流式細胞術

前言

　　流式細胞術是20世紀60年代末發(fā)展起來的細胞定性和定量的技術，通過收集激光照射到細胞后的散射光信號和熒光信號反映細胞的物理化學特征，并且根據細胞的物理化學特征分選得到感興趣的細胞。流式細胞術的出現(xiàn)與發(fā)展涉及很多學科和技術，包括細胞與分子生物學、流體力學、電磁理論和生物技術、激光技術、熒光技術、光電子技術、單克隆抗體技術、計算機技術、納米技術等?？梢哉f，像流式細胞術這樣涉及這么多學科領域的一種技術并不多見。流式細胞術是現(xiàn)代科學技術發(fā)展的綜合交叉的產物，是集多種技術發(fā)展于一體的“大成者”。流式細胞術也是一個高速發(fā)展的技術，從最初只配備1個激光器、只有1個散射光通道和1個熒光通道發(fā)展到現(xiàn)在的可以配備4個激光器并可以同時16色18參數(shù)進行分析或者分選，這個發(fā)展歷程也只經歷了不到半個世紀。而且，流式細胞術更是一個應用特別廣泛的技術，不僅應用于基礎醫(yī)學和生物學如免疫學、細胞生物學和微生物學等的各個領域，并已成為這些領域研究不可或缺的基本技術方法，而且現(xiàn)在的流式細胞術更是廣泛應用于臨床的各個方面，如血常規(guī)檢測、白血病的臨床分型、急性感染的早期診斷等。此外，流式細胞術還成功應用于環(huán)境監(jiān)測、食品衛(wèi)生防疫等各個方面，而且其應用還在不斷地向各個領域擴展延伸。可以說，流式細胞術具有廣泛的應用價值和應用前景。

內容概要

本書主要介紹流式細胞術的原理、操作和應用，分為概述、流式細胞術的原理、流式圖、流式細胞術的基本操作和技巧、流式分析的應用和流式分選的應用6個部分。概述部分主要介紹流式細胞術的基本概念和幾款分析型流式細胞儀和分選型流式細胞儀；原理部分具體介紹流式細胞儀的液流系統(tǒng)、光路系統(tǒng)、檢測分析系統(tǒng)和分選系統(tǒng)；流式圖部分主要介紹了流式直方圖、流式散點圖和流式等高線圖；操作部分介紹了單細胞懸液樣品的制備、熒光素偶聯(lián)抗體標記、光電倍增管電壓設置、對照設置、補償設置、閾值設定、死細胞問題處理、分選模式選擇、上樣速度控制、分選設門原則、分選基本步驟共11個部分的內容；流式分析應用部分具體介紹了流式細胞術在免疫學方面的應用，并且擴展到基礎醫(yī)學和生物學方面的應用；流式分選應用部分闡述了不同條件下流式分選的策略選擇和注意事項，同時還介紹了各種干細胞包括腫瘤干細胞等的流式分選方法。

書籍目錄

序前言1 概述1.1 流式細胞術基本概念1.2 分析型流式細胞儀介紹1.3 分選型流式細胞儀介紹參考文獻2 流式細胞儀的原理2.1 液流系統(tǒng)2.2 光路系統(tǒng)2.3 檢測分析系統(tǒng)2.4 分選系統(tǒng)參考文獻3 流式圖3.1 流式通道3.2 流式直方圖3.3 流式散點圖3.4 流式等高線圖參考文獻4 流式細胞術的基本操作與技巧4.1 樣品制備4.1.1 獨立細胞樣品制備4.1.2 免疫器官樣品制備4.1.3 實體臟器樣品制備4.2 熒光素偶聯(lián)抗體及其標記方法4.2.1 熒光素4.2.2 熒光素偶聯(lián)抗體4.2.3 樣品封閉4.2.4 熒光素偶聯(lián)抗體標記4.3 光電倍增管電壓設定4.4 對照的設置4.4.1 陰性對照的設置4.4.2 FM.對照4.4.3 陽性對照的設置4.5 補償調節(jié)4.5.1 補償調節(jié)的原理4.5.2 調節(jié)補償?shù)木唧w方法4.5.3 三色和四色分析補償調節(jié)方法4.5.4 影響補償大小的因素4.6 閾值設定4.7 流式分析中的死細胞問題4.7.1 減少樣品中死細胞比例的方法4.7.2 流式分析時區(qū)分死細胞和活細胞的方法4.8 流式分選模式選擇4.8.1 純化模式4.8.2 富集模式4.8.3 單細胞模式4.9 上樣速度控制4.9.1 流式分析速度控制4.9.2 流式分選速度控制4.10 分選設門基本原則4.11 流式分選基本步驟參考文獻5 流式分析術的應用5.1 細胞群比例測定5.2 表型測定5.3 檢測細胞因子5.3.1 胞內染色法檢測細胞因子5.3.2 胞內染色法與ELISA法比較5.3.3 CBA法測定細胞因子5.3.4 CBA法與ELISA法比較5.4 檢測細胞增殖5.4.1 相對計數(shù)法5.4.2 示蹤染料標記法5.4.3 Brdu標記法5.4.4 其他方法5.5 檢測細胞凋亡5.5.1 annexinV／PI雙染色法5.5.2 SYTO／PI雙染色法5.5.3 細胞：DNA含量分析法檢測細胞凋亡5.5.4 線粒體損傷檢測法5.5.5 活化的caspase-3檢測法5.5.6 熒光素偶聯(lián)的caspase抑制劑(FLICA)標記法5.5.7 甲酰胺誘導ssDNA單抗檢測法5.5.8 TUNEL法5.6 檢測細胞周期5.6.1 非特異性核酸熒光染料標記法5.6.2 特異性細胞周期調節(jié)蛋白檢測法5.7 檢測細胞殺傷能力5.8 檢測細胞吞噬功能5.9 檢測胞內活化的激酶5.10 檢測基因表達5.10.1 GFP報道基因系統(tǒng)5.10.2 JocZ報道基因系統(tǒng)5.10.3 內酰胺酶報道基因系統(tǒng)5.11 微生物學中的應用5.11.1 熒光素偶聯(lián)抗體直接檢測法5.11.2 抗體結合人工熒光微球直接檢測法5.11.3 微生物活性流式檢測5.11.4 人工微球熒光免疫試驗檢測抗體5.11.5 熒光原位雜交流式檢測法5.11.6 PCR免疫微珠法5.11.7 原位PCR雜交流式檢測法5.12 檢測鈣相關分子5.12.1 檢測細胞內游離的鈣離子水平5.12.2 檢測鈣蛋白酶活性5.12.3 檢測細胞膜鈣泵活性5.13 表觀遺傳學中的應用5.13.1 ChIP一0n-beads法5.13.2 檢測細胞水平組蛋白修飾情況……6 流式分選術的應用參考文獻

章節(jié)摘錄

　　特定波長的激光束直接照射到高壓驅動的液流，產生的光信號被多個接收器接收，一個是在激光束直線方向上接收到的散射光信號（前向角散射），其他是在激光束垂直方向上接收到的光信號，包括散射光信號（側向角散射）和熒光信號。液流中懸浮的直徑從0.2－150um的細胞能夠使激光束發(fā)生散射光，細胞上結合的熒光素被激光激發(fā)后能夠發(fā)射熒光。散射光信號和熒光信號被相應的接收器接收，根據信號的強弱波動就能反映出每個細胞的物理化學特征?！　?.流式細胞術的三大要素　　流式細胞術有三大要素，分別為流式細胞儀、樣品細胞和熒光染料或者熒光素偶聯(lián)抗體。流式細胞術是在流式細胞儀上操作的，流式細胞儀根據其功能的不同可以分為分析型流式細胞儀和分選型流式細胞儀，前者只能流式分析，不能分選純化目標細胞，后者能夠同時進行流式分析和流式分選?！　×魇郊毎g檢測的對象是細胞，而且是呈獨立狀態(tài)的懸浮于液體中的細胞，即單細胞懸液。流式細胞術不能直接檢測組織塊中的細胞，要檢測臟器或組織中的細胞，必須先用各種方法將臟器或組織制備成單細胞懸液，然后標記上熒光素偶聯(lián)抗體，才能被流式細胞儀檢測。流式細胞術不能直接檢測分子，但是用人工合成的顆粒代替細胞，然后將該分子的抗體與人工顆粒結合，可以間接檢測分子，如用CBA法檢測細胞因子等?！　　?/pre>




編輯推薦
　　《流式細胞術：原理、操作及應用》對流式細胞術的闡述從原理到技巧再到應用，層次分明，重點突出：即使是從未接觸過流式細胞術的初學者，通過閱讀《流式細胞術：原理、操作及應用》也能完全讀懂并深入了解其內涵；對有經驗的操作者則可查缺補漏，進一步加深理解、靈活運用。深入淺出，通俗易懂著者對流式細胞術有著豐富的操作經驗和深入透徹的理解，用最平實的語言詮釋了此技術的原理、操作和應用。方法全面，技巧突出《流式細胞術：原理、操作及應用》全面介紹了流式細胞術的基本操作方法，特別突出了著者的心得體會和技巧，幫助讀者進一步提高操作水平。理論聯(lián)系實踐《流式細胞術：原理、操作及應用》運用大量的實例和示意圖具體而形象地闡述了流式細胞術的原理和應用。以其在免疫學上的應用為基礎，擴展到基礎醫(yī)學和生物學應用的多個方面。重點強化流式分選《流式細胞術：原理、操作及應用》還重點介紹了流式分選的具體應用，闡述了不同條件下流式分選的策略選擇和注意事項，以及各種干細胞包括腫瘤干細胞等的流式分選?！　×魇郊毎g廣泛應用于生物學和基礎醫(yī)學如免疫學、細胞生物學和微生物學等，成為這些領域研究的重要技術，而且流式細胞術還應用于臨床醫(yī)學的許多方面，如白血病的臨床分型、感染的早期診斷等此外，流式細胞術還成功應用于環(huán)境監(jiān)測、食品衛(wèi)生防疫等方面，并且其應用還在不斷地向各個領域擴展延伸……





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