腎臟病學實驗技術操作規(guī)程

內(nèi)容概要

本書全面、系統(tǒng)地介紹了腎臟病學研究領域中涉及的實驗技術，旨在為腎臟病專業(yè)的同仁提供一個簡明、全面、高效的實驗技術流程。全書分8章，第1章重點介紹了腎臟各種固有細胞的分離及培養(yǎng)方法，包括常用的商品化細胞系。介紹了常用的基因轉(zhuǎn)染方法以及激光共聚焦檢測和流式細胞儀的最新應用。第2章主要介紹了常用的分子生物學技術，專門分析了常見的實驗失敗原因并提出對策。第3章主要介紹了常用的腎臟常規(guī)病理、免疫病理、分子病理及電鏡技術。第4章簡要介紹了轉(zhuǎn)基因及基因敲除動物模型的制備。第5章介紹了常用的腎臟疾病動物模型以及高難度大鼠腎臟發(fā)育、腎移植模型等的建立。第6章簡單介紹了電生理技術。第7章為尿液留取方法。第8章詳盡闡述了生物資源庫的標本留取、保存等過程，為開展流行病學調(diào)查和大規(guī)模臨床試驗提供研究平臺。附錄對實驗室的常規(guī)制度進行了簡述。所有的技術都設置了規(guī)范化的操作流程、注意事項，并相應地列舉了本重點實驗室應用這些技術進行的研究示例。對于實驗中常見的疑點、難點、熱點問題進行了剖析?！赌I臟病學實驗技術操作規(guī)程》?容豐富、實用性強，適合于腎臟病學及其他醫(yī)學領域中從事科研的醫(yī)生、學生或技師參閱。本書由陳香美擔任主編。

書籍目錄

第1章細胞學實驗技術
第一節(jié)細胞培養(yǎng)
一、細胞復蘇與凍存
二、原代近曲腎小管上皮細胞的分離培養(yǎng)
三、原代腎小球內(nèi)皮細胞的分離培養(yǎng)
四、原代腎小球系膜細胞的分離培養(yǎng)
五、原代腎問質(zhì)成纖維細胞的分離培養(yǎng)
六、足細胞培養(yǎng)
七、細胞共培養(yǎng)
八、成體干細胞培養(yǎng)技術(大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞)
九、細胞脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染
十、腎臟細胞電轉(zhuǎn)方法
十一、細胞原位雜交
第二節(jié)流式細胞儀技術
一、普通細胞分選
二、細胞無菌分選
三、流式細胞儀檢測細?大小
四、流式細胞儀檢測細胞周期
五、流式細胞儀檢測細胞凋亡
第三節(jié)共聚焦技術Ⅰ——細胞內(nèi)蛋白質(zhì)定位、細胞器及自噬體等亞細胞結(jié)構檢測
一、共聚焦顯微鏡常規(guī)檢測方法
二、細胞免疫熒光染色方法
三、細胞免疫熒光多重染色
四、細胞內(nèi)脂肪顆粒染色及檢測
五、細胞骨架蛋白染色及檢?
六、細胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)染色及檢測
七、細胞內(nèi)線粒體染色及檢測
八、細胞內(nèi)溶酶體染色及檢測
九、細胞內(nèi)自噬體染色及檢測
第四節(jié)共聚焦技術Ⅱ——活體細胞內(nèi)離子及功能的實時動態(tài)監(jiān)測
一、活體細胞內(nèi)離子動態(tài)檢測常規(guī)方法
二、細胞胞漿及線粒體Ca2+的染色及檢測
三、細胞內(nèi)Na+染色及檢測
四、細胞內(nèi)pH染色及檢測
五、細胞線粒體膜電位的染色及檢測
六、細胞內(nèi)活性氧(ROS)染色及檢測
七、細胞內(nèi)鈣離子震蕩及鈣火花檢測
八、熒光光漂白恢復(FRAP)技術檢測細胞間通訊
九、熒光漂白丟失(FLIP)檢測細胞膜蛋白的流動性及蛋白質(zhì)核轉(zhuǎn)位
十、熒光共振能量轉(zhuǎn)移(FRET)檢測蛋白質(zhì)相互關系
十一、細胞X-Z縱切掃描檢測極性細胞蛋白定位
十二、細胞及組織切片三維重建
第五節(jié)共聚焦技術Ⅲ——熒光染料/探針標記樣本存在的問題及分析對策
一、熒光標記樣品需要注意的問題
二、熒光標記實驗經(jīng)常出現(xiàn)的問題及對策
三、典型舉例
第六節(jié)細胞實驗其他技術
一、MTT測定細胞活力
二、細胞增殖測定(BrdU技術)
三、腎臟細胞微分離技術
四、亞細胞組分分離技術
第2章分子生物學實驗技術
第一節(jié)核酸的提取與純化
一、DNA的提取與純化
……
第3章病理學技術
第4章轉(zhuǎn)基因技術
第5章腎臟疾病動物模型
第6章電生理技術
第7章留取尿液方法
第8章腎臟病生物樣本資源庫的建設規(guī)范
附錄A各實驗室崗前培訓內(nèi)容
附錄B各實驗室工作制度

章節(jié)摘錄

版權頁：插圖：2.課題負責人負責研究方案的制定、修改；確保課題研究按照方案完成，及時糾正偏離方案的行為；負責研究現(xiàn)場的總體監(jiān)督指導；確保研究對象的隱私和權益受到保護，接受和回答研究對象的疑問；與中國倫理審查委員會和方案實施有關人員一起，負責處理不良事件；負責提供課題理論知識和技術支持。3.研究醫(yī)生協(xié)助課題負責人制定、審核課題研究方案。負責向每一個可能入選的研究對象作詳盡的知情同意說明，并讓研究對象在知情同意書上簽名；解答研究家人組病人的各種問題。嚴格按照課題研究方案開展研究工作，完成病例知情同意、入選篩查、臨床信息收集等工作。負責人組病例組織樣本的采集和處理工作。當患者發(fā)生不良事件時給予相應的處理；遇到特殊情況或難以解決的問題，向課題負責人匯報。

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《腎臟病學實驗技術操作規(guī)程》由人民軍醫(yī)出版社出版。

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