細胞生物學實驗指導

前言

　　細胞是生物體生命活動結(jié)構和功能的基本單位。細胞生物學作為生命科學的支柱學科之一，本身是一門實踐性很強的學科。細胞生物學實驗技術的發(fā)展為細胞生物學研究的持續(xù)深入提供了重要保證。在當今越來越強調(diào)學生實踐和動手能力的趨勢下，豐富實驗教學，引入新的細胞生物學實驗技術，對于學生綜合實踐能力的培養(yǎng)和提高以及把握當今細胞生物學發(fā)展脈絡是非常必要的。細胞生物學作為高等院校生物學教學體系中的主干課程之一，在加強理論課教學的同時，實驗教學的重要性日益突出?！　〖毎飳W發(fā)展迅速，新的實驗技術不斷涌現(xiàn)，為了提高教學水平，需對原有細胞生物學實驗進行增補和修改。為此，我們結(jié)合北京師范大學細胞生物學實驗課多年教學經(jīng)驗的積累和內(nèi)容的總結(jié)，同時參考其他相關教材，確定了本書編寫的基本框架與實驗內(nèi)容?！　”緯木帉懺噲D在實驗技術上具備基礎性、科學性和先進性，并在實驗教學理念、方法和目的上進行一些新的嘗試。書中不僅對實驗過程盡可能具體地描述，還介紹實驗原理與技術背景，同時提出教學建議，力圖從教和學的各個環(huán)節(jié)全面統(tǒng)籌安排內(nèi)容?！　∧壳芭c細胞生物學相關的實驗內(nèi)容繁多，編寫過程中作者進行了認真的調(diào)研、比較分析和選擇，力求做到：①內(nèi)容豐富，基本涵蓋全國大部分高校生命科學相關專業(yè)所開設的細胞生物學實驗內(nèi)容；②經(jīng)典實驗與現(xiàn)代實驗技術相結(jié)合，既包括經(jīng)典的、常規(guī)的實驗，如DNA的細胞化學一Feulgen反應、小鼠骨髓染色體的制備等，又有部分現(xiàn)代的細胞生物學實驗，如細胞mRNA原位雜交技術、流式細胞光度術檢測細胞周期、卵母細胞的超排及顯微注射技術等；③實驗方法可靠，所選擇的實驗技術已在教學和科研工作中熟練使用；④保證實驗順利進行，書后設有附錄部分，介紹常用細胞生物學實驗儀器簡要操作程序與維護、常用細胞生物學實驗試劑與溶液的配制、常用細胞系或細胞株等，這將為整個實驗工作提供很大的幫助。

內(nèi)容概要

本書為細胞生物學配套實驗教材，全書包括實驗方法介紹和附錄。所介紹的實驗方法既有經(jīng)典的較為簡單的實驗，也有新的較為復雜的實驗，基本涵蓋了目前各高等學校細胞生物學實驗教學中所涉及的實驗，包括顯微鏡基本原理與使用、亞細胞結(jié)構觀察、染色體制備與分析、細胞內(nèi)生物大分子的分析、細胞培養(yǎng)與生長特性分析、細胞融合與顯微操作技術，共6章39個實驗。附錄提供了實驗中常用到的相關參數(shù)與資料，包括常用細胞生物學實驗儀器簡要操作程序與維護、常用細胞生物學實驗試劑與溶液、顯微鏡鏡頭、濾光片、發(fā)射／激發(fā)譜和常用符號說明、常用細胞系或細胞株等。    本書可供綜合性大學、農(nóng)林、醫(yī)學、師范院校相關專業(yè)本科生和研究生的細胞生物學實驗教學使用，也可作為相關研究人員實驗工作的參考書。讀者在使用過程中，可根據(jù)條件和需要對本書內(nèi)容進行選擇。

書籍目錄

前言第一章　顯微鏡基本原理與使用　實驗1　普通光學顯微鏡的基本構造和使用方法　實驗2　熒光顯微鏡及其他特殊用途顯微鏡的基本構造和使用方法　實驗3　共聚焦顯微鏡基本構造和使用方法　實驗4　顯微數(shù)碼技術　實驗5　石蠟切片的制作及HE染色　實驗6　透射電子顯微鏡工作原理和使用(超薄切片技術)  　實驗7　掃描電子顯微鏡工作原理和使用(臨界點干燥技術)  第二章  亞細胞結(jié)構觀察　實驗8　細胞核與線粒體的提取與觀察　實驗9　細胞骨架的觀察　實驗10　葉綠體的分離與觀察　實驗11　細胞中心體的觀察　實驗12　著絲粒蛋白的間接免疫熒光染色與觀察第三章   染色體制備與分析　實驗13　小鼠骨髓細胞染色體的制備　實驗14　培養(yǎng)細胞染色體的制備　實驗15　人外周血淋巴細胞細胞分離、培養(yǎng)及染色體標本制作  　實驗16　染色體G帶染色　實驗17　細胞核仁組織區(qū)的觀察　實驗18　兩棲類燈刷染色體的制備　實驗19　染色體FISH技術第四章  細胞內(nèi)生物大分子的分析　實驗20　DNA的定量測定——Feulgen反應　實驗21　細胞中酸性磷酸酶的定位　實驗22　細胞中mRNA原位雜交技術　實驗23　單細胞電泳技術第五章　細胞培養(yǎng)與生長特性分析第六章　細胞融合與顯微操作技術　參考文獻附錄圖版

章節(jié)摘錄

　　1）顯微鏡的放置　　取出顯微鏡時應右手持住鏡臂，左一手托住鏡座，將顯微鏡輕放在左前方的實驗臺上，注意輕拿輕放。檢查顯微鏡的各部件是否完整和正常。先確認顯微鏡的電源開關處于關閉狀態(tài)，亮度調(diào)整電位器處于最小，再將電源插頭插入插座，然后打開光源開關，調(diào)節(jié)光強到合適大小.不帶自備光源的顯微鏡以散射日光或室內(nèi)燈光作為光源，不能采用直射陽光。晴天可用近窗的散射光作光源?！　?）調(diào)整光源和光闌　　在接通電源或利用反光鏡取得光源后，取下目鏡，直接觀察鏡筒內(nèi)向上射的光線，調(diào)節(jié)聚光鏡上的孔徑光闌，使其孔徑略小于視野，此時物鏡的數(shù)值孔徑和聚光鏡的數(shù)值孔徑一致，既可充分發(fā)揮該物鏡的分辨力，又能把該物鏡接受范圍之外的多余光擋住，否則這些光線產(chǎn)生的干擾會影響清晰度。若將孔徑光闌開放過大，超過物鏡的數(shù)值孔徑時，便產(chǎn)生光斑；若收縮孔徑光闌過小，分辨力下降，反差增大。原則上使用不同的物鏡時應相應調(diào)節(jié)孔徑光闌使之匹配，但一般只在需細致觀察標本才這樣做，放回目鏡后，通過調(diào)節(jié)聚光器上的視場光闌或調(diào)節(jié)亮度滑鈕或旋鈕，選擇最佳的照明效果?！　?.低倍鏡的使用低倍鏡可將標本放大100－200倍，一般用于為高倍鏡或油鏡觀察確定視野。無論最終以多少放大倍數(shù)觀察標本，都必須從低倍鏡開始?！　?）放標本片　　轉(zhuǎn)動粗調(diào)節(jié)鈕，將鏡筒略升高（或?qū)⑤d物臺下降），使物鏡與載物臺距離拉開，留出放置標本的空間.取一玻片標本放在載物臺上，注意使載有標本（常有蓋玻片）的一面朝上，切不可放反，用標本移動器彈簧夾夾住，然后轉(zhuǎn)動標本移動器旋鈕，將所要觀察的部位調(diào)到通光孔的正中?；蛴脡浩瑠A夾住，使待觀察的部分居于正中。由于生物樣品在觀察前常要進行染色，因此可先用肉眼注意觀察玻片上正常著色的部分，將其放人光路。旋轉(zhuǎn)物鏡轉(zhuǎn)換器（切忌手持物鏡移動），將低倍鏡對準載物臺中央的通光孔。轉(zhuǎn)到正確位置時可有轉(zhuǎn)換器被卡進位的感覺或聽到碰叩聲。

圖書封面

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