生物化學實驗教程

內(nèi)容概要

本書以糖類、蛋白質(zhì)、脂類及核酸的分離和鑒定、代謝及其調(diào)控等基本技術為重點，介紹了生物大分子的提取和純化、結(jié)構(gòu)和性質(zhì)、酶動力學分析、層析法、電泳法等基本實驗技術。本書內(nèi)容全面，包括基礎實驗、綜合性實驗，還精選了一些中學生物化學實驗，供不同院校、不同專業(yè)根據(jù)具體條件選用．
本書可作為高等院校生物類各專業(yè)本科生和研究生的生物化學實驗教材，也可供相關教學和科研工作者參考

書籍目錄

第一部分 生物化學基礎實驗
　實驗一 糖類的性質(zhì)實驗(一)一一糖類的顏色反應
　實驗二 糖類的性質(zhì)實驗(二)一一糖類的還原作用
　實驗三 總糖的測定一一蒽酮比色法
　實驗四 氨基酸的分離鑒定一一紙層析法
　實驗五 蛋白質(zhì)的性質(zhì)實驗(一)一一蛋白質(zhì)及氨基酸的呈色壓
　實驗六 蛋白質(zhì)的性質(zhì)實驗(二)一一蛋白質(zhì)的等電點測定和抄
　實驗七 微量凱氏定氮法
　實驗八 血清蛋白的醋酸纖維薄膜電泳
　實驗九 牛乳中酪蛋白的提取與鑒定
　實驗十 酶的特性
　實驗十一 核酸的定量測定
　 (一)定磷法
　 (二)地衣酚法定量測定RNA
　 (三)二苯胺法測定DNA含量
　實驗十二 血糖的定量測定
　 (一)Hagedorn一了enscn二氏定糖法
　 (二)F01in—Wu法測定血糖含量
　實驗十三 脂肪酸的e一氧化
　實驗十四 血液中轉(zhuǎn)氨酶活力的測定(分光光度法)
　實驗十五 紫外分光光度法測定魚肝油中維生素A的含量
　實驗十六 食物中脂溶性維生素含量分析(高效液相色譜法)
　實驗十七 熒光光度法測定維生素B。的含量
　實驗十八 2，6---氯酚靛酚法測定維生素C的含量
　實驗十九 過氧化氫酶的作用
　實驗二十 過氧化物酶的作用
　實驗二十一 尿液淀粉酶活力測定(Winslow氏法)
　實驗二十二 枯草芽孢桿菌蛋白酶活力測定
　實驗二十三 小麥萌發(fā)前后淀粉酶活力的比較
　實驗二十四 柑橘皮提取果膠
　實驗二十五 索氏提取法測定粗脂肪含量．．
第二部分 生物化學技術實驗
　實驗二十六 離子交換柱層析法分離氨基酸
　實驗二十七 蛋白質(zhì)含量的測定一
　實驗二十八 凝膠過濾法測定蛋白質(zhì)相對分子質(zhì)量
　實驗二十九 薄層層析法分離AMP、ADP和ATP
　實驗三十 動物肝臟DNA的制備和含量測定
　實驗三十一 DNA的瓊脂糖凝膠電泳
　實驗三十二 SDS-聚丙烯酰胺電泳法測定蛋白質(zhì)相對分子質(zhì)量
　實驗三十三 DNS-C1法分析蛋白質(zhì)末端氨基酸
　實驗三十四 DNP-氨基酸的制備和鑒定
　實驗三十五 酵母蔗糖酶的提取及純化
　實驗三十六 蔗糖酶動力學研究
　實驗三十七 脲酶動力學研究
　實驗三十八 乳酸脫氫酶(LDH)同工酶的聚丙烯酰胺凝膠電泳(PAGE)
　實驗三十九 藥用植物超氧化物歧化酶(SOD)同工酶分析及活性比較
　實驗四十 枯草桿菌細胞固定化
　實驗四十一 超氧化物歧化酶的固定及其酶活性的測定
　實驗四十二 細胞色素c的制備及測定
　實驗四十三 大鼠肝細胞的單細胞凝膠電泳
第三部分 綜合性實驗
　實驗四十四 重組pnpC的原核表達與親和色譜純化
　實驗四十五 免疫血清的制備與檢測
　實驗四十六 HmgD基因過量表達對果蠅發(fā)育的影響
　實驗四十七 天然產(chǎn)物中多糖的分離、純化與鑒定
　實驗四十八 植物總黃酮類化合物的提取與測定
　實驗四十九 卵磷脂的提取和鑒定。
　實驗五十 食品(奶粉)中三聚氰胺含量的測定一一液相色譜法．
　實驗五十一 雙向聚丙烯酰胺凝膠電泳
第四部分 中學生物化學實驗精選
　實驗五十二 制作泡菜并檢驗亞硝酸鹽含量
　……
附錄
主要參考文獻

章節(jié)摘錄

版權頁：   插圖：   思考題 1.核酸定量測定的方法有哪些？ 2.本實驗成敗的關鍵是什么？ 小知識：分離純化核酸的一般原則 核酸的分離提取和純化是核酸研究中十分關鍵的步驟。核酸的分離提取并沒有統(tǒng)一的辦法，而是根據(jù)核酸的來源不同和種類不同來決定選用什么方法，但總的要求是去除蛋白質(zhì)等各種雜質(zhì)，保持核酸不發(fā)生變性或降解，最終能得到完整且具天然生物活性的核酸制品。 細胞內(nèi)的DNA和RNA都是以核蛋白的形式存在，且兩者在提取過程中?；煸谝黄穑瑫r細胞內(nèi)還有其他許多雜質(zhì)，如蛋白質(zhì)、多糖和脂質(zhì)，加之核酸在細胞內(nèi)含量較少，所以提純核酸樣品難度較大。 核酸分子尤其是DNA很不穩(wěn)定，易受高溫、強酸、強堿和其他化學因素以及機械力的作用，從而使DNA變性或降解而得不到完整分子。而且在生物細胞內(nèi)同時還含有分解DNA和RNA的各種核酸酶，如不及時去除或抑制這些核酸酶的活性，則在分離提取過程中核酸就會被這些酶降解，最終甚至得不到核酸制品，為此在分子提取的操作過程中應注意以下幾點：①防止化學因素的降解，避免強酸和強堿等變性因素；②防止物理因素的降解，避免高溫、機械力的作用，在低溫和PH5～9的條件下操作，同時操作時動作要輕緩，攪拌要溫和，避免用細口滴管吸放DNA等；③防止核酸酶的作用，特別是在制備RNA時要防止RNA酶的降解作用。因為RNA酶作用時不需要二價金屬離子，一般用鰲合劑很難抑制，且此酶到處都存在，極易造成污染。為防止RNA酶的作用，所用器材和試劑必須經(jīng)高溫高壓消毒，同時盡早去盡蛋白，加入RNA酶的抑制劑，如SDS、皂土等。對DNA酶來說，因其實現(xiàn)活性需二價金屬離子，只要加入EDTA或檸檬酸鈉等就可抑制其活性。 核酸分離提取和純化的主要步驟及方法如下： 分離提取核酸的主要過程，一般包括破碎細胞組織，然后解聚核蛋白并使蛋白質(zhì)變性，除去蛋白和多糖等雜質(zhì)，抽提和沉淀核酸等步驟。實際應用時要根據(jù)所需純化的核酸性質(zhì)來確定純化的方法。 破碎細胞的方法有物理法，如超聲波、勻漿和組織搗碎等；化學和生化的方法，如去污劑、蛋白質(zhì)變性荊和溶菌酶等。對于動植物材料，往往先經(jīng)液氮速凍，然后在低溫下勻漿或搗碎，這樣既避免了核酸酶的作用又可使堅硬的植物組織破碎。對于細菌來說，通常先用溶茵酶去壁，再用去污劑溶解膜蛋白和脂肪達到碎膜的目的。

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