組織學(xué)與胚胎學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)

前言

2008年5月，我收到人民衛(wèi)生出版社的邀請，主編醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)系列教材之一《組織學(xué)與胚胎學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)》，并要求以常用的、成熟的以及代表未來發(fā)展方向的醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)為主，著重闡述實(shí)驗(yàn)技術(shù)的用途（目的）、實(shí)驗(yàn)原理、實(shí)驗(yàn)方法和步驟等，突出實(shí)驗(yàn)技術(shù)的可操作性和實(shí)用性。綜觀教材類叢書，有關(guān)醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)系列教材甚少，更無《組織學(xué)與胚胎學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)》教材。我深知這是一項(xiàng)屬于開創(chuàng)性的系列教材叢書，編寫難度大。其原因在于醫(yī)學(xué)科學(xué)的領(lǐng)域非常廣闊，新技術(shù)日新月異、層出不窮，而醫(yī)學(xué)不同學(xué)科之間互相交叉滲透，除了一些經(jīng)典的組織學(xué)與胚胎學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)外，屬于組織學(xué)與胚胎學(xué)的實(shí)驗(yàn)技術(shù)難以與其他學(xué)科相區(qū)分。然而，在我為研究生開設(shè)的課程中，確實(shí)感到研究生實(shí)驗(yàn)技術(shù)教材的缺少。有時(shí)為了組織一堂教學(xué)課，需要從不同的參考書中獲得教學(xué)參考內(nèi)容，提供給學(xué)生。開設(shè)一門研究生實(shí)驗(yàn)課，參考書多達(dá)幾十本，導(dǎo)致教師備課非常辛苦，學(xué)生學(xué)習(xí)負(fù)擔(dān)重，但涉及具體的研究工作，實(shí)用性差。有些新技術(shù)則更無參考資料可覓。鑒于上述原因，編寫一本研究生的實(shí)驗(yàn)技術(shù)類教材、醫(yī)學(xué)科研人員的實(shí)驗(yàn)參考書，以解決他們在學(xué)習(xí)和研究工作中遇到的實(shí)際問題，是非常必要的。為此，我們聯(lián)合北京大學(xué)、復(fù)旦大學(xué)、華中科技大學(xué)、中山大學(xué)、上海交通大學(xué)、中南大學(xué)、四川大學(xué)、第三軍醫(yī)大學(xué)、首都醫(yī)科大學(xué)、哈爾濱醫(yī)科大學(xué)、重慶醫(yī)科大學(xué)、南京醫(yī)科大學(xué)、河北醫(yī)科大學(xué)、大連醫(yī)科大學(xué)的教授們進(jìn)行討論，在取得共識的基礎(chǔ)上，擬訂編寫大綱。在內(nèi)容的編排上，既有經(jīng)典的組織學(xué)與胚胎學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)，又有代表當(dāng)今科學(xué)發(fā)展水平的形態(tài)學(xué)新技術(shù)；既注重闡述實(shí)驗(yàn)技術(shù)的原理，又突出在研究工作中的實(shí)際應(yīng)用。由于參加編寫的人員，都是該研究領(lǐng)域的專家，因此本書實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)的可操作性和實(shí)用性非常強(qiáng)，研究人員可遵循本書的實(shí)驗(yàn)方法和步驟，完成實(shí)驗(yàn)工作。同時(shí)，必要的試劑和溶液的配制方法也可從書的附錄中獲得。

內(nèi)容概要

本書為醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)系列之一。本書以常用、成熟的以及代表未來發(fā)展方向的醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)為主，著重闡述實(shí)驗(yàn)技術(shù)的用途、實(shí)驗(yàn)范圍、實(shí)驗(yàn)原理、試劑配置、實(shí)驗(yàn)方法和步驟、如何優(yōu)化、問題與策略等，突出實(shí)驗(yàn)技術(shù)的可操作性和實(shí)用性。

書籍目錄

第一章  組織標(biāo)本切片和染色技術(shù)  第一節(jié)  標(biāo)本取材與固定    一、標(biāo)本取材    二、標(biāo)本固定  第二節(jié)  脫水、透明、浸蠟和包埋    一、脫水    二、透明    三、標(biāo)本脫水與透明的關(guān)系    四、浸蠟和包埋  第三節(jié)  組織切片技術(shù)    一、石蠟切片    二、冰凍切片  第四節(jié)  切片的染色與染料    一、生物學(xué)染色與染料    二、蘇木精一伊紅染色    三、封固  第五節(jié)  特殊標(biāo)本的制備    一、脫鈣骨標(biāo)本    二、眼球標(biāo)本的制備    三、微小標(biāo)本的制備    四、胚胎標(biāo)本的制備    五、涂片標(biāo)本  第六節(jié)  常用的特殊染色    一、結(jié)締組織染色    二、細(xì)胞染色    三、神經(jīng)組織染色  第七節(jié)  激光捕獲顯微切割技術(shù)    一、原理    二、實(shí)驗(yàn)方法    三、實(shí)驗(yàn)操作的影響因素    四、激光捕獲顯微切割系統(tǒng)的優(yōu)點(diǎn)    五、激光捕獲顯微切割系統(tǒng)的應(yīng)用范圍    六、激光捕獲顯微切割技術(shù)的最新進(jìn)展  附錄：主要試劑與溶液的配制第二章  光學(xué)顯微鏡技術(shù)第三章  組織與細(xì)胞化學(xué)技術(shù)第四章  免疫組織化學(xué)技術(shù)第五章  原位雜交組織化學(xué)技術(shù)第六章  細(xì)胞與組織培養(yǎng)技術(shù)第七章  體視學(xué)第八章  電子顯微鏡技術(shù)第九章  流式細(xì)胞檢測技術(shù)第十章  生物芯片技術(shù)第十一章  活體動(dòng)物體內(nèi)功能成像技術(shù)第十二章  干細(xì)胞技術(shù)第十三章  細(xì)胞核移植技術(shù)及應(yīng)用第十四章  體外受精及其衍生輔助生殖技術(shù)中英文名詞對照索引英中文名詞對照索引

章節(jié)摘錄

插圖：（二）影響脫水的因素1.標(biāo)本的種類和大小組織結(jié)構(gòu)疏松或較薄的標(biāo)本，如早期胚胎、小鼠小腸（剖開），脫水時(shí)間相對短一些；結(jié)構(gòu)致密的標(biāo)本，如肝、大腦，則要長一些。在保證組織結(jié)構(gòu)完整的情況下，標(biāo)本力求小而?。?～3mm：），有利于脫水劑的滲透，否則有可能因脫水時(shí)間過長或不足而造成標(biāo)本內(nèi)外脆性不一致，此情況主要發(fā)生在100％乙醇脫水階段。2.脫水劑的選擇乙醇是最常用的脫水劑，但對某些韌性或硬度較高的標(biāo)本，如皮膚、復(fù)合型關(guān)節(jié)（附帶肌組織和韌帶），最好選用正丁醇或叔丁醇脫水以降低硬度或脆性，從而保障標(biāo)本脫水質(zhì)量，另外需要注意其脫水時(shí)間較乙醇脫水時(shí)間要延長很多。3.脫水的外在因素主要是指溫度、容積率及標(biāo)本振蕩與否。37℃條件下標(biāo)本脫水時(shí)間比室溫脫水時(shí)間要短許多。溫度可促進(jìn)脫水劑滲透速度，但100％乙醇的脫水進(jìn)度不易掌握，37℃和脫水時(shí)間過長，更易使標(biāo)本脆性增大。因此，提倡37℃、低濃度乙醇的逐級脫水和室溫、100％乙醇脫水相結(jié)合方式，以降低對標(biāo)本硬化和脆性的影響。另外，容積率以及標(biāo)本的振蕩也對脫水程度有影響，尤其是標(biāo)本數(shù)量較多或標(biāo)本較大較厚的情況。二、透明利用有些有機(jī)試劑既能與脫水劑混合，又能與石蠟液相融合的特性來置換標(biāo)本內(nèi)脫水劑，并為浸蠟做準(zhǔn)備的過程，此時(shí)標(biāo)本呈“透明”狀，故稱為透明。使用的有機(jī)試劑稱為透明劑。透明的目的是便于石蠟的浸人。由于乙醇不能與石蠟相混合，利用透明劑與乙醇、石蠟?zāi)芟嗳诤系奶匦裕脫Q乙醇而導(dǎo)入石蠟，將脫水與浸蠟過程很好地連接起來，透明劑充當(dāng)著“橋梁”的作用。作為透明劑的有機(jī)溶劑，大多數(shù)都是不溶于水的。常用的透明劑有二甲苯（xylene）、氯仿、正丁醇和叔丁醇等。1.二甲苯是石蠟切片制作中最常用的透明劑，為無色透明的液體，易揮發(fā)，易溶于乙醇和石蠟。二甲苯不溶于水，遇水則呈乳濁液狀態(tài)，因其內(nèi)形成大量微小水珠所致。二甲苯透明能力很強(qiáng)，作用快，但易使標(biāo)本收縮、變硬變脆，因此，標(biāo)本透明時(shí)間不能過長。常規(guī)大小的標(biāo)本透明時(shí)間為2～3小時(shí)。2.氯仿是無色透明的液體，極易揮發(fā)，易吸收水分。對標(biāo)本的滲透力弱而柔和，標(biāo)本不易收縮和變脆，透明時(shí)間可長達(dá)24小時(shí)。氯仿多用于胚胎標(biāo)本或較大標(biāo)本的透明。3.正丁醇和叔丁醇既有脫水作用，又有透明作用，但兩者的作用均柔和而緩慢。常規(guī)標(biāo)本透明時(shí)間可長達(dá)6～24小時(shí)，多用于皮膚或復(fù)合型標(biāo)本。透明后標(biāo)本的浸蠟時(shí)間也加長，因?yàn)檎〈己褪宥〈急皇炛脫Q的速度也很緩慢。

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