生物化學(xué)與分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)

前言

　　生物化學(xué)與分子生物學(xué)是生命科學(xué)的重要組成部分，其發(fā)展日新月異。生物化學(xué)與分子生物學(xué)理論的形成和發(fā)展幾乎都以實(shí)驗(yàn)技術(shù)為基礎(chǔ)，為了順應(yīng)生物化學(xué)與分子生物學(xué)學(xué)科的發(fā)展，貫徹落實(shí)教育部關(guān)于“教材建設(shè)精品化”的精神，我們以使用多年的《生物化學(xué)、分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)》講義為藍(lán)本，重新組織了修訂與編寫，并以《生物化學(xué)與分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)》教材正式出版?！　”窘滩囊源髮W(xué)本科醫(yī)學(xué)類專業(yè)及生物學(xué)專業(yè)學(xué)生為主要讀者群，結(jié)合《生物化學(xué)與分子生物學(xué)》課程學(xué)時(shí)，按教學(xué)大綱必須掌握的實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目進(jìn)行編寫，對(duì)學(xué)習(xí)和加深理解生物化學(xué)與分子生物學(xué)知識(shí)有指導(dǎo)意義。本教材亦可作為相關(guān)領(lǐng)域研究生以及從事相關(guān)領(lǐng)域科學(xué)研究和檢驗(yàn)人員的參考用書。參加本教材編寫的人員是中南大學(xué)湘雅醫(yī)學(xué)院一批多年來(lái)一直從事生物化學(xué)與分子生物學(xué)教學(xué)和科研的骨干教師，書中精選了湘雅醫(yī)學(xué)院生物化學(xué)教研室認(rèn)為學(xué)生必須掌握的教學(xué)實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目，或任教老師認(rèn)為今后科研過(guò)程中會(huì)經(jīng)常遇到的實(shí)驗(yàn)操作。在章節(jié)編排方面，本教材將四大生物化學(xué)技術(shù)和分子生物學(xué)基本原理以及一些常用生化儀器合為實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)理論部分；實(shí)驗(yàn)操作部分緊貼教學(xué)大綱與統(tǒng)編理論教材密切配合，并增加了適用于生物學(xué)專業(yè)學(xué)生的10余項(xiàng)實(shí)驗(yàn)，對(duì)原用于醫(yī)學(xué)專業(yè)的實(shí)驗(yàn)也進(jìn)行了修訂，但見(jiàn)于編者的知識(shí)淺短、局限，仍可能存在不足之處，敬請(qǐng)批評(píng)指正。

內(nèi)容概要

　　《生物化學(xué)與分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)》按教學(xué)大綱編寫，《生物化學(xué)與分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)》分理論基礎(chǔ)和實(shí)驗(yàn)操作兩大部分，共12章。理論基礎(chǔ)部分包括分光光度法、層析技術(shù)、電泳技術(shù)、離心技術(shù)四大生化技術(shù)和分子生物學(xué)基本原理以及一些常用生化儀器介紹，既深入淺出，便于學(xué)生理解，又反映了本學(xué)科的最新研究成果，可拓寬學(xué)生的知識(shí)面；實(shí)驗(yàn)操作部分分為蛋白質(zhì)定性定量分析、核酸定性定量分析、酶學(xué)實(shí)驗(yàn)、代謝實(shí)驗(yàn)、分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)、臨床生化實(shí)驗(yàn)等，在讓學(xué)生了解一些最基本、最經(jīng)常使用的實(shí)驗(yàn)技術(shù)同時(shí)，也對(duì)一些最新的、有應(yīng)用前景的實(shí)驗(yàn)技術(shù)做了詳細(xì)的介紹，并增加了適用于生物學(xué)專業(yè)學(xué)生的10余項(xiàng)實(shí)驗(yàn)，對(duì)原教材用于醫(yī)學(xué)專業(yè)的實(shí)驗(yàn)也進(jìn)行了修訂與增補(bǔ)。

書籍目錄

實(shí)驗(yàn)須知生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)基本操作訓(xùn)練第一部分 常用生物化學(xué)與分子生物學(xué)技術(shù)及原理第1章 分光光度法1.1 基本原理1.2 分光光度法的定性和定量分析1.3 分光光度計(jì)的結(jié)構(gòu)第2章 層析技術(shù)2.1 離子交換色譜法2.2 凝膠過(guò)濾色譜法2.3 吸附層析法2.4 分配色譜法2.5 親和層析法第3章 電泳技術(shù)3.1 基本原理3.2 一般技術(shù)3.3 聚丙烯酰胺凝膠電泳法3.4 蛋白質(zhì)的凝膠聚焦電泳法第4章 離心技術(shù)4.1 基本原理4.2 離心機(jī)和轉(zhuǎn)子的種類4.3 離心分離的種類第5章 分子生物學(xué)基本原理5.1 基本概念5.2 重組DNA技術(shù)第6章 生化實(shí)驗(yàn)常用儀器6.1 722型分光光度計(jì)6.2 精密pH計(jì)6.3 高速離心機(jī)6.4 PCR基因擴(kuò)增儀第二部分 生物化學(xué)與分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)第7章 蛋白質(zhì)定性定量分析實(shí)驗(yàn)一 蛋白質(zhì)的沉淀反應(yīng)1.蛋白質(zhì)的鹽析2.用重金屬鹽沉淀蛋白質(zhì)3.用沉淀生物堿的試劑沉淀蛋白質(zhì)4.用無(wú)機(jī)酸沉淀蛋白質(zhì)5.用有機(jī)酸沉淀蛋白質(zhì)6.加熱沉淀蛋白質(zhì)實(shí)驗(yàn)二 蛋白質(zhì)的兩性反應(yīng)及等電點(diǎn)測(cè)定1.蛋白質(zhì)的兩性反應(yīng)2.酪蛋白的等電點(diǎn)的測(cè)定實(shí)驗(yàn)三 Bradford法測(cè)定蛋白濃度實(shí)驗(yàn)四 血紅蛋白及其衍生物的吸收光譜測(cè)定實(shí)驗(yàn)五 微量凱氏定氮法測(cè)定血清總蛋白實(shí)驗(yàn)六 蛋白質(zhì)定量的紫外分光光度法實(shí)驗(yàn)七 福林一酚試劑法測(cè)定血清總蛋白實(shí)驗(yàn)八 用離子交換層析法分離混合氨基酸實(shí)驗(yàn)九 凝膠過(guò)濾分離高鐵血紅蛋白與高鐵氰化鉀實(shí)驗(yàn)十 凝膠過(guò)濾分離純化脲酶及其活性測(cè)定實(shí)驗(yàn)十一 血清球蛋白的分離與純化實(shí)驗(yàn)十二 醋酸纖維薄膜電泳分離血清蛋白質(zhì)實(shí)驗(yàn)十三 聚丙烯酰胺凝膠電泳分離血清蛋白質(zhì)實(shí)驗(yàn)十四 凝膠等電聚焦分離血清蛋白質(zhì)第8章 核酸定性定量分析實(shí)驗(yàn)十五 酵母RNA的提?。恹}法）及成分鑒定實(shí)驗(yàn)十六 核酸的定量測(cè)定——定磷法第9章 酶學(xué)實(shí)驗(yàn)1.酶活力2.初速度實(shí)驗(yàn)十七 底物濃度及抑制劑對(duì)酶促反應(yīng)速度的影響實(shí)驗(yàn)十八 溫度、pH.對(duì)酶促反應(yīng)速度的影響實(shí)驗(yàn)十九 蔗糖酶與淀粉酶的專一性實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)二十 乳酸脫氫酶及其輔酶的作用實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)二十一 乳酸脫氫酶同工酶活性測(cè)定實(shí)驗(yàn)二十二 丙酮酸脫氫酶活性測(cè)定實(shí)驗(yàn)二十三 糖原合成酶活性測(cè)定第10章 代謝實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)二十四 還原糖的定量測(cè)定1.Somogyl-shaffer-Hartmann法定糖2.比色法定糖實(shí)驗(yàn)二十五 肝糖原的提取和鑒定1.肝糖原提取2.鑒定實(shí)驗(yàn)二十六 粗脂肪的定量測(cè)定——索氏提取法實(shí)驗(yàn)二十七 脂肪皂化值及碘值的測(cè)定1.脂肪皂化值的測(cè)定2.脂肪碘值的測(cè)定實(shí)驗(yàn)二十八 脂肪酸的B-氧化實(shí)驗(yàn)二十九 肝組織的生酮作用實(shí)驗(yàn)三十 轉(zhuǎn)氨基作用及其鑒定第11章 分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)三十一 外周血白細(xì)胞DNA提?。ㄎ⒘糠ǎ?shí)驗(yàn)三十二 瓊脂糖凝膠電泳實(shí)驗(yàn)三十三 大腸埃希菌質(zhì)粒轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)三十四 微量快速質(zhì)粒DNA的提取與純化（堿裂解法）實(shí)驗(yàn)三十五 限制性核酸內(nèi)切酶消化DNA實(shí)驗(yàn)三十六 從瓊脂糖凝膠中回收DNA片段（低熔點(diǎn)膠法）實(shí)驗(yàn)三十七 質(zhì)粒的柱層析純化實(shí)驗(yàn)三十八 聚合酶鏈反應(yīng)實(shí)驗(yàn)三十九 單鏈構(gòu)象多態(tài)性分析1.10％聚丙烯酸胺凝膠的制備2.電泳3.銀染4.凝膠干燥第12章 臨床生化實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)四十 酶法（GOD-PAP法）測(cè)血清葡萄糖實(shí)驗(yàn)四十一 血清尿素氮的測(cè)定實(shí)驗(yàn)四十二 血清甘油三酯測(cè)定實(shí)驗(yàn)四十三 紅細(xì)胞膜的制備實(shí)驗(yàn)四十四 紅細(xì)胞膜蛋白質(zhì)含量測(cè)定（改良福林-酚試劑法）實(shí)驗(yàn)四十五 紅細(xì)胞膜總膽固醇含量的測(cè)定實(shí)驗(yàn)四十六 維生素C含量的測(cè)定（碘滴定法）

章節(jié)摘錄

版權(quán)頁(yè)：插圖：（2）區(qū)帶電泳與等速電泳：電泳時(shí)，在電場(chǎng)力作用下，向兩極移動(dòng)的同號(hào)離子有兩種，一種是被分離樣品中的，一種是電極緩沖液中（或支持介質(zhì)包裹的）電解質(zhì)部分。實(shí)際的主要攜流離子在區(qū)帶電泳和等速電泳中是不一樣的。在區(qū)帶電泳中，整個(gè)系統(tǒng)（正、負(fù)電極槽和分離室）都用被稱為背景電解質(zhì)或支持電解質(zhì)的同一種電解質(zhì)充滿。背景電解質(zhì)的濃度比樣品離子的濃度高，因此，它是主要的攜流離子，并具有一定的緩沖能力，可以提供一個(gè)恒定的pH和電位梯度。樣品中的不同離子在外加電場(chǎng)影響下，各自有一特征的有效遷移率。由于背景電解質(zhì)的高濃度，樣品離子對(duì)電位梯度和pH的影響不可忽略不計(jì)。樣品中的各種離子在一定時(shí)間內(nèi)將按自己的恒定速度移動(dòng)，形成背景電解質(zhì)流動(dòng)中伴隨有樣品離子的流動(dòng)。如果樣品中不同離子的遷移率差別很大的話，那么，經(jīng)過(guò)一段時(shí)間，不同的離子相互分離。在等速電泳巾，背景溶劑自身電導(dǎo)可以忽略不計(jì)，沒(méi)有背景電解質(zhì)來(lái)支持電流，樣品中的各種離子為僅有攜流離子。為了完成樣品離子的分離，我們先用前導(dǎo)電解質(zhì)的遷移率大于所有的樣品離子，尾隨電解質(zhì)遷移率小于所有的樣品離子。接通電場(chǎng)，經(jīng)過(guò)一段時(shí)間的電泳，樣品離子達(dá)到完全分離，得到一系列相互連接的區(qū)帶。第一條樣品區(qū)帶含有具最大遷移率的離子，最后一條樣品區(qū)帶為具有最小遷移率的樣品離子。

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