漢英醫(yī)學分子生物學實驗方法

前言

隨著醫(yī)學生物學知識和技術的迅速成長和不斷更新，對于國內的科研工作者及學生，他們均有了解當今細胞和分子技術的需求。一天，在美國伊利諾伊州芝加哥大學工作的年輕科研專家鄭維，產生了編寫一本漢英文常用實驗方法書籍的想法。中國科研者在了解這些方法的同時，亦可學習專業(yè)的英語單詞。然后，他成功地召集了一批在美國各自領域工作的年輕的專家級中國科研者，由他們組成的編委及編者來撰寫這本很好的專業(yè)書，幾乎囊括了所有基礎的細胞和分子學方法。鄭維在中南大學湘雅醫(yī)學院（前湖南長沙的湖南醫(yī)科大學）獲得博士學位。懷著對分子和細胞生物學的濃厚興趣以及對科學的熱衷，他于2001年來到美國。起初，他在西北大學，后到芝加哥大學做博士后。這本書與其他書籍有兩點不同，第一，此書大多為在美國工作的中國博士后所撰寫，他們非常熟悉實驗方法，編寫此書時他們結合了當今的方法及切身體會和經驗，而不是單純地將·些英語課本翻譯成中文；第二，本書采用漢英文形式，研究者使用這本書的時候，能快捷地學習一些專業(yè)的英語術語。我堅信，對于國內的生物醫(yī)學研究者來說，鄭維及同仁們編寫的這本書將是一本非常有實用價值的工具書。

內容概要

本書是一本介紹當今國外常用醫(yī)學生物學，重點是分子生物學實驗室方法的書籍。全書共分十五部分，六十余章。按照實驗目的、原理、材料、操作方法及注意事項的結構模式介紹每一實驗技術。包括質粒部分，PCR技術，常用的凝膠電泳，放射性探針的制備，DNA 及RNA部分，克隆基因在體外、原核細胞及哺乳動物細胞中的表達，病毒部分，蛋白質檢測與分析，真核基因表達調控，組織學，蛋白質組學技術，細胞凋亡，轉基因、基因敲除鼠的構建等常用方法；同時附有常用試劑和溶液及常用的生物學網站。采納的不僅有簡便、實用的實驗技術，也有經濟、高效的試劑盒方法。采用漢英對照，使讀者能更方便地理解英語的內容。該書可供從事醫(yī)學及生物學領域研究的科研人員參考，特別適合準備到國外深造和正在國外從事實驗室研究者參考。

書籍目錄

1 質粒1.1 用堿裂解并SDS法制備小量質粒DNA1.2 聚乙二醇沉淀法純化質粒DNA1.3 用QIAGEN質粒大提試劑盒制備大量質粒DNA1.4 用氯化鈣制備和轉化大腸桿菌感受太細胞1.5 定向克隆到質粒載體1.6 PCR產物克隆至T載體2 聚合酶鏈式反應2.1 聚合酶鏈式反應體外擴增DNA2.2 反轉錄聚合酶鏈式反應2.3 實時定量PCR3 常用的凝膠電泳3.1 核酸凝膠電泳3.1.1 瓊脂糖凝膠電泳3.1.2 聚丙烯酰胺凝膠電泳3.2 蛋白質凝膠電泳3.2.1 SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳3.2.2 雙相電泳4 放射性探針的制備4.1 均一標記DNA探針的合成4.2 RNA探針的合成4.3 CDNA探針的合成4.4 合成寡核苷酸的標記5 DNA5.1 用QIAquick凝膠提取試劑盒從瓊脂糖凝膠中回收和純化DNA片段5.2 哺乳動物細胞DNA的分離5.2.1 應用蛋白酶K和苯酚從哺乳動物細胞中分離高分子量的DNA5.2.2 鼠尾和其他小樣本基因組DNA的制備5.3 Southern雜交分析基因組DNA5.4 DNA的斑點與狹縫雜交5.5 微點陣技術5.6 DNA測序5.7 單鏈構象多態(tài)性分析5.8 變性的高效液相色譜5.9 DNA基因分型5.9.1 微衛(wèi)星基因分型5.9.2 PCR-RFLP SNP 基因分型5.9.3 焦磷酸測序SNP基因分型6. RNA6.1 用TRIzol試劑分離總RNA6.2 用Oligotexm RNA小提試劑盒從總RNA純化poly A+ mRNA6.3 Northern雜交6.4 eDNA末端快速擴增(RACE)7. 克隆基因在體外及原核細胞中的表達7.1 TNT快速轉錄翻譯系統(tǒng)7.2 GST融合蛋白的純化7.3 GST吸附實驗8. 克隆基因在哺乳動物細胞中的表達8.1 哺乳動物細胞的體外培養(yǎng)8.2 細胞周期分析8.3 DNA轉染8.3.1 磷酸鈣和DNA共沉淀的轉染8.3.2 陽離子脂質體轉染DNA8.3.3 DNA的電穿孔轉染8.4 應用Gene Editor TM的DNA體外定點誘變系統(tǒng)9. 病毒9.1 快速產生重組腺病毒的簡便系統(tǒng)9.2 反轉錄病毒的產生10. 蛋白質檢測與分析10.1 免疫沉淀法10.2 Western雜交10.3 酶聯免疫吸附實驗(ELISA)11. 真核基因表達調控11.1 凝膠改變法11.2 熒光素酶法11.3 DNA甲基化分析11.4 核組蛋白免疫沉淀法(ChIP)11.5 RNA干擾(RNAi)12. 組織學12.1 組織切片的制備和H&E染色12.2 免疫組織化學13. 蛋白質組學技術13.1 二維蛋白凝膠電泳——真核細胞樣品的制備13.1.1 從酵母制備2D蛋白提取物13.1.2 從哺乳動物細胞制備分部去垢劑提取物13.2 色譜(層析法)13.3 為質譜蛋白鑒定作凝膠內酶切13.4 質譜14. 細胞凋亡的檢測方法14.1 細胞群體凋亡的研究方法14.1.1 檢測DNA斷裂——凋亡DNA階梯14.1.2 凋亡誘導的蛋白酶-Caspase3活性檢測14.2 單個細胞凋亡的研究方法14.2.1 APO-BRDUTM試劑盒14.2.2 檢測細胞膜變化15. 轉基因和基因敲除小鼠的構建15.1 應用顯微注射法制備轉基因小鼠15.2 基因打靶小鼠的制備附錄1. 常用的試劑和溶液附錄2. 常用的生物學網站

章節(jié)摘錄

插圖：每一步的時間應從反應混合物達到所需要的溫度后開始計算。一般來說，由混合液原溫度達到所要求溫度的時間需要30～60秒。溫度滯后時間的長短取決于以下幾個因素，包括反應管的類型、反應混合物的體積、熱源（水浴或加熱塊）以及兩個連續(xù)步驟間的溫度差。因此調節(jié)溫育時間以補償這一滯后時間是非常重要的。兩寡核苷酸引物之間的距離越遠，合成靶序列全長所需的時間也越長。上面給出的反應時間是按1000個核苷酸的靶序列擬定的。（2）溫度：選擇寡核苷酸引物到DNA模板的退火溫度是一個折衷的方案。如果降低退火溫度則擴增效率提高，但引物與模板間的錯配現象又可明顯增加。若將溫度提高，則擴增反應的特異性增加，但總的反應效率則會下降。因此理想的辦法是設置一系列對照反應，以確定某一特定擴增反應的最適退火溫度。（3）循環(huán)次數：擴增反應的循環(huán)數取決于反應混合液中靶DNA的濃度，若將哺乳動物基因組中單拷貝基因擴增至能為瓊脂糖或聚丙烯酰胺凝膠電泳所見，至少需要25個循環(huán)。靶序列的指數式的擴增不是一個無限制的過程。在正常反應條件下，經過25～30個循環(huán)擴增后，Taq DNA聚合酶的酶量便成為制約反應進行的因素。如需進一步擴增，應將所得的DNA樣品稀釋1000～10000倍后，再作為模板進行新的PCR。（4）緩沖液：當標準緩沖液于72℃溫育時，反應體系的pH值將下降1個多單位，致使緩沖液的pH值接近7.2。二價陽離子的存在至關緊要，鎂離子優(yōu)于錳離子，而鈣離子則無效。鎂離子的最佳作用濃度相當低（1.5mmol／L.），因此重要的是，所制備的模板DNA中不應含有高濃度的螯合劑，如EDTA；也不應含有高濃度的帶負電荷離子基團，如磷酸根。

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《漢英醫(yī)學分子生物學實驗方法(第1版)》是由中國協(xié)和醫(yī)科大學出版社出版的。

圖書封面

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