生物化學(xué)與分子生物學(xué)實驗教程

前言

現(xiàn)代醫(yī)學(xué)是一門實驗科學(xué)。醫(yī)學(xué)院校在培養(yǎng)學(xué)生時一般都很重視實驗教學(xué)，北京大學(xué)醫(yī)學(xué)部也是如此。但在我的印象中，以前都是各學(xué)科單獨設(shè)立實驗課程，彼此多有重復(fù)。從內(nèi)容上看，有相當(dāng)部分只是理論課上某些結(jié)論的印證，學(xué)生們往往對著實驗指導(dǎo)一步一步往下操作，實驗結(jié)束、報告寫完，腦子里并沒有留下多少印象。近些年來，北京大學(xué)醫(yī)學(xué)部基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院圍繞培養(yǎng)創(chuàng)新人才的目標(biāo)，在教學(xué)內(nèi)容、教學(xué)方法、課程模式、考核體系等方面進行了新的探索和實踐，其中也包括實驗教學(xué)的改革。他們在1998年創(chuàng)建了生物醫(yī)學(xué)實驗教學(xué)中心，十年來對12門基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)課程的實驗教學(xué)進行了重組、整合和改革，打破了“單一課程”、“單一實驗室”的原有模式，形成了以機能、形態(tài)、生物化學(xué)與分子生物學(xué)、病原與免疫、細胞生物與遺傳五個模塊和基礎(chǔ)性實驗、綜合性實驗、研究性實驗三個層次所構(gòu)成的基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)實驗教學(xué)體系，并且在實驗內(nèi)容方面注重培養(yǎng)學(xué)生科學(xué)思維，激發(fā)學(xué)生創(chuàng)新活力，提高學(xué)生解決實際問題的能力。我認為北京大學(xué)醫(yī)學(xué)部在基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)實驗課程教學(xué)方面進行的改革是扎實的，是成功的?！侗本┐髮W(xué)醫(yī)學(xué)實驗系列教材》是他們十年改革成果的總結(jié)，值得各醫(yī)學(xué)院校參考。我也衷心希望我國從事醫(yī)學(xué)教育的同道們再接再勵，在實踐中不斷摸索新的經(jīng)驗，思想再解放一些，改革的步伐再邁得大一些，為建立具有中國特色的先進醫(yī)學(xué)教育體系做出新的貢獻。是為序。韓啟德二零零八年四月二十九日

內(nèi)容概要

本書是在編者多年使用的本科生及研究生生物化學(xué)與分子生物學(xué)實驗講義的基礎(chǔ)上，經(jīng)修訂和改編而成。根據(jù)學(xué)科發(fā)展，在原有實驗講義的基礎(chǔ)上，刪去了部分驗證性實驗，增加了一些反映最新進展的實驗技術(shù)。全書包括總則、基本實驗和高級實驗三部分?？倓t介紹生物化學(xué)與分子生物學(xué)實驗操作基本要求以及常用儀器的使用與維護?；緦嶒灠ǖ鞍踪|(zhì)分離與純化、酶學(xué)實驗和核酸提取與分析。除了常規(guī)經(jīng)典的生化分析技術(shù)，新增了SDS-PAGE、等電聚焦電泳、DNA重組與鑒定、PCR等分子生物學(xué)熱門技術(shù)，可作為本科生的普通生物化學(xué)與分子生物學(xué)實驗教材。高級實驗收集了RT-PCR、GST、pulldown、Northern Blot等分子生物學(xué)最新研究技術(shù)，有一定難度，可作為生物化學(xué)與分子生物學(xué)專業(yè)研究生的實驗教材。

書籍目錄

總則  實驗室規(guī)則  基本操作  常用儀器簡介基本實驗  蛋白質(zhì)分離與純化    實驗一 血清的鹽析及含量測定    實驗二 凝膠過濾層析    實驗三 醋酸纖維素膜電泳    實驗四 聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS-PAGE）      實驗五 等電聚焦電泳  酶學(xué)實驗    實驗一 底物濃度對酶促反應(yīng)速度的影響    實驗二 酶濃度對酶促反應(yīng)速度的影響    實驗三 pH對酶促反應(yīng)速度的影響    實驗四 溫度對酶促反應(yīng)速度的影響    實驗五 抑制劑對酶促反應(yīng)速度的影響    實驗六 乳酸脫氫酶粗提液的制備及活力測定  核酸提取與分析    實驗一 質(zhì)粒DNA的微量快速提取    實驗二 質(zhì)粒DNA的酶切與鑒定    實驗三 DNA重組與鑒定    實驗四 聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)（PCR）  高級實驗  實驗一 生肌蛋白的誘導(dǎo)表達和提取  實驗二 蛋白質(zhì)免疫印跡分析（Western Blot）    實驗三 免疫共沉淀  實驗四 GST pull-down分析  實驗五 肝細胞總RNA提取及鑒定  實驗六 RT-PCR技術(shù)  實驗七 探針標(biāo)記  實驗八 Southern Blot  實驗九 Northern Blot  實驗十 電泳遷移率變動分析（EMSA）附錄 化學(xué)試劑的規(guī)格與保管主要參考文獻

章節(jié)摘錄

基本實驗蛋白質(zhì)分離與純化蛋白質(zhì)是一切活細胞和有機體的重要組成成分。細胞和體液中蛋白質(zhì)都是成千上萬種相混合而存在，要分析單個蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)和功能需先分離純化蛋白質(zhì)。通常利用蛋白質(zhì)的兩性解離、等電點、紫外吸收等理化性質(zhì)，采取鹽析、電泳、層析等方法對蛋白質(zhì)進行分離、純化。蛋白質(zhì)分離、純化過程一般可分為以下幾個步驟：（一）材料的預(yù)處理及細胞破碎分離提純某一種蛋白質(zhì)時，首先要把蛋白質(zhì)從組織或細胞中釋放出來，并保持其天然狀態(tài)及活性。因此要采用適當(dāng)?shù)姆椒▽⒔M織和細胞破碎。常用的破碎組織細胞的方法有：①機械破碎法，可使用高速組織搗碎機、勻漿器、研缽等設(shè)備；②滲透破碎法，即在低滲條件使細胞溶脹而破碎；③反復(fù)凍融法，生物組織經(jīng)凍結(jié)后，細胞內(nèi)液結(jié)冰膨脹而使細胞脹破；④超聲波法，使用超聲波振蕩器使細胞破碎；⑤酶法，用溶菌酶破壞微生物細胞等。（二）蛋白質(zhì)的抽提通常選擇適當(dāng)?shù)木彌_液將蛋白質(zhì)提取出來。抽提所用緩沖液的pH、離子強度、組成成分等條件的選擇應(yīng)根據(jù)欲制備的蛋白質(zhì)的性質(zhì)而定。如膜蛋白的抽提需加入表面活性劑（十二烷基磺酸鈉、TritonX-100等），使膜結(jié)構(gòu)破壞，利于蛋白質(zhì)與膜分離。在抽提過程中，應(yīng)注意在低溫下操作，避免劇烈攪拌等，以防止蛋白質(zhì)的變性。

圖書封面

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