擬南芥實(shí)驗(yàn)技術(shù)

內(nèi)容概要

　　擬南芥作為一種珍貴的植物實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?，對于理解高等植物的生理生化、遺傳、變異、發(fā)育等基本過程具有重要意義。 擬南芥研究領(lǐng)域涉及生物學(xué)及遺傳學(xué)的許多方面，曲冠證等編著的《擬南芥實(shí)驗(yàn)技術(shù)》主要介紹擬南芥研究最基礎(chǔ)的實(shí)驗(yàn)技術(shù)。本書的特點(diǎn)是：以擬南芥基因工程相關(guān)實(shí)驗(yàn)為主線展開，從擬南芥的培育、遺傳轉(zhuǎn)化、陽性篩選、功能驗(yàn)證等方面，將理論與實(shí)驗(yàn)結(jié)合，原理與技術(shù)融匯，開拓讀者思路，提供研究方法，以解決擬南芥研究者在研究初期經(jīng)常碰到的一些問題，而且很多問題也是編者在擬南芥研究過程中所碰到過的一些問題。 本書共7章，包括擬南芥概述、擬南芥的培育、組織培養(yǎng)、轉(zhuǎn)基因途徑、突變體的誘變及篩選、擬南芥實(shí)驗(yàn)材料的提取與常用的細(xì)胞學(xué)方法等。

書籍目錄

前言第1章 擬南芥概述1.1 擬南芥的系統(tǒng)地位1.2 擬南芥形態(tài)學(xué)與解剖學(xué)1.2.1 根1.2.2 莖1.2.3 葉1.2.4 花1.2.5 果實(shí)和種子1.3 擬南芥的模式植物特點(diǎn)1.3.1 植株個體小1.3.2 生長周期短1.3.3 種子結(jié)實(shí)量大1.3.4 自花授粉1.3.5 易突變1.3.6 基因組小1.3.7 基因序列重復(fù)少1.3.8 易進(jìn)行遺傳轉(zhuǎn)化1.3.9 遺傳信息豐第2章 擬南芥的培育2.1 擬南芥的生長條件2.1.1 光2 1.2 溫度2.1.3 空氣相對濕度2.1.4 土壤水分2.1.5 種植密度2.1.6 pH值2.1.7 生長基質(zhì)2.1.8 其他條件2.2 播種與栽培2.2.1 擬南芥無菌苗培養(yǎng)方法2.2.2 擬南芥種子的土壤點(diǎn)播法2.2.3 擬南芥無菌苗的移栽2.2.4 擬南芥的水培法2 2.5 擬南芥培育過程中的常見問題2.2.6 種子的收獲和保存第3章 擬南芥的組織培養(yǎng)3.1 純性培養(yǎng)3.2 誘導(dǎo)愈傷組織及植物的再生3.3 懸浮培養(yǎng)3.4 擬南芥原生質(zhì)體的制備第4章 擬南芥轉(zhuǎn)基因途徑4.1 DNA轉(zhuǎn)化的瞬時表達(dá)途徑4.1.1 基因槍轉(zhuǎn)化4.1.2 PEG介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)化4.2 農(nóng)桿菌介導(dǎo)的穩(wěn)定表達(dá)途徑4 2.1 農(nóng)桿菌表達(dá)栽體的構(gòu)建4.2.2 擬南芥的種植4.2.3 高效實(shí)用的擬南芥遺傳轉(zhuǎn)化途徑4 2.4 擬南芥轉(zhuǎn)基因種子的篩選第5章 擬南芥突變體的誘變及篩選5.1 擬南芥突變體的誘變方法5.1.1 物理誘變法5.1.2 化學(xué)誘變法5.1.3 生物誘變法5.2 擬南芥突變體的表型篩選5.2.1 子葉與葉型5.2.2 種子5.2.3 下胚軸5.2.4 根5.2.5 花5.2.6 莖5.2.7 角果5.2.8 胚胎發(fā)生5.2.9 激素反應(yīng)5.2.10 脅迫反應(yīng)5.3 擬南芥多基因突變體的獲得5.3.1 擬南芥人工雜交實(shí)驗(yàn)5.3.2 雙突變純合體的篩選5.3.3 T-DNA插入突變體的互補(bǔ)實(shí)驗(yàn)5.4 擬南芥目的基因的RNAi技術(shù)第6章 擬南芥實(shí)驗(yàn)材料的提取6.1 擬南芥總DNA的提取6.1.1 CTAB精提法6.1.2 SDS法6.1.3 試劑盒法6.2 擬南芥核DNA的提取6.3 擬南芥細(xì)胞器DNA的提取6.4 擬南芥RNA的提取6.4.1 CTAB法提取RNA6.4.2 Trizol法快速提取植物組織RNA6.4.3 試劑盒法提取RNA6.4.4 總.RNA中mRNA的分離6.5 擬南芥蛋白質(zhì)的提取6.5.1 三氯醋酸-丙酮沉淀法6 5 2 （NH4）2S04沉淀法第7章 擬南芥研究中常用的細(xì)胞學(xué)方法7.1 擬南芥組織的石蠟切片技術(shù)7.2 擬南芥組織的冰凍切片技術(shù)7.3 擬南芥花粉表型的分析7.4 擬南芥胚珠透明技術(shù)7.5 擬南芥基因表達(dá)的cDNA微陣列檢測技術(shù)參考文獻(xiàn)附錄附錄1：B5（Gmborg）培養(yǎng)基的配制附錄2：N6培養(yǎng)基的配制附錄3：擬南芥PNs營養(yǎng)液的配制附錄4：Gus染液的配制附錄5：模式植物擬南芥生物信息學(xué)資源網(wǎng)站附錄6：縮寫詞

章節(jié)摘錄

　　[處理措施]　　為防止燒苗現(xiàn)象的發(fā)生，在培養(yǎng)基的選取時就應(yīng)該選擇疏松的、有機(jī)肥含量較低的土壤，并且添加蛭石和珍珠巖，提高培養(yǎng)基質(zhì)的透水性和透氣性，增加土壤中的溶氧量，促進(jìn)幼苗根部的有氧呼吸，增加對水分的攝取量。在高溫天氣里，如果培養(yǎng)基干燥得較快，就將培養(yǎng)液稀釋后澆注或者間隔澆灌清水以稀釋土壤中的離子濃度。另外，可以進(jìn)行地表的土壤翻動，增加土壤的透氣性和溶氧量?！　?.2.5.4 長勢不均和晚期枯死　　擬南芥植株在相同的環(huán)境中培養(yǎng)，經(jīng)常會在一個培養(yǎng)盆中出現(xiàn)前后或者左右?guī)字曛仓觊L勢不均的現(xiàn)象，表現(xiàn)在植株一邊高一邊低，或者一邊植株長勢正常，一邊植株蹲苗不長等現(xiàn)象。經(jīng)過大量實(shí)驗(yàn)觀察發(fā)現(xiàn)，長勢不均的主要原因是因?yàn)榕囵B(yǎng)室的植株所處的環(huán)境不一致造成的，通風(fēng)口處的植株受到風(fēng)的影響，長勢會比遠(yuǎn)離風(fēng)口的植株長勢稍微變慢。距離光源的遠(yuǎn)近程度也會對植株產(chǎn)生一定的影響。我們在擬南芥種植中，發(fā)現(xiàn)過這樣一種現(xiàn)象，就是擬南芥在抽莖后繁花期，有時會出現(xiàn)整株植株慢慢枯死的現(xiàn)象，令人痛惜不已。在排除其他因素之后，在植株根部的土壤中發(fā)現(xiàn)灰白色的蛆蟲，由于蛆蟲在根部覓食，對植株的根系造成很大影響，最終導(dǎo)致植株的枯敗而死?！　處理措施]　　為緩解植株長勢不均的問題，可將植株放在遠(yuǎn)離風(fēng)口的地方或者對風(fēng)口進(jìn)行遮擋，如用硬紙板隔開風(fēng)的直接吹拂；對于光源的影響，可以將光源平行安置于頂部，這樣就形成了對地面幼苗的等距離照射。植株枯死的原因是因?yàn)榧纳郧x的危害，只要?dú)缜x，病癥就能得到緩解，可以采取灌根法消除蟲害?！　?.2.5.5 褐化現(xiàn)象　　褐化現(xiàn)象普遍存在于擬南芥的生長周期中。在培養(yǎng)皿中的無菌幼苗，偶爾會出現(xiàn)中間部分的植株葉片顏色加深，長勢慢于周圍其他小苗的現(xiàn)象。剛移栽的幼苗在栽種后一段時間，也經(jīng)常會出現(xiàn)褐化現(xiàn)象，表現(xiàn)為葉片顏色變深，呈現(xiàn)淡紫色，致使移栽的幼苗停止生長（圖2. 8b-d）。在植株培養(yǎng)的中期，偶爾也會出現(xiàn)褐化現(xiàn)象，這時候褐化現(xiàn)象對整個植株的影響不是很明顯。組培苗在培養(yǎng)過程中發(fā)生褐變現(xiàn)象是一種普遍現(xiàn)象，由于自身組織從表面向培養(yǎng)基中釋放酚類物質(zhì)，以致培養(yǎng)基逐漸變成褐色，培養(yǎng)物也隨之進(jìn)一步變褐死亡，發(fā)生褐變現(xiàn)象。高濃度的無機(jī)鹽離子，較高的pH值，特殊的激素都能誘導(dǎo)褐化現(xiàn)象的出現(xiàn)，同時強(qiáng)光照、高溫也能加重褐化現(xiàn)象?！　　?/pre>








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