)條件選擇及注意事項(xiàng)　4　毛細(xì)管電泳技術(shù)在生物、藥物及食品檢測(cè)方面的應(yīng)用　5　應(yīng)用舉例參考文獻(xiàn)

章節(jié)摘錄

　　第二章　醋酸纖維素薄膜電泳　　紙電泳法是用濾紙作為支持介質(zhì)的一種電泳法，在實(shí)驗(yàn)室和臨床檢驗(yàn)中都曾經(jīng)廣泛應(yīng)用，其主要用于血清蛋白質(zhì)分離，以及蛋白質(zhì)、核苷酸等生化藥物的測(cè)定。如：在一定的pH條件下，核苷酸中含共軛雙鍵的嘌呤或嘧啶堿基具有強(qiáng)紫外吸收，利用紙電泳后，在紫外光燈下顯示紫色，將顯色區(qū)洗脫后在特定波長(zhǎng)下測(cè)定其吸收度，根據(jù)吸收系數(shù)可計(jì)算出某一核苷酸的含量?！　〖堧娪镜脑O(shè)備簡(jiǎn)單，應(yīng)用廣泛，是最早使用的一種電泳技術(shù)。在早期的生物化學(xué)研究中，曾發(fā)揮重要作用。但是由于紙電泳花費(fèi)時(shí)間長(zhǎng)，支持物濾紙對(duì)蛋白質(zhì)樣品的吸附力較大，且濾紙本身為極性物，透明化步驟較煩瑣，不利于光密度計(jì)掃描法定量測(cè)定，近年來(lái)逐漸為其他快速、簡(jiǎn)便、分辨率高的電泳技術(shù)所代替?！　?957年，Kohn首先將醋酸纖維素薄膜用作電泳支持物，標(biāo)志著紙電泳已被醋酸纖維素薄膜電泳所取代。醋酸纖維素薄膜電泳與紙電泳相似，只是換用了醋酸纖維素薄膜作為支持介質(zhì)。　　1　醋酸纖維素薄膜電泳的原理　　醋酸纖維是纖維素的醋酸酯，由纖維素的羥基經(jīng)乙酰化而形成，將其溶于丙酮等有機(jī)溶劑中，即可涂布成均一細(xì)密的微孔薄膜，厚度以0.1～0.15 mm為宜。太厚吸水性差，分離效果不好；太薄則膜片缺少應(yīng)有的機(jī)械強(qiáng)度而易碎。不同廠家生產(chǎn)的薄膜主要在乙酰化、厚度、孔徑、網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)等方面有所不同，但分離效果基本一致。通常實(shí)驗(yàn)中用到的醋酸纖維素薄膜是由一層薄薄的聚乙烯和壓附在其上的醋酸纖維素酯構(gòu)成的。光滑面是聚乙烯一面，粗糙面是醋酸纖維素酯的一側(cè)。

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