生物化學(xué)實驗指導(dǎo)書

內(nèi)容概要

全書共四部分內(nèi)容，包括生物化學(xué)實驗基本知識、實驗原理與技術(shù)、基礎(chǔ)實驗、綜合性實驗。主要對實驗室規(guī)則、安全與防護(hù)知識、實驗記錄和實驗報告、基本實驗操作及生物大分子制備技術(shù)等方面進(jìn)行了簡單的介紹；同時對生物化學(xué)實驗技術(shù)與原理進(jìn)行了較為詳實的介紹，以期使讀者能夠熟悉和掌握這些內(nèi)容，為更好地學(xué)習(xí)生物化學(xué)并打下一個較好的基礎(chǔ)；在基礎(chǔ)實驗安排中，很好地考慮了實驗內(nèi)容與生物化學(xué)理論授課的銜接，選取了生物化學(xué)實驗中較為成熟的糖類、脂類、蛋白質(zhì)、酶類、核酸類和代謝類實驗；綜合性實驗部分重點安排了古DNA研究的提取、PCR擴(kuò)增、分子克隆等相關(guān)實驗。
本書可作為高等院校生命科學(xué)、醫(yī)藥衛(wèi)生、環(huán)境科學(xué)等相關(guān)專業(yè)的實驗教材，也可作為相關(guān)專業(yè)科研人員和教育工作者的參考書。

書籍目錄

第一部分　生物化學(xué)實驗基本知識
　第一章 生物化學(xué)實驗的安全與要求
　　第一節(jié)　生物化學(xué)實驗室規(guī)則
　　第二節(jié)　生物化學(xué)實驗室安全與防護(hù)常識
　 一、實驗室安全要求
　 二、實驗室可能出現(xiàn)的危險情況
　第二章　實驗記錄與實驗報告
　　第一節(jié)　實驗記錄
　　第二節(jié)　實驗報告
　 　 一、實驗報告的格式
　 　 二、實驗報告的內(nèi)容
　 　 三、實驗結(jié)果的討論
　第三章 生物化學(xué)實驗基本實驗操作
　　第一節(jié)　玻璃儀器的洗滌與干燥
　 一、玻璃儀器的清洗
　 二、一些常用的洗滌劑
　 三、玻璃儀器的干燥
　 四、溶液的混勻
　 五、過濾
　　第二節(jié)　計量儀器的選擇與使用
　 　一、液體的量取
　 　二、液體的盛放和儲存
　　第三節(jié)　滅菌及消毒方法
　 　 一、物理方法滅菌
　 　 二、化學(xué)方法滅菌
　 　 三、過濾除茵
　　……
第二部分　生物化學(xué)實驗原理與技術(shù)
第三部分　生物化學(xué)基礎(chǔ)實驗
第四部分　綜合性實驗
參考文獻(xiàn)

章節(jié)摘錄

版權(quán)頁：   插圖：   1.水溶液提取 蛋白質(zhì)和酶的提取一般以水溶液為主。稀鹽溶液和緩沖液對蛋白質(zhì)的穩(wěn)定性好，溶解度大，是提取蛋白質(zhì)和酶最常用的溶劑。用水溶液提取生物大分子應(yīng)注意以下幾個因素： （1）鹽濃度（即離子強度）。離子強度對生物大分子的溶解度有極大的影響，絕大多數(shù)蛋白質(zhì)和酶在低離子強度的溶液中都有較大的溶解度，如在純水中加入少量中性鹽，蛋白質(zhì)的溶解度比在純水時大大增加，稱為“鹽溶”現(xiàn)象。但中性鹽的濃度增加至一定時，蛋白質(zhì)的溶解度又逐漸下降，直至沉淀析出，稱為“鹽析”現(xiàn)象。 （2）pH值。蛋白質(zhì)、酶與核酸的溶解度和穩(wěn)定性與pH值有關(guān)，一般將pH值控制在6～8的范圍內(nèi)。 （3）溫度。為防止變性和降解，在提取和制備具有活性的蛋白質(zhì)和酶時一般在0～5。C的低溫下操作。 （4）防止蛋白酶或核酸酶的降解作用。采用加入抑制劑或調(diào)節(jié)提取液的pH值、離子強度或極性等方法使這些水解酶失去活性，防止它們對提取的蛋白質(zhì)、酶及核酸的降解作用。 （5）攪拌與氧化。一般采用溫和攪拌，在提取液中加入少量巰基乙醇等試劑來防止巰基氧化。 2.有機(jī)溶劑提取 一些與脂類結(jié)合比較牢固或分子中非極性側(cè)鏈較多的蛋白質(zhì)和酶難溶于水、稀鹽、稀酸或稀堿中，常用不同比例的有機(jī)溶劑提取。常用的有機(jī)溶劑有乙醇、丙酮、異丙醇和正丁醇等。有些蛋白質(zhì)和酶既溶于稀酸、稀堿，又能溶于含有一定比例的有機(jī)溶劑的水溶液中，在這種情況下，采用稀的有機(jī)溶液提取可以防止水解酶的破壞，并兼有除去雜質(zhì)、提高純化效果的作用。 二、生物大分子分離純化的方法 常用的分離純化生物大分子的方法和技術(shù)有：沉淀法、離心、吸附層析、凝膠過濾層析、離子交換層析、親和層析、快速制備型液相色譜以及等電聚焦制備電泳等。 1.沉淀法 沉淀是溶液中的溶質(zhì)由液相變成固相析出的過程。通過沉淀，將待分離的生物大分子轉(zhuǎn)入固相沉淀或留在液相，而與雜質(zhì)得到初步的分離。在生物大分子制備中最常用的沉淀方法如下： （1）中性鹽沉淀（鹽析法）。在溶液中加人中性鹽使生物大分子沉淀析出的過程稱為“鹽析”，多用于各種蛋白質(zhì)和酶的分離純化。 （2）有機(jī)溶劑沉淀。此種方法通過向提取溶液中加入有機(jī)溶劑降低水溶液的介電常數(shù)，削弱了溶劑分子與蛋白質(zhì)分子間的相互作用力，增加了蛋白質(zhì)分子間的相互作用，導(dǎo)致蛋白質(zhì)溶解度降低而沉淀。多用于蛋白質(zhì)、酶、多糖及核酸等生物分子的分離純化。

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