中西醫(yī)結合科研實驗方法學導讀

內(nèi)容概要

　　陳文列、吳錦忠主編的《中西醫(yī)結合科研實驗方法學導讀》是《全國高等院校中西醫(yī)臨床醫(yī)學專業(yè)規(guī)劃教材》之一，共分為四篇，第一篇介紹組織顯微結構與細胞超微結構研究方法（含光鏡、電鏡、激光掃描共聚焦顯微鏡實驗方法與結構觀察），第二篇介紹細胞生物學實驗研究方法（細胞培養(yǎng)、免疫細胞分析、血液流變學、流式細胞術），第三篇介紹生化與分子生物學實驗研究方法（核酸分析、PCR、分子雜交與克隆、蛋白表達與提取分析等），第四篇介紹中藥與天然藥物化學及其活性研究方法（化學成分指紋圖譜、活性物質(zhì)篩選等）。本書重點介紹實驗方法、技術（經(jīng)典、常用或新技術）的理論與操作，具有新穎性、實用性、系統(tǒng)性、可操作性強的特點。
　　《中西醫(yī)結合科研實驗方法學導讀》可作為中西醫(yī)結合專業(yè)碩士和博士研究生教學用書，以及從事中西醫(yī)結合基礎、臨床應用基礎及中醫(yī)藥現(xiàn)代化基礎研究者的通用科研實驗指導書。

書籍目錄

總前言
第一篇　組織顯微結構與細胞超微結構研究方法
　第一章　組織顯微結構研究的光鏡實驗方法
　　第一節(jié)　組織學和病理學常規(guī)實驗方法
　　第二節(jié)　光鏡組織化學與特殊染色
　　第三節(jié)　光鏡酶組織化學
　　第四節(jié)　光鏡免疫組織化學
　　第五節(jié)　光鏡原位雜交組織化學
　　第六節(jié)　原位凋亡檢測技術（TUNEL法）
　　第七節(jié)　光鏡顯微鏡圖像定量分析
　第二章　細胞超微結構研究的電鏡實驗方法
　　第一節(jié)　概述
　　第二節(jié)　透射電鏡常規(guī)樣品制備
　　第三節(jié)　示蹤與離子電鏡細胞化學
　　第四節(jié)　電鏡特殊染色
　　第五節(jié)　電鏡免疫細胞化學
　　第六節(jié)　細胞器標志酶電鏡細胞化學
　　第七節(jié)　透射電鏡、掃描電鏡與超微結構圖像定量分析
　第三章　細胞超微結構與組織顯微結構的觀察
　　第一節(jié)　概述
　　第二節(jié)　細胞超微結構與常見變化
　　第三節(jié)　幾類細胞的超微結構
　　第四節(jié)　組織顯微結構與常見病變
　第四章　常見器官的組織顯微結構與細胞超微結構及病變
　　第一節(jié)　消化器官的顯微結構與超微結構及病變
　　第二節(jié)　運動器官的顯微結構與超微結構及病變
　　第三節(jié)　心血管的顯微結構與超微結構及病變
　　第四節(jié)　內(nèi)分泌器官和組織的顯微結構與超微結構及病變
　　第五節(jié)　神經(jīng)系統(tǒng)的顯微結構與超微結構及病變
　　第六節(jié)　泌尿器官的顯微結構與超微結構及病變
　　第七節(jié)　免疫器官的顯微結構與超微結構及病變
　　第八節(jié)　呼吸器官的顯微結構與超微結構及病變
　　第九節(jié)　血細胞的顯微結構與超微結構及病變
　第五章　組織和細胞立體結構與成分研究的激光掃描共聚焦顯微術
　　第一節(jié)　概述
　　第二節(jié)　熒光探針的選擇和熒光標記樣品的制備
　　第三節(jié)　組織和細胞結構與成分觀察實驗
　　第四節(jié)　細胞器三維結構觀察實驗
　　第五節(jié)　細胞生理功能動態(tài)觀察實驗
　　第六節(jié)　激光掃描共聚焦顯微鏡
第二篇　細胞生物學實驗研究方法
　第六章　細胞培養(yǎng)與分析
　　第一節(jié)　細胞培養(yǎng)的基本原理與技術
　　第二節(jié)　細胞培養(yǎng)的方法
　　第三節(jié)　細胞的凍存、復蘇與運輸
　　第四節(jié)　體外培養(yǎng)細胞的觀察
　　第五節(jié)　細胞增殖、凋亡分析
　第七章　免疫細胞的分離與分析
　　第一節(jié)　概述
　　第二節(jié)　免疫細胞的分離制備
　　第三節(jié)　免疫細胞的功能分析
　第八章　血液流變學研究技術
　　第一節(jié)　概述
　　第二節(jié)　血液黏度檢測
　　第三節(jié)　血小板聚集、黏附功能檢測
　第九章　流式細胞術
　　第一節(jié)　概述
　　第二節(jié)　單細胞懸液的樣本制備
　　第三節(jié)　流式細胞術的標記方法、結果分析與意義
　　第四節(jié)　流式細胞術在醫(yī)學科學研究中的應用
　　第五節(jié)　流式細胞儀結構和原理
第三篇　生化與分子生物學實驗研究方法
　第十章　核酸提取分析
　　第一節(jié)　概述
　　第二節(jié)　DNA提取
　　第三節(jié)　RNA提取
　　第四節(jié)　核酸分析
　　第五節(jié)　核酸電泳
　第十一章　分子雜交
　　第一節(jié)　概述
　　第二節(jié)　Southern印跡雜交
　　第三節(jié)　Northern印跡雜交
　　第四節(jié)　Western印跡雜交
　第十二章　聚合酶鏈反應（PCR）
　　第一節(jié)　概述
　　第二節(jié)　PCR技術基本操作
　　第三節(jié)　RT—PCR
　　第四節(jié)　PCR引物設計
　第十三章　分子克隆
　　第一節(jié)　概述
　　第二節(jié)　目的DNA片段的獲取
　　第三節(jié)　目的DNA片段的處理、純化及鑒定
　　第四節(jié)　載體的選擇與處理
　　第五節(jié)　載體與目的基因片段的連接
　　第六節(jié)　重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化感受態(tài)大腸埃希菌
　　第七節(jié)　重組克隆子的篩選與鑒定
　第十四章　蛋白表達
　　第一節(jié)　概述
　　第二節(jié)　外源基因在大腸埃希菌中的誘導表達
　　第三節(jié)　外源基因在真核細胞中的表達（細胞轉(zhuǎn)染）
　第十五章　蛋白質(zhì)的提取和分析
　　第一節(jié)　概述
　　第二節(jié)　蛋白的分離提取、純化
　　第三節(jié)　總蛋白含量測定
　　第四節(jié)　酶聯(lián)免疫分析
　　第五節(jié)　放射免疫分析
　　第六節(jié)　蛋白電泳
　第十六章　常規(guī)生物化學實驗技術
　　第一節(jié)　概述
　　第二節(jié)　糖類實驗分析
　　第三節(jié)　酶類實驗分析
　　第四節(jié)　脂類實驗分析
第四篇　中藥與天然藥物化學及其活性研究方法
　第十七章　中藥與天然藥物化學成分的一般研究方法
　　第一節(jié)　中藥與天然藥物化學成分提取
　　第二節(jié)　中藥與天然藥物化學成分分離
　　第三節(jié)　中藥與天然藥物化學成分的研究各論
　第十八章　中藥與天然藥物化學成分指紋圖譜研究方法
　　第一節(jié)　構建中藥與天然藥物化學成分指紋圖譜的技術要求
　　第二節(jié)　應用HPLC構建草珊瑚化學成分指紋圖譜的研究實例
　第十九章　中藥與天然藥物活性物質(zhì)篩選方法
　　第一節(jié)　生物活性導向分離法篩選中藥與天然藥物活性物質(zhì)
　　第二節(jié)　計算機模擬技術篩選中藥與天然藥物活性物質(zhì)
　　第三節(jié)　中藥與天然藥物化學成分的生物活性測試法
　　第四節(jié)　中藥復方藥效物質(zhì)基礎研究方法
彩圖

章節(jié)摘錄

版權頁：插圖：1.取材（1）主要實驗儀器／器材／重要試劑1）儀器或器材：剪刀、鑷子、單面刀片或雙面刀片、標本瓶、標簽等。2）試劑：麻醉劑、生理鹽水等。（2）實驗操作1）預先準備好固定液（見固定章節(jié)），分裝在標本瓶內(nèi)，貼好標簽。2）動物組織取材：將動物麻醉或處死，暴露所需的器官；用鋒利的刀片切下所需器官或組織，進行初步修切后，盡快投人固定液。3）細胞取材：①涂片法。血液等可直接均勻涂在載玻片上，胸腔積液、腹水、尿液、腦脊液以及懸浮的培養(yǎng)細胞等細胞濃度小的標本，應先用離心機以1500r／rain離心10min，取沉淀涂片，干燥后固定。②爬片法。貼壁細胞可直接培養(yǎng)在蓋玻片上，固定后染色。③包埋法。離心后固定細胞團，或用瓊脂預包埋細胞后，再行常規(guī)脫水，石蠟包埋。（3）注意事項、出現(xiàn)問題與解決辦法1）取材刀具：取材刀具必須鋒利。切取標本不應擠壓和揉擦，不應使用有鉤鑷子或血管鉗等手術器械鑷取標本，以免損害組織造成人為的組織變化。2）取材時間：取材要及時，并及時固定，越新鮮越好。3）取材順序：根據(jù)死后組織結構改變的速度快慢而定。先腹腔后胸腔，先消化管后肝、脾等多血的器官，然后是神經(jīng)組織、骨和皮膚等。4）取材部位及切面方向：組織塊應包括各臟器的重要結構和主要病變部位，體積大和分葉的器官視不同組織取多個部位。病理組織最好選取病變與正常組織交界處，以便對比；取材時應取最有利于觀察上述部位的切面方向。如腎臟組織應包括皮質(zhì)、髓質(zhì)和腎盂；長骨縱切可將其組織結構完整展現(xiàn)；纖維組織、肌肉組織、胃腸道、氣管等取材時盡可能按與纖維和肌肉平行走向切取為佳，避免斜切或無規(guī)律切取。5）取材大小及數(shù)量：組織塊力求小而薄，一般標本，以不超過1.5 cm×1.5 cm×0.5 cm為宜，體積小的組織，如甲狀腺和腎上腺可整體取材固定；用于免疫組化染色的組織塊宜更小而??；冰凍切片組織塊可略厚。較容易發(fā)脆的組織，如甲狀腺、肝臟、血塊、淋巴結、大塊癌組織等可適當厚一些，而脂肪組織、肺組織、纖維性腫瘤、平滑肌瘤等致密的或試劑不易滲人的組織應取薄一些。組織塊的數(shù)量依具體情況而定，一般以滿足相關研究需要為準。一6）盡量保持組織的原有形態(tài)，防止其彎曲扭轉(zhuǎn)。對神經(jīng)、肌肉、皮膚等組織則可將其兩端用線扎在木片或硬紙片上固定。胃腸、胰腺等組織，應先平展于草紙上黏著以后，慢慢地放入固定液中。標本上附著的軟組織，如脂肪等，應在不影響觀察的原則下，盡量剝?nèi)セ蚯谐?。組織塊上如有血液、黏液、污物等，應先用生理鹽水沖洗，然后再投入固定液。7）骨組織或組織內(nèi)的鈣化灶，應在固定之后進行脫鈣，再行修切。2.固定（1）主要實驗儀器／器材／重要試劑1）10％緩沖甲醛固定液：甲醛100ml，蒸餾水900ml，NaH2PO4·H204g，Na2HPO4（無水）6.5g。2）4％多聚甲醛固定液：多聚甲醛40g，蒸餾水600ml，加熱，邊加適量的NaOH慢慢溶解后，將pH調(diào)至7.2 ～7.4 ，加入NaH2P04·H204g，Na2HP04（無水）6.5 g，蒸餾水定容到1000ml。（2）實驗操作1）組織放入固定液后，常溫放置24～48h。2）根據(jù)組織塊大小，流水沖洗數(shù)小時后再進行后續(xù)操作。

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