生物文庫技術

內(nèi)容概要

本書的作者經(jīng)過多年努力，建立和改良了多種噬菌體展示和SELEX技術平臺，并利用上述技術平臺開展了針對感染、炎癥、腫瘤和生物毒素等方面的新型診斷或治療藥物以及基礎方面的研究，取得了良好的結果。此書是根據(jù)作者實際工作經(jīng)驗，結合具體篩選實例編寫而成，特別編入作者的經(jīng)驗借鑒與注意事項，為讀者提供了較詳盡的參考技術路線和具體操作方法，盡量使具有一定生物化學和分子生物學實驗基礎的科技人員能夠快速掌握噬菌體展示和SELEX技術。
本書由邵寧生、楊光等編著。

書籍目錄

上篇 噬菌體表面展示技術原理及其操作指南
　第1章 概述
　 一、噬菌體表面展示隨機肽庫
　 二、噬菌體抗體庫
　 三、噬菌體表面展示技術篩選原理和基本方法
　 四、噬菌體表面展示技術的應用
　第2章 噬菌體表面展示肽庫技術操作指南
　 一、試劑
　 二、實驗步驟
　 三、影響篩選的因素
　 四、結果判斷和分析
　第3章 噬菌體肽庫構建及篩選實例
　 實例1 基于昆蟲防御素A蛋白分子的噬菌體展示構象肽庫的構建
　 實例2 重組hTNF-α結合肽的篩選
　 實例3 馬抗SARS-CoV多抗抗原表位的篩選
　第4章 噬菌體抗體庫技術操作指南
　 一、試劑
　 二、實驗步驟
　 三、影響篩選的因素
　第5章 噬菌體抗體庫構建及篩選實例
　 一、引物
　 二、淋巴細胞總RNA的提取及VH和VL基因的擴增
　 三、初級噬菌體抗體庫的構建
　 四、通過Cre-loxP位點特異性重組構建大容量噬菌體抗體庫
　 五、噬菌體抗體庫的篩選
　 六、噬菌體抗體的鑒定及序列分析
下篇 SELEX技術原理及其操作指南
　第1章 概述
　 一、SELEX技術的基本技術路線
　 二、SELEX篩選的特點
　 三、SELEX的應用
　 四、適配子的改造
　第2章 SELEX技術操作指南
　 一、試劑與設備
　 二、文庫/文庫模板和引物的設計與合成
　 三、RNA文庫的獲得（PCR、體外轉(zhuǎn)錄與RNA回收）
　 四、文庫與靶分子孵育
　 五、結合寡核苷酸分子的分離
　 六、反轉(zhuǎn)錄
　 七、PCR
　 八、下一輪篩選用文庫的制備
　 九、重復篩選
　 十、篩選后獲得的特異aptamer的分析
　第3章 SELEX技術篩選實例
　 實例1 牛凝血酶特異的RNA aptamer的篩選
　 實例2 CE-SELEX篩選技術
　 實例3 親和層析SELEX篩選促紅細胞生成素適配體及基于分子信標檢測方法的建立
　 實例4 親和層析SELEX篩選相思子毒素適配體及其在分析檢測中的應用
　 實例5 以完整細胞為靶的消減SELEX篩選
　 實例6 腫瘤組織切片-SELEX技術篩選臨床標本分子探針
　 實例7 組合aptamer用于金黃色葡萄球菌檢測的研究

章節(jié)摘錄

版權頁：插圖：天然蛋白由多個抗原表位組成，而主要的抗原決定簇通常存在于蛋白抗原表面，它們能夠特異結合針對該蛋白抗原的大部分抗體，因此被稱為“免疫顯性基團”。這些免疫顯性基團常由極性或帶電荷的氨基酸殘基組成，并具有高親水性，而這樣的氨基酸序列也是蛋白質(zhì)與蛋白質(zhì)間相互作用位點的特征。典型的水溶性球蛋白的空間構象為疏水性殘基埋藏在蛋白質(zhì)內(nèi)部構成其核心，而表面由親水性殘基組成。由親水性殘基構成的各個局部區(qū)域中，表面電荷及極性最大的區(qū)域通常為蛋白質(zhì)表位所在區(qū)域。蛋白質(zhì)的二級結構與蛋白質(zhì)的表位分布也有較大關系。α螺旋、β折疊結構規(guī)則，通過氫鍵維持，結構相對穩(wěn)定不易形變，且經(jīng)常處于蛋白質(zhì)的內(nèi)部，因而很少有機會與其他分子作用。而B轉(zhuǎn)角及無規(guī)則卷曲多出現(xiàn)在球蛋白表面，因為是突出結構，利于與抗體嵌合，成為抗原表位的可能性較大?；谏鲜隼碛桑ǔ⒌鞍踪|(zhì)的二級結構預測作為確定抗原表位、蛋白質(zhì)相互作用位點的輔助手段。研究表明，蛋白分子通過其表面的親水環(huán)區(qū)與其他生物大分子相互作用。如免疫球蛋白與補體的結合位點在其Fc段中親水性最強的區(qū)域；煙草花葉病毒衣殼蛋白通過其親水性最強的區(qū)段與其DNA分子結合；蛋白酶催化底物的作用位點也常是親水性強的位點。隨著篩選靶標范圍的擴大，核酸分子甚至小分子化合物、金屬離子等結合肽均可獲得，這為研究復雜的生命活動過程中各種類型分子間相互作用提供了有力工具，擴展了研究的廣度和深度。通過篩選蛋白分子的抗原表位，不僅有助于確定抗原與抗體相互作用的位點（即抗原表位），而且有助于確定配體與受體、酶與底物、蛋白分子與其他分子相互作用的位點。

編輯推薦

《生物文庫技術:噬菌體展示與SELEX技術》為國家“十一五”重點圖書出版項目。

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