臨床流式細胞學檢驗技術(shù)

前言

　　歷時四載筆耕不止，今日終于收筆，手捧著墨香流溢、沉甸甸的書稿，喜悅難抑！說實話，黃燦燦的收獲里確實蘊藏耕犁之苦，但就在這苦中我卻品茗了縷縷清香，以至多少披星戴月的夜晚，甚至通宵達旦，都能如履春天的小路般舒暢。在某種意義上，流式改變了我的生活?！　×魇脚c檢驗醫(yī)學其他亞學科完全不同，需要超預(yù)期的心血付出才能駕馭自如！首先，流式細胞儀就不同于全自動血細胞分析儀、全自動生化分析儀、血凝分析儀等檢驗科貫有儀器，它不是傻瓜照相機，各個部件、指令在使用中非常靈活，每一種檢驗項目需要編輯相應(yīng)的檢測軟件（流式稱之為方案），初期使用甚至在測定每一份臨床標本時，儀器每一個光學通道的電壓、增益都需要檢測者給儀器指定數(shù)值（流式稱之為賦值），由于儀器有兩個散射光通道和數(shù)個熒光通道（目前國內(nèi)機型一般有4～6個熒光通道），增加了賦值的難度。賦值不合適，細胞分群不佳，甚至在流式檢測圖上連細胞的影子都見不到，更談何分析細胞的表達等等！不僅如此，流式還需要檢測者給儀器指定扣除熒光兩兩交疊、三重交疊甚至更多重交疊對單一檢測熒光采集的影響（流式稱之為補償）。同時，儀器液壓系統(tǒng)、氣壓系統(tǒng)的壓力對細胞分群都有影響。流式的上述與眾不同，使儀器的操作使用難度高過了檢驗科其他任何一款儀器。其次，流式對檢驗者的背景知識結(jié)構(gòu)要求高過了檢驗醫(yī)學的其他亞學科。流式是對存在于臨床標本中的一個個細胞進行的檢測，可以是對細胞表面某種或某幾種蛋白質(zhì)表達的有無及有多少的定性定量分析，也可以是對細胞內(nèi)部（包括細胞質(zhì)和細胞核）蛋白質(zhì)或多肽成分的有無及有多少的定性定量分析，還可以是對細胞內(nèi)DNA和（或）RNA含量多少的測定及DNA異常的診斷，如DNA斷裂（凋亡）、DNA倍體異常（腫瘤）等。流式檢驗者在擁有檢驗醫(yī)學理論與技術(shù)的同時，還需要對細胞生物學在臨床各科中的應(yīng)用有所認識，才能夠根據(jù)臨床的需要設(shè)計（編輯）出相應(yīng)的能夠達到檢測目標的檢驗方案，對每一份標本呈現(xiàn)出來的流式圖像進行準確、到位的判斷。細胞生物學是一門新興學科，細胞生物學在臨床各科中的應(yīng)用新穎且五彩斑斕，因此，一個流式團隊需要配備至少1～2名經(jīng)過醫(yī)學碩士甚至博士訓練的領(lǐng)隊，一位優(yōu)秀的流式從業(yè)者需要具有跨學科的、廣博的醫(yī)學知識為支撐，能做到專業(yè)知識的與時俱進最好?！　　杜R床流式細胞學檢驗技術(shù)》一書伴隨我個人學習流式的全過程，是我5年流式檢驗從業(yè)生涯的記錄，更是全體編寫人員對流式的體會和經(jīng)驗的總結(jié)及展望。書中提出了臨床流式細胞學檢驗的概念與內(nèi)涵，呼吁學界正視檢驗醫(yī)學又一個新興亞學科的誕生！

內(nèi)容概要

作者在廣泛收集中外臨床流式細胞學檢驗最新成果的基礎(chǔ)上，結(jié)合自己的研究心得和臨床經(jīng)驗，分15章詳細介紹了流式檢驗的理論基礎(chǔ)、流式細胞儀的性能、特點與使用、常見影響因素、標本的采集/儲存與運輸、51個具體流式檢驗項目(方案)的基本原理、主要試劑、主要儀器、檢驗步驟、檢測方案及解讀、儀器參數(shù)、注意事項、檢驗報告內(nèi)容及參考范圍、臨床意義及質(zhì)量控制措施等。本書內(nèi)容全面、新穎，實用性強，是一部極具指導性的臨床流式細胞學檢驗專著，適合檢驗科醫(yī)師、生物醫(yī)學科研人員、教師和學生閱讀參考。

作者簡介

吳麗娟，主任醫(yī)師、教授、博士、碩士研究生導師。 
    1965年11月生，四川省成都市人，祖籍陜西省安康市。1989年畢業(yè)于重慶醫(yī)科大學醫(yī)學檢驗系五年制本科班；1999年在第三軍醫(yī)大學全軍免疫學研究所獲醫(yī)學免疫學碩士學位，師從吳玉章教授；2004年在重慶醫(yī)科大學醫(yī)學檢驗系和第三軍醫(yī)大學野戰(zhàn)外科研究所聯(lián)合培養(yǎng)下獲臨床檢驗診斷學博士學位，師從康格非教授、朱佩芳研究員、蔣建新研究員；1996～1997年在北京軍事醫(yī)學科學院基礎(chǔ)醫(yī)學研究所分子免疫學研究室進修，師從沈倍奮院士、黎燕研究員；2004年在香港城市大學生物醫(yī)藥研發(fā)中心任高級研究主任；1989年8月～2009年5月先后在第三軍醫(yī)大學附屬西南醫(yī)院、大坪醫(yī)院檢驗科工作，歷任醫(yī)師/助教、主治醫(yī)師/講師、副主任醫(yī)師/副教授；現(xiàn)任成都軍區(qū)總醫(yī)院檢驗科主任醫(yī)師，第三軍醫(yī)大學兼職教授、碩士研究生導師，全軍軍事檢驗醫(yī)學專委會委員，中華預(yù)防醫(yī)學會微生態(tài)學會重慶市專委會委員，全軍及重慶市醫(yī)療事故鑒定專家，《第三軍醫(yī)大學學報》審稿專家，《國際檢驗醫(yī)學雜志》、《檢驗醫(yī)學與臨床》等期刊編委。 
    從事檢驗醫(yī)學臨床、教學及科研工作21年，經(jīng)歷學士、碩士、博士的專業(yè)系統(tǒng)培養(yǎng)，檢驗醫(yī)學理論扎實，技術(shù)全面，在臨床流式細胞檢驗、基因診斷領(lǐng)域造詣較深，具有豐富的流式細胞檢驗經(jīng)驗和基因診斷經(jīng)驗，擅長基因表達調(diào)控、基因工程蛋白多肽類的生物合成、新型醫(yī)學檢驗方法與試劑的研發(fā)等，負責并完成國家級研究課題2項，軍隊課題1項，重慶市課題1項，發(fā)表第一作者論文70余篇，主編、副主編專著各1部，參編專著2部，獲軍隊科技進步獎4項、國家發(fā)明專利1項。曾擔任四年制、五年制、八年制本科生《實驗診斷學》《臨床免疫學》教學工作21年，發(fā)表教學理論研究論文10余篇，負責教學研究課題1項，培養(yǎng)研究生數(shù)名。

書籍目錄

第1章  總論  第一節(jié)  概述  第二節(jié)  常用染色技術(shù)    一、細胞免疫熒光染色技術(shù)    二、核酸熒光染色技術(shù)    三、熒光微球捕獲染色技術(shù)  第三節(jié)  基本檢驗流程    一、標本的采集、運送與儲存    二、標本處理    三、開機    四、儀器光路與流路的檢查與校準    五、上機測定    六、結(jié)果分析    七、檢驗報告    八、儀器清洗    九、關(guān)機  第四節(jié)  方法學特點    一、單細胞分析    二、定量分析    三、快速性    四、準確性    五、特異性    六、重復性    七、多參數(shù)分析第2章  臨床型流式細胞儀  第一節(jié)  結(jié)構(gòu)特點與工作原理    一、結(jié)構(gòu)特點    二、工作原理  第二節(jié)  技術(shù)指標    一、熒光測量靈敏度    二、分辨率    三、前向散射光檢測靈敏度    四、分析速度  第三節(jié)  技術(shù)特色    一、門與設(shè)門    二、圖像數(shù)據(jù)資料顯示    三、FS閾值設(shè)定    四、補償設(shè)置  第四節(jié)  使用方法與技巧    一、開機程序    二、光路和流路的檢測程序    三、清洗程序    四、關(guān)機程序    五、檢驗方案的編輯    六、新編輯檢驗方案參數(shù)的調(diào)試  第五節(jié)  常見故障排除與維護    一、常見故障排除    二、儀器的維護常識  第六節(jié)  流式細胞儀工作術(shù)語第3章  常見影響因素  一、溫度  二、pH  三、熒光染料濃度  四、雜質(zhì)  五、細胞固定劑  六、溶液黏度  七、其他因素第4章  標本的采集、運送與保存  第一節(jié)  標本采集    一、免疫功能分析類標本    二、血小板分析類標本    三、白血病細胞免疫分型類標本    四、DNA分析類標本    五、其他流式檢驗項目標本  第二節(jié)  標本運送    一、運送方法    二、注意事項  第三節(jié)  標本保存    一、短期保存    二、長期保存第5章  單細胞懸液的制備  第一節(jié)  概述    一、物理法    二、酶學法    三、化學法  第二節(jié)  各種懸液的制備    一、血液單細胞懸液    二、骨髓單細胞懸液    三、脫落細胞單細胞懸液    四、實體瘤組織單細胞懸液    五、石蠟包埋組織單細胞核懸液    六、培養(yǎng)細胞單細胞懸液第6章  機體造血功能監(jiān)測  第一節(jié)  CD34+干細胞的測定    一、造血干細胞移植    二、CD34+干細胞檢測的基本原理    三、國外常用CD34+干細胞流式細胞檢驗方法    四、造血干細胞和造血祖細胞的分類檢測  第二節(jié)  網(wǎng)織紅細胞測定  第三節(jié)  網(wǎng)織血小板測定第7章  機體免疫功能監(jiān)測  第一節(jié)  T淋巴細胞及其亞群的檢測    一、總T淋巴細胞、T4淋巴細胞和T8淋巴細胞    二、Th細胞和Ti細胞    三、Tc細胞和Ts細胞    四、Th1和Th2細胞    五、Tc1和Tc2細胞    六、αβT淋巴細胞和γδT淋巴細胞    七、初始T細胞和記憶T細胞    八、活化T細胞  第二節(jié)  B淋巴細胞及其亞群的檢測    一、B淋巴細胞    二、B1和B2淋巴細胞  第三節(jié)  NK細胞的檢測  第四節(jié)  單核細胞的檢測  第五節(jié)  機體免疫功能監(jiān)測的質(zhì)量控制第8章  機體凝血功能監(jiān)測  第一節(jié)  血小板的形態(tài)、結(jié)構(gòu)與功能    一、形態(tài)    二、結(jié)構(gòu)    三、功能  第二節(jié)  血小板流式檢驗現(xiàn)狀  第三節(jié)  血小板精確計數(shù)    一、單平臺法    二、雙平臺法  第四節(jié)  活化血小板測定    一、循環(huán)活化血小板測定    二、體外刺激活化血小板測定    三、血小板-白細胞聚集體檢測    四、血小板-單核細胞聚集體測定  第五節(jié)  血小板膜糖蛋白檢測  第六節(jié)  血小板微粒測定第9章  自身免疫性疾病的鑒別診斷  第一節(jié)  紅細胞表面相關(guān)免疫球蛋白的測定  第二節(jié)  粒細胞表面相關(guān)免疫球蛋白的測定  第三節(jié)  血小板表面相關(guān)免疫球蛋白的測定第10章  腫瘤臨床中的應(yīng)用  第一節(jié)  細胞周期與DNA倍體檢測  第二節(jié)  細胞凋亡檢測    一、PI染色法    二、Annexin V-PI染色法    三、APO 2.7測定法    四、末端轉(zhuǎn)移酶標記(TUNEL)法  第三節(jié)  腫瘤化療多藥耐藥性監(jiān)測第11章  白血病免疫診斷與分型  第一節(jié)  正常骨髓造血細胞分化成熟的抗原表達規(guī)律    一、粒系和單核系細胞抗原    二、淋巴細胞分化發(fā)育的抗原    三、T系、B系和髓系的特異性標志抗原  第二節(jié)  白血病免疫診斷與分型的基本原理與意義    一、白血病免疫分型的發(fā)展    二、流式細胞免疫分型的基本原理    三、流式細胞免疫分型的優(yōu)點  第三節(jié)  流式細胞免疫分型的檢驗方法    一、主要儀器    二、主要試劑    三、標本采集    四、樣本制備    五、細胞染色    六、流式細胞儀測定    七、數(shù)據(jù)分析與解釋  第四節(jié)  臨床常見白血病類型的免疫診斷與分型要點    一、前驅(qū)B和T急性淋巴細胞白血病/淋巴母細胞淋巴瘤    二、慢性淋巴細胞白血病/小淋巴細胞淋巴瘤    三、急性髓系白血病    四、急性未定系列白血病  第五節(jié)  臨床少見白血病類型的免疫診斷與分型要點    一、毛細胞白血病    二、漿細胞骨髓瘤/漿細胞瘤    三、幼稚淋巴細胞白血病    四、T細胞大顆粒淋巴細胞白血病    五、侵襲性NK細胞白血病    六、成人T細胞白血病  第六節(jié)  新進展    一、不設(shè)門流式方法的應(yīng)用    二、介紹幾個較有用的組合  第七節(jié)  質(zhì)量控制    一、有效的樣本制備技術(shù)    二、流式細胞儀的校準和優(yōu)化設(shè)置    三、細胞系別與類型判定第12章  強直性脊柱炎的鑒別診斷  第一節(jié)  Beckman-Coulter HLA-B27/HLA-B7表達的測定  第二節(jié)  BD HLA-B27/CD3表達的測定第13章  陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿的鑒別診斷  第一節(jié)  紅細胞表面CD55和CD59表達的測定  第二節(jié)  白細胞表面CD55和CD59表達的測定  第三節(jié)  白細胞的FLAER法測定第14章  細胞因子測定  第一節(jié)  流式微球分析技術(shù)與流式液相芯片技術(shù)  第二節(jié)  人類Th1/Th2細胞因子的檢測第15章  質(zhì)量控制  第一節(jié)  室內(nèi)質(zhì)量控制    一、分析前對樣本和試劑的質(zhì)量控制    二、分析中儀器及檢測過程的質(zhì)量控制    三、分析后數(shù)據(jù)傳輸?shù)馁|(zhì)量控制  第二節(jié)  室間質(zhì)量評價    一、國家衛(wèi)生部流式檢驗室間質(zhì)評    二、國際流式檢驗室間質(zhì)評附錄A  Multicycle DNA含量與細胞周期分析軟件附錄B  臨床常見流式檢驗指標的正常參考范圍附錄C  臨床流式細胞學檢驗技術(shù)相關(guān)名詞附錄D  常用流式檢驗試劑的配制

圖書封面

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