出入境動物檢驗(yàn)檢疫技術(shù)研究

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第一章 禽病檢測技術(shù) 9株水禽H5N1亞型禽流感病毒株主要基因信息分析 PCR快速檢測鴨病毒性腸炎標(biāo)準(zhǔn)方法的建立 表達(dá)H7亞型禽流感HA基因桿狀病毒轉(zhuǎn)移載體的構(gòu)建及重組病毒的鑒定 不同動物來源新城疫病毒對不同種屬細(xì)胞的感染性分析 產(chǎn)蛋鴨大腸桿菌疾病的檢定及其結(jié)果分析 鵝源副粘病毒和新城疫病毒與受體結(jié)合動力學(xué)比較 鴿源H5N1亞型禽流感病毒株的全基因克隆及序列分析 基因芯片技術(shù)檢測新城疫病毒 基于DPV UL6基因主要抗原域蛋白免疫組化方法的建立及其在DPV強(qiáng)毒感染鴨組織中定位分布規(guī)律的檢測 昆蟲／桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)規(guī)?；磉_(dá)禽流感H7HA重組目的蛋白的 利用IBDV VP3蛋白初步建立雞傳染性法式囊病間接El。ISA方法 兩株鵝源H5N1亞型禽流感病毒分離株全基因序列分析 禽流感病毒檢測方法標(biāo)準(zhǔn)比較及在國際能力驗(yàn)證上應(yīng)用 禽流感群特異性間接原位RT—PCR檢測方法研究 實(shí)時熒光定量PCR快速檢測鴨病毒性腸炎標(biāo)準(zhǔn)方法的建立 西藏拉薩市H5、H9型禽流感血清學(xué)監(jiān)測 新城疫病毒融合蛋白的真核表達(dá)及其單克隆抗體的研制、應(yīng)用 鴨病毒性腸炎g8基因的原核表達(dá)及產(chǎn)物的抗原性分析 鴨腸炎病毒UL6基因8細(xì)胞抗原表位預(yù)測、主要抗原域蛋白原核表達(dá)及其抗體制備 鴨新城疫病毒山東分離株F基因的克隆和序列分析 第二章豬病檢測技術(shù) 應(yīng)用實(shí)時熒光定量TaqManRT—PCR檢測豬水泡病毒的研究 豬水泡病病毒VPl基因的克隆和表達(dá) 多重PCR同時檢測鑒別口蹄疫、豬水泡和水泡性口炎病毒 非洲豬瘟病毒VP73基因克隆及在大腸桿菌中的高效表達(dá) 進(jìn)境種豬繁殖與呼吸綜合征病毒快速檢測鑒定初探 口蹄疫通用型實(shí)時熒光RT—PCR檢測方法的建立 美洲型豬繁殖與呼吸綜合征病毒及其變異株（NSP2 1 594～1 680變異RT—PCR鑒別檢測方法的建立 豬胸膜肺炎放線桿菌PCR快速分型系統(tǒng)的建立及應(yīng)用 液相阻斷ELISA和IH檢測O型口蹄疫抗體相關(guān)性研究 乙型腦炎病毒NS3基因?qū)崟rRT—LAMP快速檢測方法的建立 應(yīng)用實(shí)時熒光定量TaqMan RT—PCR檢測口蹄疫病毒的研究 豬Ⅱ型圓環(huán)病毒檢測方法的建立及應(yīng)用 豬傳染性胃腸炎（TGE）病毒在組織細(xì)胞上增殖及其抗體的鑒定研究 豬戊型肝炎病毒ELISA檢測體系建立及其應(yīng)用 豬細(xì)小病毒SCl株非結(jié)構(gòu)蛋白NSl基因的原核表達(dá)及PPA—NS1—ELI：建立 …… 第三章牛羊病檢測技術(shù) 第四章馬病檢測技術(shù) 第五章水生動物病檢測技術(shù) 第六章細(xì)菌病原體 第七章農(nóng)獸藥殘留檢測技術(shù) 第八章物種鑒定及其他 第九章管理及其他綜述類 第十章其他論文摘要

章節(jié)摘錄

版權(quán)頁：   插圖：   1.8 TaqMan RT—PCR的特異性、敏感性和重復(fù)性 用FMDV，VSV以及正常BHK一21細(xì)胞、野外采集豬的組織樣品和血清進(jìn)行特異性比較檢測。對SVDV RNA樣品進(jìn)行l(wèi)0倍系列稀釋，用常規(guī)RT—PCR和TaqMan RT—PCR檢測，比較它們的敏感性。為了評估TaqManRT—PCR檢測SVDV方法中的組內(nèi)和組間試驗(yàn)的重現(xiàn)性、穩(wěn)定性，應(yīng)用10倍系列稀釋的SVDV RNA反復(fù)進(jìn)行TaqMan RT—PCR檢測，每次試驗(yàn)的每個樣品做6個平行的反應(yīng)管，重復(fù)6次。 2結(jié)果 2.1 TaqMan RT—PCR的特異性擴(kuò)增分析 應(yīng)用TaqMan RT—PCR對SVDV、FMDV、VSV、正常BHK21細(xì)胞等試驗(yàn)樣品進(jìn)行檢測。從每個樣品TaqMan RT—PCR擴(kuò)增的平均Ct值中可以看出，SVDV都出現(xiàn)實(shí)時熒光增長曲線，有強(qiáng)的實(shí)時熒光信號，表現(xiàn)為陽性擴(kuò)增，不同稀釋度的陽性樣品Ct值均小于或等于35.00。FMDV、VSV、BKH一21細(xì)胞、豬正常組織陰性樣品和空白對照的Ct值均大于38.0或無Ct值，無擴(kuò)增曲線，一直為水平線，試驗(yàn)特異性強(qiáng)，（見圖1）。經(jīng)對大量陽性和陰性樣品檢測結(jié)果的統(tǒng)計分析，確定了Ct值38.0可作為陽性和陰性的臨界值（cut—off）。Ct值大于38.0可判為陰性，Ct值小于或等于35.0可判為陽性，在35.0～38.0之問為可疑，須重新試驗(yàn)。熒光定量PCR檢測SVDV的特異性強(qiáng)，敏感性高，重復(fù)性很好。 2.2 引物和探針及其濃度的篩選 TaqMan RT—PCR反應(yīng)混合物中引物、探針之間的非特異性分子競爭抑制會影響到擴(kuò)增效率和敏感性，需要選擇引物和探針的最佳濃度配比，以獲得TaqManRT—PCR反應(yīng)的最低Ct值和最高&Rn，提高擴(kuò)增效率和敏感性。

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