RNA分離與鑒定實(shí)驗(yàn)指南

內(nèi)容概要

RNA的分離與鑒定構(gòu)成了分子生物學(xué)的核心領(lǐng)域之一，本指南收錄并詳細(xì)介紹許多經(jīng)過實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證并優(yōu)化的實(shí)驗(yàn)方案，用于RNA的分離與鑒定，注重闡述這些研究方法如何應(yīng)用到基因表達(dá)的轉(zhuǎn)錄及轉(zhuǎn)錄后調(diào)控等研究工作之中。實(shí)驗(yàn)指南第三版經(jīng)過國內(nèi)有從事RNA技術(shù)研究多年的專家翻譯為中文，體現(xiàn)了下列特色：　　比第二版相比，新增RNA分離、高通量方法、生物信息學(xué)和RNAi等內(nèi)容；　　詳細(xì)解釋了RNA處理、儲存和操作的實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié)；　　擴(kuò)充RT-PCR、RACE等內(nèi)容；　　分子生物學(xué)、遺傳學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、發(fā)育生物學(xué)等領(lǐng)域的專家學(xué)者、研究生、高年級本科生，醫(yī)學(xué)基礎(chǔ)、農(nóng)業(yè)生物技術(shù)等領(lǐng)域從事RNA工作的相關(guān)研究者，會從書中獲取他們急需的RNA實(shí)驗(yàn)技術(shù)細(xì)節(jié)，進(jìn)而判斷實(shí)驗(yàn)中出現(xiàn)問題的原因，并獲取合理的解決辦法。

書籍目錄

第1章　RNA與細(xì)胞生物學(xué)第2章　真核基因的轉(zhuǎn)錄與組織第3章　信使RNA第4章　核糖核酸酶第5章　RNA分離策略第6章　從組織中提取RNA第7章　多聚腺苷酸RNA的分離第8章　RNA制備的質(zhì)量控制第9章　斑點(diǎn)印跡分析第10章　電泳　第11章　照片文檔和圖像分析第12章　Northern印跡分析第13章　核酸探針技術(shù)第14章　核酸雜交應(yīng)用第15章　檢測原理第16章　核酸酶保護(hù)法定量測定特定的mRNA第17章　核RNA分析第18章　cDNA合成第19章　反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)第20章　定量PCR技術(shù)第21章　轉(zhuǎn)錄差減法第22章　mRNA差異顯示第23章　基因表達(dá)的高通量分析第24章　RNA干擾——目標(biāo)基因沉默第25章　基因組、轉(zhuǎn)錄組、蛋白質(zhì)組和生物信息學(xué)第26章　一個(gè)RNA范例尾聲附錄術(shù)語表索引

章節(jié)摘錄

　　第1章 RNA與細(xì)胞生物學(xué)　　1.1 為什么研究RNA　　所有細(xì)胞和組織的功能，最終都受到基因表達(dá)的調(diào)控。之所以選擇研究RNA調(diào)控作為細(xì)胞生物化學(xué)的參數(shù)之一，其理由就像細(xì)胞內(nèi)RNA群體一樣復(fù)雜多樣。通常，RNA的性狀總是與具體科學(xué)研究過程中提出的轉(zhuǎn)錄（即基因表達(dá)）問題聯(lián)系在一起?！　∪魏蜶NA實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的目標(biāo)，通常涉及一個(gè)或多個(gè)功能問題，下面列出了一些這類問題?！　、贉y定細(xì)胞轉(zhuǎn)錄物的恒態(tài)豐度。因?yàn)镽NA很容易分離，所以恒態(tài)豐度是最常被研究的基因表達(dá)參數(shù)。通過Northern雜交、核酸酶保護(hù)實(shí)驗(yàn)或PCR相關(guān)方法等測定，可以對RNA表達(dá)譜進(jìn)行定性與定量分析。　?、诨蛐蛄修D(zhuǎn)錄或RNA加工途徑的速度測定。這個(gè)可以用新生mRNA分析技術(shù)（核逃逸實(shí)驗(yàn)）來進(jìn)行推斷，至少可以進(jìn)行部分推斷。新生mRNA分析技術(shù)就是將放射性同位素標(biāo)記的核糖核苷酸前體摻入新生轉(zhuǎn)錄物，再測定各種RNA中摻入同位素的比例。該比例即對應(yīng)于各種RNA的豐度。再結(jié)合Northern雜交的結(jié)果，就能推知對該序列的調(diào)控是發(fā)生在轉(zhuǎn)錄水平還是轉(zhuǎn)錄后事件所造成的結(jié)果?！　、跼NA分子一級結(jié)構(gòu)的作圖，包括5末端、3末端、內(nèi)含子的大小和位置。以前人們通過核酸酶保護(hù)實(shí)驗(yàn)（見第16章）來完成這項(xiàng)工作，但現(xiàn)在基本上都使用PCR的變體，如cDNA末端快速擴(kuò)增（5RACE和3RACE，見第19章）。　?、茉隗w外無細(xì)胞系統(tǒng)對純化了的mRNA進(jìn)行翻譯。這樣得到的多肽，可進(jìn)一步用于免疫沉演或Western雜交分析。體外翻譯至少代表了一種對特殊轉(zhuǎn)錄物鑒定的方法（由于提供了翻譯所需的模板等原材料，因此可以證明某個(gè)只是推定了屬性的轉(zhuǎn)錄物是否是能夠支持預(yù)期序列多肽的合成）。

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