生物化學(xué)與分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)

前言

本書系蘇州大學(xué)醫(yī)學(xué)部實(shí)驗(yàn)中心策劃的生物學(xué)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)叢書之一，由江蘇省生物學(xué)基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)示范中心資助出版。近年來，生物化學(xué)與分子生物學(xué)的基礎(chǔ)理論與實(shí)驗(yàn)技術(shù)發(fā)展非常迅速，為了適應(yīng)時(shí)代的發(fā)展和生物科學(xué)創(chuàng)新型人才的培養(yǎng)，許多高等院校對生物學(xué)相關(guān)專業(yè)的教學(xué)計(jì)劃進(jìn)行了較大幅度的調(diào)整和改革，在實(shí)驗(yàn)教學(xué)方面也開展了許多有益的探索。我們將原來依附于生物化學(xué)和分子生物學(xué)的實(shí)驗(yàn)課獨(dú)立出來，單獨(dú)開設(shè)。實(shí)驗(yàn)內(nèi)容分基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)、綜合實(shí)驗(yàn)和自主創(chuàng)新實(shí)驗(yàn)3個(gè)部分?；A(chǔ)實(shí)驗(yàn)主要是經(jīng)典實(shí)驗(yàn)方法和技術(shù)，綜合實(shí)驗(yàn)主要是一些難度較大、花時(shí)較多的實(shí)驗(yàn)，自主創(chuàng)新實(shí)驗(yàn)主要是學(xué)生根據(jù)興趣自主設(shè)計(jì)的研究性實(shí)驗(yàn)。這樣既適合生物學(xué)大類招生又與完全學(xué)分制相呼應(yīng)。我們組織長期從事生物化學(xué)與分子生物學(xué)教學(xué)和研究的一線教師對原來使用多年的“生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)”和“分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)”講義進(jìn)行了充實(shí)和完善，并增加了生物化學(xué)與分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)理論與技術(shù)方面的內(nèi)容，從而保證了本教材的完整性。本書涉及面較廣，并且有一些較大型的連續(xù)性實(shí)驗(yàn)，還有部分實(shí)驗(yàn)來源于教師的科研成果。我們希望通過本書的學(xué)習(xí)，使學(xué)生能夠順利完成根據(jù)實(shí)際情況所選擇的實(shí)驗(yàn)內(nèi)容，掌握生物化學(xué)與分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)最基本的技術(shù)，并在今后的研究和工作中能靈活應(yīng)用。由于編寫時(shí)間緊以及編者的水平有限，本教材的缺點(diǎn)、錯(cuò)誤在所難免，敬請同學(xué)和同仁們不吝賜正。

內(nèi)容概要

本書涉及面較廣，并且有一些較大型的連續(xù)性實(shí)驗(yàn)，還有部分實(shí)驗(yàn)來源于教師的科研成果。我們希望通過《生物化學(xué)與分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)》的學(xué)習(xí)，使學(xué)生能夠順利完成根據(jù)實(shí)際情況所選擇的實(shí)驗(yàn)內(nèi)容，掌握生物化學(xué)與分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)最基本的技術(shù)，并在今后的研究和工作中能靈活應(yīng)用。

書籍目錄

第一篇　基礎(chǔ)理論和技術(shù)　第一章　離心技術(shù)　　第一節(jié)　基本原理　　第二節(jié)　離心機(jī)的種類和基本結(jié)構(gòu)　　第三節(jié)　常用離心技術(shù)　　第四節(jié)　離心技術(shù)在生物學(xué)研究中的應(yīng)用　第二章　分光光度法　　第一節(jié)　基本原理　　第二節(jié)　分光光度計(jì)　　第三節(jié)　分光光度技術(shù)的應(yīng)用　第三章　層析技術(shù)　　第一節(jié)　層析基本理論　　第二節(jié)　常用的層析技術(shù)　　第四章　電泳技術(shù)　　第一節(jié)　基本原理　　第二節(jié)　電泳的分類　　第三節(jié)　常用的電泳技術(shù)　第五章　生物化學(xué)　　實(shí)驗(yàn)樣品制備技術(shù)　　第一節(jié)　生物大分子制備的特點(diǎn)和一般步驟　　第二節(jié)　植物樣品的制備　　第三節(jié)　動(dòng)物樣品的制備　　第四節(jié)　微生物樣品的制備　　第五節(jié)　生物大分子——蛋白質(zhì)　　第六節(jié)　生物大分子——核酸　第六章　真核生物基因文庫的構(gòu)建　　第一節(jié)　cDNA文庫的概念　　第二節(jié)　cDNA文庫構(gòu)建的策略　　第三節(jié)　cDNA文庫的篩選　第七章　核酸雜交技術(shù)　　第一節(jié)　分子雜交的一般過程　　第二節(jié)　分子雜交的種類　　第三節(jié)　探針　　第四節(jié)　印跡技術(shù)　　第五節(jié)　雜交體系　　第六節(jié)　雜交信號的檢測方法　第八章　聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)　　第一節(jié)　聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)的發(fā)展歷史　　第二節(jié)　PCR的原理　　第三節(jié)　PCR體系與條件　　第四節(jié)　PCR循環(huán)參數(shù)的確定　　第五節(jié)　PCR需注意的事項(xiàng)　　第六節(jié)　PCR的種類及用途　第九章　基因工程　　第一節(jié)　基因工程的基本概念　　第二節(jié)　基因工程的發(fā)展歷史　　第三節(jié)　基因工程的研究意義　　第四節(jié)　基因工程的基本內(nèi)容　第十章　DNA序列測定技術(shù)　　第一節(jié)　概述　　第二節(jié)　Sanger雙脫氧鏈終止法　　第三節(jié)　Maxam-GilbertDNA化學(xué)降解法　　第四節(jié)　測序策略　　第五節(jié)　DNA序列測定自動(dòng)化　第十一章　生物芯片技術(shù)　　第一節(jié)　生物芯片的概念　　第二節(jié)　生物芯片技術(shù)的發(fā)展歷史　　第三節(jié)　生物芯片的分類及特點(diǎn)　　第四節(jié)　常用生物芯片的應(yīng)用第二篇　生物化學(xué)　　實(shí)驗(yàn)　第十二章　生物化學(xué)基礎(chǔ)　　實(shí)驗(yàn)　　實(shí)驗(yàn)一　緩沖溶液的配制和氨基酸兩性性質(zhì)的測定　　實(shí)驗(yàn)二　分光光度計(jì)線性分辨范圍的測定　　實(shí)驗(yàn)三　還原糖和總糖含量的測定　　實(shí)驗(yàn)四　用陽離子交換樹脂攝取氯化鈉　　實(shí)驗(yàn)五　蛋白質(zhì)的沉淀反應(yīng)　　實(shí)驗(yàn)六　定磷法測定RNA含量　　實(shí)驗(yàn)七　紫外吸收法測定核酸的含量　　實(shí)驗(yàn)八　可溶性糖的硅膠G薄層層析　　實(shí)驗(yàn)九　血糖含量的測定　　實(shí)驗(yàn)十　血清總膽固醇的測定　　實(shí)驗(yàn)十一　血清甘油三酯的測定　　實(shí)驗(yàn)十二　維生素C含量的測定(2，6-二氯酚靛酚法)　　實(shí)驗(yàn)十三　氨基氮測定——甲醛滴定法　　實(shí)驗(yàn)十四　酵母RNA的分離及組分鑒定　第十三章　生物化學(xué)綜合　　實(shí)驗(yàn)　　實(shí)驗(yàn)十五　雙縮脲法測定蛋白質(zhì)含量　　實(shí)驗(yàn)十六　Folin-酚試劑法測定蛋白質(zhì)含量　　實(shí)驗(yàn)十七　考馬斯亮藍(lán)法測定蛋白質(zhì)含量　　實(shí)驗(yàn)十八　離子交換柱層析法分離氨基酸　　實(shí)驗(yàn)十九　從牛奶中分離制備酪蛋白　　實(shí)驗(yàn)二十　葡聚糖凝膠層析　　實(shí)驗(yàn)二十一　等電聚焦電泳法測定蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)　　實(shí)驗(yàn)二十二　醋酸纖維薄膜電泳法分離血清蛋白質(zhì)　　實(shí)驗(yàn)二十三　聚丙烯酰胺凝膠電泳法分離血清蛋白質(zhì)　　實(shí)驗(yàn)二十四　SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳法測定蛋白質(zhì)的相對分子量　　實(shí)驗(yàn)二十五　蛋白質(zhì)印跡(Western　blot)　　實(shí)驗(yàn)二十六　血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性的測定　　實(shí)驗(yàn)二十七　酶的專一性　　實(shí)驗(yàn)二十八　激活劑和抑制劑對酶活性的影響　　實(shí)驗(yàn)二十九　溫度對酶活性的影響　　實(shí)驗(yàn)三十　pH對酶活性的影響　　實(shí)驗(yàn)三十一　底物濃度對酶促反應(yīng)速度的影響——Km值的測定　　實(shí)驗(yàn)三十二　綠豆超氧化物歧化酶的提取　　實(shí)驗(yàn)三十三　硫酸銨沉淀法純化SOD　　實(shí)驗(yàn)三十四　葡聚糖凝膠層析脫鹽　　實(shí)驗(yàn)三十五　有機(jī)溶劑分級沉淀法純化SOD　　實(shí)驗(yàn)三十六　離子交換層析法純化SOD　　實(shí)驗(yàn)三十七　SOD活性的測定　　實(shí)驗(yàn)三十八　綠豆SOD同工酶的鑒定　　實(shí)驗(yàn)三十九　等電聚焦電泳法測定SOD的純度及等電點(diǎn)第三篇　分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)　第十四章　分子生物學(xué)基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)　　實(shí)驗(yàn)四十　質(zhì)粒DNA的提取及純化　　實(shí)驗(yàn)四十一　質(zhì)粒DNA的瓊脂糖凝膠電泳　　實(shí)驗(yàn)四十二　DNA酶切與連接　　實(shí)驗(yàn)四十三　DNA片段的回收　　實(shí)驗(yàn)四十四　植物組織基因組DNA的提取　　實(shí)驗(yàn)四十五　動(dòng)物組織基因組DNA的提取　　實(shí)驗(yàn)四十六　細(xì)菌基因組DNA的制備　　實(shí)驗(yàn)四十七　大腸桿茵感受態(tài)細(xì)胞的制備　　實(shí)驗(yàn)四十八　外源DNA的連接與轉(zhuǎn)化　　實(shí)驗(yàn)四十九　重組轉(zhuǎn)化子的酶切鑒定　第十五章　分子生物學(xué)綜合　　實(shí)驗(yàn)　　實(shí)驗(yàn)五十　PCR擴(kuò)增外源基因　　實(shí)驗(yàn)五十一　Triz01法提取總RNA　　……第四篇　創(chuàng)新性實(shí)驗(yàn)附錄參考文獻(xiàn)　

章節(jié)摘錄

插圖：值得注意的是，根據(jù)酶工程原理和技術(shù)組織的產(chǎn)物生產(chǎn)方式表面上看起來似乎與細(xì)胞微型反應(yīng)器無關(guān)，但從生物催化劑概念拓展和酶制劑來源的角度上考察，這種生產(chǎn)方式在很大程度上也依賴于細(xì)胞微型反應(yīng)器的使用，因?yàn)槟壳肮I(yè)上使用的大部分酶制劑實(shí)際上是發(fā)酵工程的中間產(chǎn)品，而且酶工程產(chǎn)業(yè)中相當(dāng)比例的生物催化劑形式是微生物細(xì)胞，后者也同樣來自于發(fā)酵過程。菌種誘變篩選程序和細(xì)胞工程中的細(xì)胞融合技術(shù)分別是微生物和動(dòng)植物微型反應(yīng)器品質(zhì)改良的傳統(tǒng)手段，而DNA重組技術(shù)則是創(chuàng)建所有類型細(xì)胞微型反應(yīng)器（即工程菌或工程細(xì)胞）的強(qiáng)有力的現(xiàn)代化工具。第一代基因工程是將單一外源基因?qū)胧荏w細(xì)胞，使之高效表達(dá)外源基因編碼的蛋白質(zhì)或多肽，它們基本上是以天然的結(jié)構(gòu)存在的；第二代基因工程（即蛋白質(zhì)工程）通過基因操作修飾改變蛋白多肽的序列結(jié)構(gòu)，產(chǎn)生生物功能更為優(yōu)良的非天然蛋白變體（mutein）；而作為第三代基因工程的途徑工程則在基因水平上局部設(shè)計(jì)細(xì)胞固有的代謝途徑和遺傳性狀，并賦予細(xì)胞更為優(yōu)越甚至嶄新的產(chǎn)物生產(chǎn)品質(zhì)。

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