雜交水稻親本SSR指紋圖譜

內(nèi)容概要

　　《雜交水稻親本SSR指紋圖譜》采用國家技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)和出入境行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)推薦的SSR核心引物和規(guī)定的技術(shù)方法，對來自全國各地的133個(gè)雜交水稻骨干親本逐一進(jìn)行SSR分析，構(gòu)建了我國主要雜交水稻親本的SSR指紋圖譜，并初步創(chuàng)建了由48位數(shù)字組成的分子身份證。通過將受檢親本樣品與標(biāo)準(zhǔn)親本的指紋圖譜進(jìn)行比對，即可進(jìn)行真實(shí)性鑒定及純度分析：也可通過不同親本間的指紋圖譜分析與比較，了解其遺傳相似性，為雜交稻新組合的選育提供親本選配的指導(dǎo)?！峨s交水稻親本SSR指紋圖譜》可作為水稻種子質(zhì)量檢測、品種權(quán)管理及司法鑒定、種質(zhì)資源和品種選育等從業(yè)人員的參考用書。本書也是國家科技支撐計(jì)劃（課題編號(hào)：2006BAD13801）研究過程中的一項(xiàng)階段性成果。

書籍目錄

第一章雜交水稻親本DNA指紋圖譜構(gòu)建 第一節(jié)術(shù)語和定義 第二節(jié)材料與方法 第三節(jié)數(shù)據(jù)記錄與統(tǒng)計(jì) 第四節(jié)雜交水稻親本SSR指紋數(shù)據(jù)庫的構(gòu)建 第五節(jié)聚類分析 第二章秈型三系不育系指紋圖譜 1.Ⅱ—32A 2.博A 3.珞紅3A 4.川香29A 5.岡46A 6.金23A 7.秋A 8.龍?zhí)仄諥 9.天豐A 10.五豐A 11.珍汕97A 12.351A 13.協(xié)青早A 14.K17A 15.瀘香618A 第三章秈型兩系不育系指紋圖譜 1.2301S 2.6303S 3.8130S 4.矮占43S 5.矮紫—1S 6.株1S 7.廣占63S 8.綠102S 9.綠敏S 10.GD—7S 11.廣際58S 12.03S 13.新華S 14.033S 15.Y58S 16.C815S 17.1892S 18.培矮64S 第四章秈型恢復(fù)系及品種指紋圖譜 1.輻恢838 2.8019 3.9019 4.9308 5.IR24 6.IR26 7.R752 8.成恢448 9.成恢047 10.桂99 11.瀘恢17 12.0M052 13.麗恢6216 14.057 15.密陽46 16.綿恢725 17.明恢100 18.明恢63 19.明恢70 20.明恢72 21.明恢77 22.明恢86 23.黔香恢788 24.蜀恢527 25.萬恢88 26.鹽恢559 27.云恢72 28.浙恢7954 29.鎮(zhèn)恢084 30.測64 31.制選 32.9311 33.RH003 34.W1126 35.紫恢100 36.紫恢128 37.紅98 38.綠稻24 39.茂九 40.特青 41.R288 42.R6547 43.R118 44.3401 45.D68 46.雙七占 47.安選6號(hào) 48.91499 49.安香2號(hào) 50.成恢178 51.豐華占 52.豐美占 53.廣香秈 54.黃華占 55.皖秈316 56.旱秈14 57.四喜占 58.皖稻89 59.中秈898 60.中秈2503 61.中粕a352 62.鎮(zhèn)秈96 63.揚(yáng)輻糯4號(hào) 64.中旱22 65.泰國秈 66.中香6號(hào) 67.鎮(zhèn)秈122 68.綠旱1號(hào) 69.0293 70.宜恢1577 第五章粳型三系不育系指紋圖譜 1.80—4A 2.9201A 3.雙九A 4.25A 5.WA 第六章粳型兩系不育系指紋圖譜 1.7001S 2.78S 第七章粳型恢復(fù)系及品種指紋圖譜 1.4183 2.C4115 3.N11R05 4.NITR08 5.廣恢102—336 6.廣恢102 7.武香粳14號(hào) 8.凡6 9.凡7 10.R918 11.R—9159 12.H02 13.皖恢98 14.C418 15.HP121 16.皖恢9號(hào) 17.Xh02 18.Xh05 19.制1 20.皖稻68 21.M3112 22.新121 23.鹽稻8號(hào) 參考文獻(xiàn)

章節(jié)摘錄

版權(quán)頁：   插圖：    2.PCR擴(kuò)增反應(yīng)體系和反應(yīng)程序 PCR擴(kuò)增反應(yīng)體系見表3，反應(yīng)程序?yàn)椋?5℃預(yù)變性5 min后，94℃ 30 s，55℃ 30 s.72℃40 s，循環(huán)40次，72℃延伸7min，12℃保存。 3.擴(kuò)增產(chǎn)物電泳檢測 采用非變性聚丙烯凝膠電泳系統(tǒng)檢測PCR擴(kuò)增產(chǎn)物。 （1）凝膠制備。用自來水清洗玻璃板，晾干后安裝到膠框上（膠厚1.0mm），用1％瓊脂糖封底；待瓊脂凝固后，在一定體積的8％非變性聚丙烯酰胺溶液中加入0.5％體積的10％過硫酸銨溶液和0.1％體積的TEMED，充分混勻后，立即灌膠，灌膠后及時(shí)插入梳齒；膠凝固后，將膠框安裝至電泳槽上，擰緊螺栓。 （2）電泳。在20μL PCR產(chǎn)物中加入4～6μL加樣緩沖液，充分混勻；電泳槽加入電泳緩沖液，中間的液面應(yīng)超過內(nèi)側(cè)的玻璃板上緣，兩側(cè)的液面應(yīng)漫過鉑金絲；4～5 V／cm恒電壓，預(yù)電泳10～30 min，每孔加樣1～3μL；13～20 V／cm恒電壓，電泳1～2 h，二甲苯氰FF電泳到底部即可：電泳結(jié)束后，關(guān)閉電源，取下玻璃板，將兩塊玻璃板輕輕撬開，將凝膠從玻璃板上剝離，并及時(shí)做記號(hào)以區(qū)別膠板。 （3）銀染。 固定：將凝膠浸入盛有固定液的染色盤中，置于搖床上搖動(dòng)固定12min。 染色：棄去固定液，加入新配制的染色液中搖動(dòng)染色12min。 漂洗：棄去染色液，加入適量ddH2O搖動(dòng)1 min；棄去ddH2O，再加入適量ddH2O（含0.02％體積的1％硫代硫酸鈉溶液）搖動(dòng)1 min。 顯影：棄去ddH2O，加入新配制的顯影液搖動(dòng)至顯出清晰的條帶。 定影：棄去顯影液，加入固定液定影5 min。 記錄：用數(shù)碼相機(jī)照相或在膠片觀察燈上直接記錄結(jié)果。 注：固定液、染色液、ddH2O和顯影液的量可根據(jù)膠板數(shù)量和大小調(diào)整，以沒過膠面為準(zhǔn)。 （4）SSR指紋檢測所需試劑見表4。 第三節(jié)數(shù)據(jù)記錄與統(tǒng)計(jì) 利用48對SSR核心引物分別對133份水稻材料進(jìn)行擴(kuò)增。根據(jù)PCR擴(kuò)增的結(jié)果，視每條多態(tài)性條帶為1個(gè)等位基因，有條帶出現(xiàn)賦值為“1”，無條帶出現(xiàn)賦值為“0”，以此方法記錄各引物標(biāo)記的電泳結(jié)果并將其數(shù)字化（表5），以供聚類分析和遺傳距離的計(jì)算。 根據(jù)擴(kuò)增片段與分子量標(biāo)志的相對遷移率，記錄每個(gè)標(biāo)記引物對133份水稻材料擴(kuò)增的等位基因數(shù)和片段大小，并按分子量排成階梯圖（圖1），從大到小以阿拉伯?dāng)?shù)字1、2、3、4……9標(biāo)注，9個(gè)以上的等位基因，以大寫英文字母A、B、C……2標(biāo)注。這樣每一品種都可以用一組48位數(shù)字或數(shù)字與字母的組合來表示核心引物的擴(kuò)增結(jié)果，并作為該品種初步的分子身份證。表3列出了6個(gè)秈型不育系用48對引物擴(kuò)增的條帶特征即分子身份證，如珍汕97A的分子身份證即可表示為：6417 2677 1422 1544 5244 1231 7324 4218 5333 4731 2415 1621。

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