瀕危名貴藥用霍山石斛類原球莖液體培養(yǎng)生產活性多糖的研究

內容概要

　　《瀕危名貴藥用霍山石斛類原球莖液體培養(yǎng)生產活性多糖的研究》擬解決的關鍵難點在于霍山石斛類原球莖培養(yǎng)體系的建立、活性多糖合成的調節(jié)模式和活性多糖單組分的純化與結構鑒定。研究中的創(chuàng)新點是突破試管苗快繁的常規(guī)方法，提出用類原球莖目的液體培養(yǎng)可持續(xù)開發(fā)藥用石斛資源的新思路，克服了試管苗生根弱、移栽困難的限制。首次較系統(tǒng)地以霍山石斛為對象研究藥用石斛類原球莖液體培養(yǎng)體系的建立方法與理論，為產業(yè)化開發(fā)提供理論支持，為其他藥用石斛資源的可持續(xù)開發(fā)提供借鑒。研究的意義在于：①為霍山石斛類原球莖大規(guī)模培養(yǎng)直接生產藥用成分提供理論依據和原始資料，這將是瀕危珍稀霍山石斛藥用資源再生及可持續(xù)利用的一條新途徑；②為霍山石斛類原球莖直接替代野生霍山石斛使用的可能性提供可靠的實驗依據；③多糖結構表征的結果將為探討多糖構效關系和人工合成或改性多糖提供理論基礎。

書籍目錄

第1章 藥用石斛資源及其可持續(xù)利用現狀1.藥用石斛應用及其資源現狀2.藥用石斛資源再生現狀2.1 藥用石斛的野生變家種2.2 藥用石斛的組織培養(yǎng)3.藥用石斛化學成分及藥理作用4.課題構想第2章 霍山石斛類原球莖組織培養(yǎng)系的建立1.實驗材料1.1 主要試劑1.2 主要儀器2.實驗方法2.1 霍山石斛無菌苗的誘導2.2 霍山石斛類原球莖的誘導2.3 類原球莖增殖2.4 霍山石斛類原球莖長期繼代培養(yǎng)的品質穩(wěn)定性考察2.5 數據統(tǒng)計3.實驗結果3.1 霍山石斛類原球莖的誘導3.2 霍山石斛類原球莖的增殖3.3 霍山石斛類原球莖的品質穩(wěn)定性分析4.討論第3章 霍山石斛多糖增強機體免疫功能的研究1.實驗材料1.1 霍山石斛1.2 實驗動物1.3 主要試劑1.4 主要儀器2.實驗方法2.1 HPS的提取及含量測定2.2 HPS的DEAE-Cellulose分級分離2.3 RPMI-1640培養(yǎng)液配制方法2.4 HBSS液的配制2.5 脾細胞懸液的制備2.6 腹腔巨噬細胞懸液的制備2.7 HPS聯(lián)合ConA誘導小鼠脾細胞產生IFN-γ2.8 HPS聯(lián)合LPS誘導小鼠腹腔巨噬細胞產生TNF-α2.9 總RNA的提取2.10 RT-PCR2.11 統(tǒng)計分析3.實驗結果3.1 霍山石斛HPS的提取和蛋白脫除3.2 野生霍山石斛HPs對小鼠脾細胞產生IFN-γ的影響3.3 野生霍山石斛HPs對小鼠脾細胞IFN-γmRNA表達的影響3.4 野生霍山石斛HPS對小鼠腹腔巨噬細胞產生TNF-α的影響3.5 野生霍山石斛HPS對小鼠腹腔巨噬細胞TNF-αmRNA表達的影響3.6 野生霍山石斛HPS不同組分的活性3.7 野生霍山石斛多糖與類原球莖多糖組分及生物學活性比較4.討論第4章 霍山石斛類原球莖液體培養(yǎng)碳氮代謝分析1.實驗材料1.1 霍山石斛類原球莖1.2 主要試劑1.3 主要儀器2.實驗方法2.1 類原球莖懸浮培養(yǎng)與生長的測定2.2 多糖提取和含量測定2.3 可溶性糖含量的測定2.4 蔗糖磷酸合成酶（SPS，EC2.4.1.14）、蔗糖合成酶（SuSy，EC2.4.1.13）和蔗糖酶（IT，EC3.2.1.26）活性的測定2.5 可溶性離子NH、NO的含量測定2.6 硝酸還原酶（NR，EC1.6.6.1）、谷氨酸合酶（GOGAT，EC1.4.1.14）和谷氨酰胺合成酶（GS，EC6.3 .1 .2）活性的測定2.7 實驗參數3.實驗結果3.1 霍山石斛類原球莖的生長動態(tài)進程3.2 pH的動態(tài)變化3.3 胞內、胞外糖消耗的動態(tài)進程3.4 碳源代謝關鍵酶活性的動態(tài)變化3.5 胞內、胞外NH，和NOi消耗的動態(tài)進程3.6 氮源代謝相關酶活性的動態(tài)變化4.討論第5章 霍山石斛類原球莖生長和多糖合成調控1.實驗材料1.1 霍山石斛類原球莖1.2 主要試劑1.3 主要儀器2.實驗方法2.1 類原球莖懸浮培養(yǎng)與生長的測定2.2 生長培養(yǎng)基優(yōu)化方案設計2.3 多糖合成調節(jié)方案設計2.4 多糖提取與含量測定2.5 可溶性糖含量的測定2.6 霍山石斛多糖的DEAE-celltdose分級分離與含量測定2.7 霍山石斛類原球莖多糖的生物學活性評價2.8 實驗參數3.實驗結果3.1 類原球莖生長培養(yǎng)基的優(yōu)化3.2 HPS合成的調控3.3 優(yōu)化和調控條件下的HPS組分及生物活性評價4.討論第6章 霍山石斛活性多糖的分離純化及結構表征1.實驗材料1.1 霍山石斛類原球莖1.2 主要試劑1.3 主要儀器2.實驗方法2.1 HPS的提取和DEAE-Cellulose分級分離2.2 HPS-1的凝膠滲透色譜純化2.3 多糖組分活性測定2.4 多糖的純度及摩爾分子量測定2.5 HPS-1823的比旋光度的測定2.6 HPS-1823的掃描電鏡觀察2.7 剛果紅實驗2.8 紫外光譜分析2.9 HPS-1823單糖組成成分分析2.10 紅外光譜分析2.11 高碘酸氧化反應2.12 Smith降解反應2.13 多糖甲基化分析2.14 多糖的部分酸水解分析2.15 多糖的核磁共振波譜分析3.實驗結果3.1 霍山石斛多糖的凝膠柱色譜分離純化3.2 類原球莖多糖HPS-1823純度和分子量鑒定3.3 類原球莖多糖HPS-1823比旋光度的測定3.4 類原球莖多糖HPs-1B23的表觀形態(tài)學觀察3.5 剛果紅實驗分析3.6 類原球莖多糖HPS-1B23紫外光譜分析3.7 類原球莖多糖HPS-1B23單糖組成成分分析3.8 類原球莖多糖HPS-1823紅外光譜分析3.9 類原球莖多糖HPS-1823相鄰單糖連接方式的分析4.討論第7章 結論

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