醫(yī)學(xué)生物化學(xué)與分子生物學(xué)實驗

內(nèi)容概要

本書以醫(yī)藥、綜合性大學(xué)、師范和農(nóng)林院校有關(guān)專業(yè)的本科生、長學(xué)制學(xué)生及研究生為對象，也可供其他生物化學(xué)與分子生物學(xué)實驗技術(shù)工作者參考。它是一本高等學(xué)校生物化學(xué)與分子生物學(xué)實驗教材，也是一本小型生物化學(xué)與分子生物學(xué)實驗技術(shù)工具書。全書內(nèi)容分為生物化學(xué)技術(shù)基本理論（第一至六章）、分子生物學(xué)技術(shù)基本理論（第七至九章）、生物化學(xué)實驗和臨床生化檢驗（14個實驗）以及分子生物學(xué)實驗（10個實驗）。實驗部分共選編了24個實驗：7個常用的生化實驗和臨床生化檢驗，以及7個生物化學(xué)綜合性實驗，主要是培養(yǎng)學(xué)生對生物大分子進(jìn)行分離分析的綜合實驗技能，同時也包含了實驗動物學(xué)、藥理學(xué)、生理學(xué)等相關(guān)基本知識和基本技能的綜合；10個分子生物學(xué)實驗以DNA重組的基本過程為主線，介紹重組DNA技術(shù)的各個環(huán)節(jié)。

書籍目錄

第一章  分光光度技術(shù)  第一節(jié)  基本原理    一、光的基本知識    二、朗伯-比爾定律    三、吸光系數(shù)  第二節(jié)  分光光度計的基本結(jié)構(gòu)和使用    一、分光光度計的基本結(jié)構(gòu)    二、分光光度計的基本類型    三、常見分光光度計的使用    四、使用分光光度計的注意事項  第三節(jié)  分光光度技術(shù)的應(yīng)用    一、定量分析    二、定性分析  第四節(jié)  分光光度法的誤差    一、物理性原因產(chǎn)生的誤差    二、化學(xué)性原因引起的誤差第二章  色譜技術(shù)  第一節(jié)  概述    一、色譜法的概念    二、色譜技術(shù)的特點(diǎn)和優(yōu)點(diǎn)    三、色譜法的分類  第二節(jié)  常用的色譜方法    一、吸附色譜    二、分配色譜    三、凝膠色譜    四、離子交換色譜    五、親和色譜    六、高效液相色譜第三章  電泳技術(shù)  第一節(jié)  基本原理    一、蛋白質(zhì)電荷的來源    二、遷移率    三、影響電泳速度的因素  第二節(jié)  醋酸纖維薄膜電泳  第三節(jié)  瓊脂糖凝膠電泳    一、核酸分子大小與瓊脂糖濃度的關(guān)系    二、核酸構(gòu)象與瓊脂糖凝膠電泳分離的關(guān)系    三、瓊脂糖凝膠電泳基本方法簡介  第四節(jié)  聚丙烯酰胺凝膠電泳    一、聚丙烯酰胺凝膠聚合原理及相關(guān)特性    二、聚丙烯酰胺凝膠電泳原理    三、SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳原理    四、聚丙烯酰胺凝膠等電聚焦電泳原理    五、聚丙烯酰胺凝膠雙向電泳原理  第五節(jié)  染色方法    一、蛋白質(zhì)染色    二、脂蛋白染色    三、核酸的染色第四章  離心技術(shù)  第一節(jié)  離心技術(shù)的基本原理    一、離心力    二、相對離心力    三、重力及浮力    四、介質(zhì)的摩擦阻力    五、沉降速度    六、沉降系數(shù)    七、沉降時間  第二節(jié)  離心機(jī)的分類  第三節(jié)  離心分離的種類?    一、差速離心法    二、密度梯度離心法  第四節(jié)  離心操作注意事項第五章  蛋白質(zhì)組技術(shù)  第一節(jié)  蛋白質(zhì)組學(xué)  第二節(jié)  蛋白質(zhì)組分離技術(shù)    一、雙向凝膠電泳的特點(diǎn)    二、雙向凝膠電泳的基本步驟  第三節(jié)  蛋白質(zhì)組分析技術(shù)    一、質(zhì)譜技術(shù)的發(fā)展及各種類型的質(zhì)譜儀    二、質(zhì)譜技術(shù)在蛋白質(zhì)組研究中的作用    三、蛋白質(zhì)組數(shù)據(jù)庫的建立    四、蛋白質(zhì)組研究的前景第六章  生物大分子制備技術(shù)”  第一節(jié)  預(yù)處理和細(xì)胞的分離    一、選擇材料及預(yù)處理    二、細(xì)胞的分離  第二節(jié)  細(xì)胞的破碎及細(xì)胞器的分離    一、細(xì)胞的破碎    二、細(xì)胞器的分離  第三節(jié)  生物大分子的提取、分離純化和定量    一、蛋白質(zhì)的提取    二、蛋白質(zhì)的分離純化    三、核酸的分離純化    四、蛋白質(zhì)的定量    五、DNA、RNA的定量  第四節(jié)  濃縮、干燥及保存    一、蛋白質(zhì)的濃縮    二、核酸的濃縮    三、干燥    四、保存第七章  重組DNA技術(shù)  第一節(jié)  目的基因的獲取    一、直接從染色體中分離    二、化學(xué)合成法    三、RT-PCR    四、聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）  第二節(jié)  載體的選擇    一、克隆載體    二、表達(dá)載體  第三節(jié)  分子克隆常用的工具酶  第四節(jié)  限制性內(nèi)切酶消化DNA及片段回收    一、限制性內(nèi)切酶的選擇和運(yùn)用    二、限制性內(nèi)切酶的酶切    三、DNA片段的回收  第五節(jié)  目的基因與載體片段連接  第六節(jié)  重組DNA導(dǎo)入宿主細(xì)胞    一、大腸桿菌的轉(zhuǎn)化    二、電脈沖穿孔法轉(zhuǎn)化大腸桿菌  第七節(jié)  含重組質(zhì)粒的宿主菌落的篩選與鑒定    一、利用宿主細(xì)胞遺傳表型的改變進(jìn)行篩選    二、分析重組子分子結(jié)構(gòu)特性進(jìn)行鑒定第八章  核酸分子雜交技術(shù)  第一節(jié)  核酸分子雜交的基本理論    一、DNA變性    二、DNA復(fù)性¨    三、核酸分子雜交  第二節(jié)  核酸探針及其標(biāo)記    一、核酸探針    二、探針標(biāo)記物    三、探針的標(biāo)記方法  第三節(jié)  核酸分子雜交    一、影響雜交的因素    二、固相雜交法第九章  聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）技術(shù)  第一節(jié)  PCR基本原理和影響因素    一、基本原理    二、PCR反應(yīng)體系    三、PCR反應(yīng)步驟簡介    四、PCR引物設(shè)計原則    五、PCR的影響因素    六、PCR擴(kuò)增過程中的一些疑難問題與解決方法  第二節(jié)  逆轉(zhuǎn)錄PCR技術(shù)    一、RT-PCR反應(yīng)基本步驟    二、RT-PCR注意事項  第三節(jié)  PCR技術(shù)進(jìn)展    一、定量PCR    二、巢式PCR第十章  常用生化實驗及臨床生化檢驗  實驗一  血糖的測定  實驗二  蛋白質(zhì)的定量測定  實驗三  血紅蛋白與核黃素的凝膠柱色譜分離  實驗四  氨基酸的離子交換柱色譜分離  實驗五  血清蛋白醋酸纖維薄膜電泳  實驗六  血清蛋白聚丙烯酰胺凝膠盤狀電泳  實驗七  過氧化氫酶Km值的測定  實驗八  酶的競爭性抑制作用（琥珀酸脫氫酶）  實驗九  四氯化碳對小鼠肝臟的損傷  實驗十  血清總膽固醇的測定  實驗十一  回收實驗（尿素氮的回收）  實驗十二  血清白蛋白、γ-球蛋白的分離純化及鑒定  實驗十三  堿性磷酸酶的分離純化  實驗十四  雙向電泳第十一章  分子生物學(xué)實驗——重組DNA表達(dá)載體的構(gòu)建  實驗一  質(zhì)粒DNA的大量制備與純化  實驗二  DNA的純度、濃度的測定  實驗三  目的基因的獲取  實驗四  DNA的限制性內(nèi)切酶消化  實驗五  從瓊脂糖凝膠中分離回收DNA片段  實驗六  DNA片段的連接反應(yīng)  實驗七  用重組質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)化大腸桿菌  實驗八  含重組質(zhì)粒的細(xì)菌菌落的鑒定  實驗九  Southern印跡法  實驗十  斑點(diǎn)雜交——地高辛標(biāo)記核酸探針的斑點(diǎn)雜交（Dot blot）實驗須知實驗報告的書寫參考文獻(xiàn)

章節(jié)摘錄

　　第一章　分光光度技術(shù)　　第四節(jié)　分光光度法的誤差　　在分光光度法的實際應(yīng)用中，測定結(jié)果往往會出現(xiàn)一些誤差。引起這種偏離的原因很多，大致可分為兩類：一類是物理性原因；一類是化學(xué)性原因?！　∫?、物理性原因產(chǎn)生的誤差　　物理性原因引起的誤差，主要指由分光光度計儀器本身引起的誤差，包括入射光波長不準(zhǔn)確、入射光的單色性不好、微量的雜散光以及因光源的波動、檢測器靈敏度波動等引起的偏離等。即使是經(jīng)過仔細(xì)調(diào)校的分光光度計，仍要注意以下原因引起的誤差?！　。?）入射光的純度：比爾定律成立的一個重要前提是要采用單色光。但分光光度計實際使用的入射光并不是嚴(yán)格的單色光，而是由單色器從連續(xù)光譜中選擇出的一窄段范圍的復(fù)合光，仍有不同波長的幅射光同時存在。帶寬越窄，單色光愈純，對比爾定律的偏差就愈小。　?。?）雜散光的干擾：散射光也是引起誤差的重要因素。這里所說的散射光是指一切未經(jīng)過測定溶液吸收，而又落到檢測器上引起干擾的光，如室內(nèi)自然光，經(jīng)過某些漏洞進(jìn)入儀器而明顯增大了透光度，故高靈敏度的分光光度計宜安裝的光線較暗的室內(nèi)。散射光也包括能透過比色杯的非測定需要的其他波長的光，因效果與散射光一樣，故也稱為散射光干擾。散射光干擾對高濃度測定特別有害，能使吸光度降低，標(biāo)準(zhǔn)曲線的高濃度部分向下彎曲?！　。?）適當(dāng)?shù)奈舛葴y定范圍：即使將各種因素都控制好，對于濃度過大或過小的樣品，誤差仍然很大。因為濃度過大的樣品，其吸光度過高，影響檢測器的靈敏度，且讀數(shù)標(biāo)尺刻度的精度差，誤差亦大，故難于準(zhǔn)確。濃度過低的樣品，其吸光度小，則因與儀器本身因素有關(guān)，也容易引起檢測器標(biāo)尺上的讀數(shù)誤差。從理論上推算，相對誤差的最小的部分在透光度為36.8％處（或吸光度為0.4343處），故通常認(rèn)為測定值在吸光度0.20～0.70范圍內(nèi)（透光度為20％～65％）誤差較小，超出此范圍，相對誤差均會增大。

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