出版時(shí)間:2009-4 出版社:張波、尤昭玲、李凡成、 肖子曾 人民軍醫(yī)出版社 (2009-04出版) 作者:張波 編 頁數(shù):170
前言
隨著生命科學(xué)的迅速發(fā)展,生物化學(xué)和分子生物學(xué)越來越成為生命科學(xué)各領(lǐng)域的重要基礎(chǔ)學(xué)科,生物化學(xué)與分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)已成為生命學(xué)科各領(lǐng)域研究的常規(guī)技術(shù)。為了使同學(xué)們能夠順利完成生物化學(xué)與分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn),了解現(xiàn)代生物化學(xué)與分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)最基本的技術(shù),并在今后專業(yè)課的學(xué)習(xí)和工作中靈活應(yīng)用,我們編寫了本教材。本書主要包括基礎(chǔ)理論和實(shí)驗(yàn)操作兩個(gè)部分。基礎(chǔ)理論部分包括生物化學(xué)與分子生物學(xué)的基本操作技術(shù)原理,其中第l章由譚峰編寫,第2章由程麗娟編寫,第3章由張波和劉文龍編寫,第4章由張波和成細(xì)華編寫,第5章由張波編寫,第6章由張波、楊利平和賀愛蘭編寫。實(shí)驗(yàn)操作部分包括生化物質(zhì)的分離鑒定與定量測(cè)定等生物化學(xué)基本實(shí)驗(yàn)以及常用的分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。其中第7章由張波、成細(xì)華、劉文龍和劉輝編寫。第8章由張波、周賽男、張?jiān)戮?、成?xì)華和劉輝編寫。第9章由張波和劉輝編寫。第10章由張波、楊利平和賀愛蘭編寫。本書的編寫風(fēng)格簡明、實(shí)用。編寫中突出實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)性、技能性和綜合性。在編寫過程中,去除了一些過時(shí)的實(shí)驗(yàn)技術(shù),將過去實(shí)驗(yàn)教學(xué)過程中的單一技能訓(xùn)練轉(zhuǎn)化為綜合實(shí)驗(yàn)技能訓(xùn)練,在實(shí)驗(yàn)課程體系和內(nèi)容的設(shè)置方面以系統(tǒng)綜合大實(shí)驗(yàn)為核心并以科學(xué)研究思路為線索設(shè)計(jì)系列教學(xué)實(shí)驗(yàn),讓學(xué)生在實(shí)驗(yàn)課程中體驗(yàn)科研的過程,使學(xué)生從整體上了解進(jìn)行生物化學(xué)及分子生物學(xué)科學(xué)研究的思路和方法,培養(yǎng)學(xué)生正確的科研思維能力和綜合素質(zhì)。本教材涉及了廣泛的實(shí)驗(yàn)技術(shù),可作為高等院校生物和醫(yī)藥農(nóng)林等專業(yè)學(xué)生生物化學(xué)和分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的指導(dǎo)用書,也可供生物化學(xué)和分子生物學(xué)有關(guān)研究人員、企業(yè)技術(shù)人員等參考。盡管我們用最大努力來編寫本教材,但仍可能存在錯(cuò)誤的地方,希望讀者在使用的過程中提出寶貴意見,以便更好地完善本教材。在本書的編寫過程中受到了湖南師范大學(xué)胡興旺博士的支持,同時(shí)劉群良、胡梅、陳伶利和吳瓊等幾位老師也對(duì)本書編寫作出了貢獻(xiàn),在此一并表示感謝。
內(nèi)容概要
《生物化學(xué)與分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)教程》包括基礎(chǔ)理論和實(shí)驗(yàn)操作兩大部分?;A(chǔ)理論部分闡述了生物化學(xué)基本操作、緩沖液配制、分離技術(shù)、層析技術(shù)、電泳技術(shù)、光譜分析技術(shù)和常用的分子生物學(xué)技術(shù);實(shí)驗(yàn)操作部分介紹了物質(zhì)分離鑒定、物質(zhì)定量測(cè)定、蛋白質(zhì)性質(zhì)及常用分子生物學(xué)技術(shù)方法等70個(gè)實(shí)驗(yàn),每個(gè)實(shí)驗(yàn)包括目的、原理、試劑與器材、操作方法、注意事項(xiàng)和思考題?!渡锘瘜W(xué)與分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)教程》內(nèi)容系統(tǒng),闡述簡明,注重學(xué)生動(dòng)手能力的培養(yǎng)和實(shí)驗(yàn)過程的科學(xué)體驗(yàn),主要供高等醫(yī)學(xué)院校相關(guān)專業(yè)實(shí)驗(yàn)教學(xué)之用,也可供相關(guān)專業(yè)的科研人員、企業(yè)技術(shù)人員閱讀參考。
書籍目錄
第一篇 基礎(chǔ)理論第1章 基本操作與緩沖液的配制第一節(jié) 洗滌液的配制及實(shí)驗(yàn)用器皿的清洗第二節(jié) 常用儀器的使用第三節(jié) 溶液的混勻與過濾第四節(jié) 試劑及試劑保存與配制第五節(jié) 實(shí)驗(yàn)誤差與提高實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)確度的方法第2章 常用的簡單分離技術(shù)第一節(jié) 離心第二節(jié) 過濾第三節(jié) 濃縮第四節(jié) 沉淀第五節(jié) 透析第3章 層析技術(shù)第一節(jié) 層析的原理第二節(jié) 吸附層析第三節(jié) 排阻層析第四節(jié) 分配層析第五節(jié) 離子交換層析第六節(jié) 親和層析第七節(jié) 氣相層析第八節(jié) 高效液相層析第4章 電泳技術(shù)第5章 光譜分析技術(shù)第6章 常用的分子生物學(xué)技術(shù)第一節(jié) 核酸的分離純化技術(shù)第二節(jié) 重組DNA技術(shù)第三節(jié) 核酸分子雜交技術(shù)第四節(jié) PCR技術(shù)第五節(jié) 蛋白質(zhì)相互作用技術(shù)原理第六節(jié) 蛋白質(zhì)與DNA相互作用技術(shù)原理第二篇 實(shí)驗(yàn)操作第7章 物質(zhì)的分離與鑒定實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)一 氨基酸的分離鑒定(紙層析法)實(shí)驗(yàn)二 血紅蛋白與魚精蛋白的層析分離實(shí)驗(yàn)三 離子交換層析法分離超氧化物歧化酶實(shí)驗(yàn)四 親和層析純化胰蛋白酶實(shí)驗(yàn)五 氣相層析實(shí)驗(yàn)六 高效液相層析實(shí)驗(yàn)七 血清蛋白質(zhì)醋酸纖維薄膜電泳實(shí)驗(yàn)八 DNA的瓊脂糖凝膠電泳實(shí)驗(yàn)九 平板聚丙烯酰胺凝膠電泳分離血清蛋白質(zhì)實(shí)驗(yàn)十 梯度PAGE分離血清蛋白質(zhì)實(shí)驗(yàn)十一 SDS-PAGE測(cè)定蛋白質(zhì)相對(duì)分子質(zhì)量實(shí)驗(yàn)十二 血紅蛋白吸收曲線的繪制實(shí)驗(yàn)十三 茯苓多糖和豬苓多糖水解與鑒定實(shí)驗(yàn)十四 肝組織中核酸的分離與鑒定實(shí)驗(yàn)十五 酪蛋白的制備第8章 物質(zhì)定量測(cè)定實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)一 核黃素?zé)晒舛繙y(cè)定實(shí)驗(yàn)二 鄰甲苯胺法測(cè)定血糖濃度實(shí)驗(yàn)三 維生素C的測(cè)定(2,4-二硝基苯肼法)實(shí)驗(yàn)四 用正交法測(cè)定幾種因素對(duì)酶活力的影響實(shí)驗(yàn)五 血清總膽固醇的測(cè)定實(shí)驗(yàn)六 血清膽固醇測(cè)定(鄰苯二甲醛法)實(shí)驗(yàn)七 血清三酰甘油測(cè)定實(shí)驗(yàn)八 血清膽紅素的定量測(cè)定實(shí)驗(yàn)九 血清肌酐定量(苦味酸法)實(shí)驗(yàn)十 血清鈣定量(鄰甲酚酞絡(luò)合劑法)實(shí)驗(yàn)十一 血清鉀定量(四苯硼鈉法)實(shí)驗(yàn)十二 血清尿素氮定量(二乙酰一肟法)實(shí)驗(yàn)十三 血漿二氧化碳結(jié)合力測(cè)定(滴定法)實(shí)驗(yàn)十四 蛋白質(zhì)含量測(cè)定(紫外吸收法)實(shí)驗(yàn)十五 蛋白質(zhì)含量測(cè)定(考馬斯亮藍(lán)法)實(shí)驗(yàn)十六 蛋白質(zhì)含量測(cè)定(雙縮脲法)實(shí)驗(yàn)十七 蛋白質(zhì)含量測(cè)定(Folin-酚法)實(shí)驗(yàn)十八 RNA的定量測(cè)定(苔黑酚法)實(shí)驗(yàn)十九 還原糖和總糖含量的測(cè)定(3,5-二硝基水楊酸比色法)實(shí)驗(yàn)二十 糖的定量測(cè)定(蒽酮比色法)實(shí)驗(yàn)二十一 果膠質(zhì)含量測(cè)定(重量法)實(shí)驗(yàn)二十二 脂肪碘值的測(cè)定實(shí)驗(yàn)二十三 中藥杏仁脂質(zhì)成分的定量測(cè)定(索氏提取法)第9章 蛋白質(zhì)性質(zhì)實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)一 酶的特性實(shí)驗(yàn)二 茚三酮反應(yīng)實(shí)驗(yàn)三 蛋白質(zhì)等電點(diǎn)的測(cè)定實(shí)驗(yàn)四 蛋白質(zhì)的沉淀反應(yīng)實(shí)驗(yàn)五 丙二酸對(duì)琥珀酸脫氫酶活性的影響實(shí)驗(yàn)六 乳酸脫氫酶及其輔酶的作用實(shí)驗(yàn)七 堿性磷酸酶米氏常數(shù)測(cè)定(雙倒數(shù)作圖法)實(shí)驗(yàn)八 血清丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶的活性測(cè)定第10章 分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)一 從植物組織提取基因組DNA實(shí)驗(yàn)二 從動(dòng)物組織中提取基因組DNA實(shí)驗(yàn)三 細(xì)菌基因組DNA的制備實(shí)驗(yàn)四 從瓊脂糖凝膠中回收3-磷酸甘油醛脫氫酶基因片段實(shí)驗(yàn)五 LB、2YT液體和固體培養(yǎng)基的配制實(shí)驗(yàn)六 質(zhì)粒DNA少量快速提取實(shí)驗(yàn)七 質(zhì)粒DNA的大量提取和純化實(shí)驗(yàn)八 人ATP7B基因第十三外顯子的PCR實(shí)驗(yàn)九 肝組織總RNA的提取實(shí)驗(yàn)十 GAPDH mRNA的反轉(zhuǎn)錄PCR(RT-PCR)實(shí)驗(yàn)十一 利用實(shí)時(shí)定量PCR分析TNFAIPl在不同細(xì)胞系中的表達(dá)實(shí)驗(yàn)十二 重組質(zhì)粒的連接實(shí)驗(yàn)十三 大腸桿菌DH5a感受態(tài)細(xì)胞的制備實(shí)驗(yàn)十四 重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞及篩選、鑒定實(shí)驗(yàn)十五 重組質(zhì)粒DNA的酶切實(shí)驗(yàn)十六 DNA印跡雜交(一)實(shí)驗(yàn)十七 DNA印跡雜交(二)實(shí)驗(yàn)十八 肝癌細(xì)胞總RNA的RNA印跡實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)十九 蛋白質(zhì)印跡實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)二十 酵母雙雜交系統(tǒng)確定蛋白質(zhì)相互作用實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)二十一 GST融合蛋白質(zhì)沉降技術(shù)檢測(cè)蛋白質(zhì)相互作用實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)二十二 免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)二十三 電泳遷移率實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)二十四 染色質(zhì)免疫沉淀實(shí)驗(yàn)
章節(jié)摘錄
插圖:第1章 基本操作與緩沖液的配制在生物化學(xué)與分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中,有一些操作幾乎是每次實(shí)驗(yàn)都需要用到的,它們對(duì)實(shí)驗(yàn)成功非常重要,這些操作稱為基本操作,本章對(duì)這些操作進(jìn)行介紹。緩沖液是很多實(shí)驗(yàn)中使用的基本溶液,為了方便實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)備工作,本章也對(duì)常用緩沖液的配制方法進(jìn)行介紹。第一節(jié)洗滌液的配制及實(shí)驗(yàn)用器皿的清洗實(shí)驗(yàn)中所使用的玻璃儀器及塑料器皿清潔與否,直接影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果,往往由于器皿的不清潔或被污染而造成較大的實(shí)驗(yàn)誤差,甚至?xí)霈F(xiàn)相反的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。因此,實(shí)驗(yàn)用器皿洗滌工作是十分重要的基本操作,是做好實(shí)驗(yàn)的前提及實(shí)驗(yàn)成敗的關(guān)鍵因素之一。一、洗滌液的種類及配制1.0.5%去垢劑溶液(常用洗滌液)。2.鉻酸洗液又稱重鉻酸鉀一濃硫酸洗滌液,簡稱洗液,廣泛用于玻璃儀器的洗滌,配制方法如下。(1)稱取5g重鉻酸鉀粉末放入250ml燒杯中,加5ml水,盡量使其溶解。然后邊攪拌,邊緩緩注入濃硫酸100ml,待洗液溫度冷卻至室溫,將其轉(zhuǎn)移到有玻璃塞子的細(xì)頸干燥試劑瓶內(nèi)貯存?zhèn)溆?。?)量取100ml工業(yè)硫酸置于250ml燒杯中,小心熱,慢慢加59重鉻酸鉀粉末,邊加邊攪拌,待全部溶解后,冷卻并貯于有玻璃塞子的試劑瓶中備用。3.濃HCI(工業(yè)用)常用于洗去水垢或某些無機(jī)鹽沉淀。4.濃HNO3常用于洗滌除去金屬離子。
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《生物化學(xué)與分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)教程》的編寫風(fēng)格簡明、實(shí)用。編寫中突出實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)性、技能性和綜合性。在編寫過程中,去除了一些過時(shí)的實(shí)驗(yàn)技術(shù),將過去實(shí)驗(yàn)教學(xué)過程中的單一技能訓(xùn)練轉(zhuǎn)化為綜合實(shí)驗(yàn)技能訓(xùn)練,在實(shí)驗(yàn)課程體系和內(nèi)容的設(shè)置方面以系統(tǒng)綜合大實(shí)驗(yàn)為核心并以科學(xué)研究思路為線索設(shè)計(jì)系列教學(xué)實(shí)驗(yàn),讓學(xué)生在實(shí)驗(yàn)課程中體驗(yàn)科研的過程,使學(xué)生從整體上了解進(jìn)行生物化學(xué)及分子生物學(xué)科學(xué)研究的思路和方法,培養(yǎng)學(xué)生正確的科研思維能力和綜合素質(zhì)。
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