臨床PCR基因診斷技術(shù)

內(nèi)容概要

　　《臨床PCR基因診斷技術(shù)》的重點(diǎn)是以臨床實(shí)用性為目的，從PCR技術(shù)的基本原理，引物的設(shè)計(jì)，臨床各種標(biāo)本中的模板制備，PCR擴(kuò)增，產(chǎn)物檢測(cè)方法等，都進(jìn)行了詳細(xì)介紹，實(shí)驗(yàn)者只要按所述程序操作，便能順利地完成你所要求的實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目并獲得滿(mǎn)意的結(jié)果。同時(shí)對(duì)PCR技術(shù)在臨床疾病診斷中的應(yīng)用意義，給予了詳細(xì)的論述，為臨床醫(yī)生進(jìn)行疾病的診斷提供方便。 《臨床PCR基因診斷技術(shù)》是作者在參閱國(guó)內(nèi)外大量的文獻(xiàn)，并結(jié)合多年從事臨床PCR實(shí)驗(yàn)診斷工作經(jīng)驗(yàn)的基礎(chǔ)上編寫(xiě)而成。它的出版，將為工作在醫(yī)學(xué)臨床第一線的醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)診斷技術(shù)人員、臨床醫(yī)生提供一本具有較高價(jià)值的參考書(shū)。

書(shū)籍目錄

第一章　概論第一節(jié)　PCR技術(shù)的發(fā)明第二節(jié)　PCR技術(shù)的發(fā)展第三節(jié)　PCR技術(shù)基本原理第四節(jié)　PCR技術(shù)的特點(diǎn)第五節(jié)　PCR技術(shù)的標(biāo)準(zhǔn)化操作第六節(jié)　PCR技術(shù)有關(guān)影響因素第二章　PCR技術(shù)的類(lèi)型及應(yīng)用第一節(jié)　免疫PCR技術(shù)第二節(jié)　定量PCR技術(shù)第三節(jié)　原位PCR技術(shù)第四節(jié)　毛細(xì)管PCR技術(shù)第五節(jié)　其他種類(lèi)PCR技術(shù)第六節(jié)　幾種特殊的PCR擴(kuò)增模式第三章　PCR技術(shù)實(shí)驗(yàn)條件第一節(jié)　PcR引物的設(shè)計(jì)第二節(jié)　GLDKEY數(shù)據(jù)庫(kù)的應(yīng)用第三節(jié)　PCR反應(yīng)條件的優(yōu)化第四節(jié)　DA模板制備方法第五節(jié)　RA模板制備方法第六節(jié)　PCR擴(kuò)增產(chǎn)物檢測(cè)的方法第七節(jié)　電泳凝膠攝影技術(shù)第四章　PCR技術(shù)質(zhì)量控制第一節(jié)　PCR污染及預(yù)防第二節(jié)　避免擴(kuò)增的DA序列交叉污染第三節(jié)　PCR技術(shù)的室內(nèi)質(zhì)量控制第四節(jié)　PCR技術(shù)的室問(wèn)質(zhì)量控制第五節(jié)　PCR技術(shù)在臨床檢測(cè)中存在的問(wèn)題及分析第五章　基因診斷的臨床意義第一節(jié)　基因診斷的應(yīng)用范圍第二節(jié)　病毒性肝炎第三節(jié)　性傳播性疾病第十一章 PCR檢測(cè)寄生蟲(chóng) 第十二章 PCR技術(shù)在遺傳性疾病診斷中的應(yīng)用 第十三章 PCR技術(shù)在檢測(cè)腫瘤基因中的應(yīng)用 附錄1  PCR技術(shù)所用設(shè)備 附錄2  常用貯存液 附錄3　PCR實(shí)驗(yàn)常用緩沖液附錄4　電泳緩沖液附錄5　載樣緩沖液附錄6　常用裂解液

章節(jié)摘錄

　　3.特異性　　原位PCR的特異性是評(píng)價(jià)該方法是否成功的一個(gè)關(guān)鍵參數(shù)。液相PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的特異性可用凝膠電泳或Souther印跡鑒定。如用細(xì)胞懸液做原位PCR，擴(kuò)增后可將細(xì)胞溶解，同樣可采用凝膠電泳或Souther印跡對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物的特異性進(jìn)行鑒定。但在玻片上進(jìn)行原位PCR，只有間接法原位PCR可通過(guò)原位雜交檢出特異性擴(kuò)增片段，特異性較高，而直接法就較差。原位PCR的非特異性問(wèn)題主要是較容易出現(xiàn)假陽(yáng)性。其原因可能是引物與模板錯(cuò)配或在引物延伸過(guò)程中三磷酸核苷酸的錯(cuò)誤摻入而導(dǎo)致特異性序列擴(kuò)增；或因細(xì)胞內(nèi)受損DNA的修復(fù)而形成的非特異性序列；也可能由于特異性擴(kuò)增產(chǎn)物彌散出細(xì)胞外而附著在鄰近的陰性細(xì)胞上。在原位擴(kuò)增時(shí)，采取熱啟動(dòng)PCR和／或套式PCR，可提高反應(yīng)的特異性。在引物延伸時(shí)，如摻人生物素標(biāo)記的三磷酸核苷酸。會(huì)使合成的新鏈體積增大，這樣可減輕由彌散引起的人工現(xiàn)象。在PCR反應(yīng)中，用針對(duì)同一靶序列不同片段的多對(duì)引物進(jìn)行擴(kuò)增，這樣可得到不同長(zhǎng)度的擴(kuò)增產(chǎn)物，它們互相重疊，像“腳手架”那樣交織一起。由此可避免擴(kuò)增產(chǎn)物被洗脫，有利于擴(kuò)增序列原位保留，防止彌散。采用多對(duì)引物不僅可提高原位PCR的特異性，而且還提高其敏感性。但是當(dāng)為靶序列設(shè)計(jì)多對(duì)引物有困難時(shí)，這一增加反應(yīng)特異性和敏感性的措施就無(wú)法采用了。　　三、應(yīng)用前景　　回顧人類(lèi)可行進(jìn)步的歷史，許多可行的發(fā)展是以研究方法與工具的創(chuàng)新為先導(dǎo)的。以病理學(xué)為例，自古至今隨著尸體解剖、光學(xué)顯微鏡、電子顯微鏡以及免疫組織化學(xué)技術(shù)的創(chuàng)立，先后經(jīng)歷了器官病理學(xué)、細(xì)胞病理學(xué)、超微病理學(xué)和免疫病理學(xué)等幾個(gè)發(fā)展階段。僅年來(lái)，原位雜交和原位PCR的興起，又將病理學(xué)這門(mén)有著悠久歷史的學(xué)科推進(jìn)到了分子病理學(xué)水平。原位PCR作為一種敏感性高、特異性強(qiáng)，能在組織細(xì)胞原位進(jìn)行低拷貝數(shù)基因定位的形態(tài)學(xué)研究方法，從一開(kāi)始就受到病理學(xué)專(zhuān)家的青睞。在艾滋病等病毒病因、潛伏性、隱性感染及發(fā)病機(jī)理的探討，腫瘤細(xì)胞的基因突變、基因重排，良、惡性腫瘤的鑒別，以及對(duì)遺傳性疾病基因缺陷等的方面，發(fā)揮了重要的作用?！　　?/pre>








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