蛋白質(zhì)分離與純化技術(shù)

內(nèi)容概要

本書是生物醫(yī)學(xué)實驗技術(shù)叢書的分冊之一。作者系統(tǒng)匯集了蛋白質(zhì)分離純化研究的成果，集傳統(tǒng)常規(guī)技術(shù)和現(xiàn)代生物技術(shù)于一體，全面深入地介紹了蛋白質(zhì)的基本特性、初級分離和高級分離的主要技術(shù)方法。包括：材料預(yù)處理、細(xì)胞破碎、離心分離、沉淀分離、膜過濾分離和色譜分離（如離子交換色譜、凝膠過濾色譜、分子重排色譜、高壓液相色譜）等。還介紹了蛋白電泳分析和特征特性分析的技術(shù)方法，以及特殊蛋白如融合蛋白、膜蛋白的分離純化實例。本書可供從事蛋白分離純化的研究人員、實驗人員及醫(yī)學(xué)生閱讀參考。

書籍目錄

第一章  緒論  1  蛋白質(zhì)定義與結(jié)構(gòu)  2  蛋白質(zhì)的一般理化性質(zhì)  3  蛋白質(zhì)分離純化的目的和意義  4  蛋白質(zhì)分離純化的基本原則和策略  5  蛋白質(zhì)分離純化的基本過程第二章  蛋白質(zhì)樣品的初級分離  1  制備蛋白質(zhì)的原材料的選擇和預(yù)處理  2  目標(biāo)蛋白質(zhì)的離心分離  3  沉淀分級  4  萃取  5  吸附  6  膜分離第三章  蛋白質(zhì)高效分離——層析法  1  離子交換層析  2  層析聚焦  3  分子排阻層析  4  羥基磷灰石層析  5  親和層析  6  高效液相色譜  7  免疫親和層析第四章  分離純化蛋白質(zhì)的電泳分析  1  電泳的基本原理  2  紙電泳  3  薄層電泳  4  薄膜電泳  5  SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳分析（SDS-PAGE）  6  固相pH梯度IEF-SDS蛋白質(zhì)組雙向凝膠電泳分析  7  蛋白質(zhì)印跡法（Western blotting）第五章  蛋白質(zhì)定量和定性分析  1  蛋白質(zhì)含量測定  2  Folin-酚試劑法（Lowry法）  3  考馬斯亮藍(lán)法（Bradford法）  4  紫外吸收法  5  蛋白質(zhì)分子量的測定  6  蛋白質(zhì)純度分析  7  糖蛋白中糖含量分析  8  蛋白質(zhì)N末端序列分析  9  蛋白質(zhì)C末端序列分析第六章  純化蛋白的濃縮、干燥和保存  1  濃縮  2  干燥  3  純化蛋白制成品的保存  4  蛋白質(zhì)和酶保存方法第七章  不同組織蛋白質(zhì)分離純化  1  動物組織  2  植物組織  3  細(xì)菌細(xì)胞  4  真菌細(xì)胞第八章  重組蛋白的分離與純化  1  大腸桿菌（E．coli）表達(dá)蛋白產(chǎn)物  2  酵母表達(dá)系統(tǒng)的蛋白與純化  3  哺乳動物培養(yǎng)細(xì)胞重組蛋白的表達(dá)與分離純化  4  GST融合蛋白的表達(dá)及分離純化  5  His-Tag融合蛋白的分離純化第九章  膜蛋白的分離  1  膜蛋白的特性  2  膜蛋白抽提  3  分離膜蛋白的基本原則  4  分離細(xì)胞膜蛋白的方法  5  分離組織膜蛋白的方法  6  分離細(xì)菌膜蛋白的方法第十章  特殊蛋白質(zhì)純化實例  1  乳清蛋白各成分分離  2  蔗糖酶的純化  3  辣根過氧化物酶的純化  4  煙草含銅鋅超氧化物歧化酶的純化  5  乙醇脫氫酶的純化  6  胞外脂酶的純化  7  核糖核酸酶的純化  8  β-葡萄糖苷酶的純化  9  α-半乳糖苷酶的純化  10  甲硫氨酸特異性氨肽酶的純化附件參考文獻(xiàn)

章節(jié)摘錄

　　第一章　緒論　　　　蛋白質(zhì)是生物體最重要的組成部分之一，它是由α-氨基酸通過酰胺鍵連接而成的長鏈分子，這一分子的長鏈也被稱為肽鏈。肽鏈經(jīng)折疊修飾后形成特定的結(jié)構(gòu)和構(gòu)型，從而形成具有活性功能的蛋白質(zhì)。大多數(shù)蛋白質(zhì)除氨基酸外，還有其他組分，如糖類、脂類、金屬類和有機子分子，這些含有其它組分的蛋白質(zhì)被稱為復(fù)合蛋白質(zhì)。蛋白質(zhì)肽鏈?zhǔn)怯?0種氨基酸單體隨機組成的，使蛋白質(zhì)肽鏈結(jié)構(gòu)程度高度復(fù)雜化，繼而肽鏈通過許多和α-碳原子與肽平面鏈間的單鏈的旋轉(zhuǎn)，并伴隨著分子內(nèi)大量原子和基團問的相互作用，折疊成為較為穩(wěn)定的立體結(jié)構(gòu)，且這種立體結(jié)構(gòu)是多層次的，一般分為一、二、三和四級結(jié)構(gòu)。蛋白質(zhì)的一級結(jié)構(gòu)一般是指構(gòu)成蛋白質(zhì)肽鏈的氨基酸殘基的排列次序，有時也稱為氨基酸殘基序列。蛋白質(zhì)的二、三和四級結(jié)構(gòu)統(tǒng)稱為蛋白質(zhì)的高級結(jié)構(gòu)。一條肽鏈或少數(shù)幾條肽鏈通過共價鍵構(gòu)成的蛋白質(zhì)立體結(jié)構(gòu)通常是它們的二級和三級結(jié)構(gòu)。蛋白質(zhì)的二級結(jié)構(gòu)是蛋白質(zhì)肽鏈骨架中局部肽鏈的穩(wěn)定構(gòu)象，即α-螺旋和β-折疊。在蛋白質(zhì)的二級結(jié)構(gòu)形成以后，肽鏈進(jìn)一步折疊，產(chǎn)生三級結(jié)構(gòu)。三級結(jié)構(gòu)蛋白質(zhì)的肽鏈大多形成近乎球狀結(jié)構(gòu)，從而使蛋白質(zhì)內(nèi)部變得更為緊密，內(nèi)部的空間約有75％被原子所充斥。蛋白質(zhì)的四級結(jié)構(gòu)可以被定義為一些特定的三級結(jié)構(gòu)肽鏈通過非共價鍵而形成大分子體系時的組合方式。……

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