現(xiàn)代毒理學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)原理與方法

內(nèi)容概要

　　本書旨在介紹現(xiàn)代毒理學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)的基本原理、操作方法、最新進(jìn)展以及這些實(shí)驗(yàn)技術(shù)的具體應(yīng)用。全書共分十五章，介紹和總結(jié)了離體器官灌流、細(xì)胞毒理學(xué)、組織學(xué)、細(xì)胞凋亡、蛋白質(zhì)的分離與功能測(cè)定、亞細(xì)胞組分的分離制備、分子毒理學(xué)、信號(hào)傳遞與細(xì)胞通訊、免疫毒理學(xué)、行為毒理學(xué)、毒理學(xué)指標(biāo)的統(tǒng)計(jì)分析方法、毒理學(xué)實(shí)驗(yàn)室規(guī)范等多個(gè)方面的原理與常用實(shí)驗(yàn)技術(shù)。書中對(duì)一些先進(jìn)的實(shí)驗(yàn)技術(shù)如細(xì)胞凋亡、蛋白芯片、基因芯片等也進(jìn)行了較為詳盡的闡述?！　”緯晒氖露纠怼⑺幚?、衛(wèi)生、醫(yī)學(xué)及相關(guān)學(xué)科的科技人員參考，也可供高等院校相關(guān)專業(yè)師生使用。

書籍目錄

第一章離體器官的灌流技術(shù)1第一節(jié)離體肺灌流技術(shù)1一、儀器裝備1二、灌流液體1三、通氣氣體2四、操作步驟2五、毒理學(xué)應(yīng)用舉例2六 、注意事項(xiàng)3第二節(jié)離體心臟灌流技術(shù)3一、儀器裝置4二、灌流液的配制5三、心臟灌流的應(yīng)用實(shí)例6第三節(jié)離體肝臟灌流技術(shù)6一、儀器裝置7二、灌流液的配制8三、離體肝臟灌流程序8四、灌流肝臟可用性的鑒定8五、離體肝臟灌流的應(yīng)用及實(shí)例9第四節(jié)人胎盤灌流技術(shù)10一、胎盤灌流11二、結(jié)果及計(jì)算13三、鋅的體外人胎盤灌流研究15主要參考文獻(xiàn)17第二章細(xì)胞毒理學(xué)研究方法20第一節(jié)細(xì)胞培養(yǎng)20一、培養(yǎng)細(xì)胞生物學(xué)20二、細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)21三、常用幾種細(xì)胞的培養(yǎng)26第二節(jié)培養(yǎng)細(xì)胞的生物特征與檢測(cè)29一、培養(yǎng)細(xì)胞的常規(guī)觀察29二、細(xì)胞染色體分析31三、培養(yǎng)細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化35四、大鼠氣管上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn)38五、雞胚絨毛膜（抗）新生血管形成試驗(yàn)40主要參考文獻(xiàn)43第三章組織學(xué)方法45第一節(jié)光鏡和電鏡的制片技術(shù)45一、光鏡切片的制備45二、常用組織學(xué)染色法48三、電鏡超薄切片的制備51第二節(jié)酶組織化學(xué)技術(shù)53一、水解酶53二、氧化酶與過氧化物酶59三、脫氫酶和一氧化氮合酶61第三節(jié)免疫組織（細(xì)胞）化學(xué)技術(shù)63一、熒光標(biāo)記免疫組織化學(xué)法64二、酶標(biāo)記免疫組織化學(xué)法65三、金標(biāo)記免疫組織化學(xué)法69四、免疫電子顯微鏡技術(shù)71主要參考文獻(xiàn)73第四章細(xì)胞凋亡常用的研究方法74第一節(jié)概述74第二節(jié)細(xì)胞凋亡的形態(tài)學(xué)評(píng)價(jià)76一、倒置顯微鏡和光學(xué)顯微鏡觀察法76二、熒光顯微鏡觀察法77三、透射電子顯微鏡觀察79第三節(jié)細(xì)胞凋亡時(shí)質(zhì)膜的改變80一、磷脂酰絲氨酸外化分析（Annexin V聯(lián)合PI法）80二、Hoechst 33342/PI雙染色法81第四節(jié)細(xì)胞凋亡時(shí)DNA的改變81一、DNA Ladder測(cè)定81二、大分子染色體DNA片段的測(cè)定83三、凋亡細(xì)胞DNA含量的流式細(xì)胞儀分析84四、DNA片段原位標(biāo)記85五、凋亡細(xì)胞斷裂核小體DNA的免疫化學(xué)測(cè)定88第五節(jié)細(xì)胞凋亡時(shí)線粒體膜電位變化的檢測(cè)89一、線粒體跨膜電位的檢測(cè)89二、與線粒體膜電位有關(guān)的因素90第六節(jié)其他90一、Caspase?3活性的檢測(cè)90二、PARP活性的測(cè)定93三、人類凋亡相關(guān)蛋白TFAR19蛋白的表達(dá)和細(xì)胞定位分析94四、凋亡相關(guān)基因的檢測(cè)95主要參考文獻(xiàn)96第五章亞細(xì)胞組分的制備與功能檢測(cè)97第一節(jié)細(xì)胞膜的制備97一、紅細(xì)胞膜的分離與鑒定97二、肝細(xì)胞膜的分離與鑒定99三、腦突觸體膜的分離制備101第二節(jié)腎小管和小腸上皮細(xì)胞刷狀緣膜的制備102一、腎小管上皮細(xì)胞刷狀緣膜的分離與鑒定102二、小腸上皮細(xì)胞刷狀緣膜的分離與鑒定106第三節(jié)線粒體的分離制備107一、腦線粒體的分離及鑒定108二、心臟線粒體的分離制備109三、肝臟線粒體的分離制備109四、腎臟線粒體的分離制備110第四節(jié)微粒體的制備及微粒體酶系的測(cè)定110一、微粒體的分離制備110二、微粒體混合功能氧化酶系活性的測(cè)定111第五節(jié)溶酶體和過氧化氫酶體的分離制備112一、原理112二、儀器與試劑112三、分離技術(shù)113四、溶酶體純度鑒定113主要參考文獻(xiàn)114第六章蛋白質(zhì)（酶）的分離與純化116第一節(jié)蛋白質(zhì)（酶）的粗分離116一、細(xì)胞破碎和蛋白質(zhì)（酶）的溶劑提取方法116二、鹽析方法118三、有機(jī)溶劑沉淀方法121第二節(jié)蛋白質(zhì)（酶）的層析純化122一、吸附層析方法122二、離子交換層析方法122三、凝膠過濾層析方法124四、親和層析方法127五、金屬螯合層析方法130第三節(jié)電泳技術(shù)分離純化蛋白質(zhì)（酶）132一、醋酸纖維素電泳132二、聚丙烯酰胺凝膠電泳134三、雙向聚丙烯酰胺凝膠電泳136主要參考文獻(xiàn)138第七章蛋白質(zhì)（酶）的功能測(cè)定139第一節(jié)酶的功能測(cè)定139一、膽堿酯酶的活性測(cè)定　140二、O6?烷基鳥嘌呤?DNA烷基轉(zhuǎn)移酶的測(cè)定143三、超氧化物歧化酶的測(cè)定145四、細(xì)胞色素P450單加氧酶測(cè)定146五、乳酸脫氫酶同功酶測(cè)定148六、附：蛋白質(zhì)定量測(cè)定（Lowry法）149第二節(jié)蛋白質(zhì)受體功能的測(cè)定151一、受體放射分析法151二、基因重組檢測(cè)系統(tǒng)152第三節(jié)蛋白加合物測(cè)定153一、血紅蛋白加合物的測(cè)定154二、白蛋白加合物的測(cè)定155第四節(jié)蛋白質(zhì)（酶）功能研究新進(jìn)展157一、質(zhì)譜技術(shù)157二、酵母雙雜交技術(shù)158三、蛋白芯片技術(shù)159主要參考文獻(xiàn)160第八章分子毒理學(xué)基本技術(shù)162第一節(jié)核酸的印跡雜交162一、核酸雜交的基本原理——核酸的變性和復(fù)性162二、核酸雜交的重要工具——核酸探針163三、常用的核酸分子雜交技術(shù)165第二節(jié)蛋白質(zhì)印跡雜交169一、蛋白質(zhì)樣品的制備169二、SDS?聚丙烯酰胺凝膠電泳170三、蛋白質(zhì)的電轉(zhuǎn)移171四、蛋白質(zhì)的雜交172第三節(jié)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)173一、參與PCR反應(yīng)體系的因素及其作用174二、PCR反應(yīng)溫度和循環(huán)次數(shù)176三、常用的幾種PCR反應(yīng)177第四節(jié)基因的序列測(cè)定179一、雙脫氧鏈末端終止法179二、化學(xué)（裂解）法181第五節(jié)重組DNA技術(shù)181一、基因工程的重要工具——酶類182二、基因工程的重要工具——載體183三、獲得目的基因185四、目的基因與載體的連接187五、重組子導(dǎo)入受體菌189六、重組子的篩選與鑒定189七、重組體在宿主細(xì)胞中表達(dá)與調(diào)控190八、表達(dá)產(chǎn)物——蛋白質(zhì)的分離與純化193主要參考文獻(xiàn)194第九章分子毒理學(xué)技術(shù)的應(yīng)用195第一節(jié)單細(xì)胞凝膠電泳技術(shù)195一、檢測(cè)機(jī)理195二、實(shí)驗(yàn)程序及方法195三、結(jié)果評(píng)價(jià)197四、SCGE實(shí)驗(yàn)中的注意事項(xiàng)197五、SCGE在毒理學(xué)中的應(yīng)用198第二節(jié)熒光原位雜交（FISH）技術(shù)199一、基本原理199二、FISH技術(shù)的發(fā)展199三、毒理學(xué)研究中應(yīng)用的FISH技術(shù)201四、FISH技術(shù)中的注意事項(xiàng)202五、FISH操作舉例202第三節(jié)PCR?SSCP技術(shù)203一、基本原理204二、基本實(shí)驗(yàn)過程204三、影響因素205四、銀染顯色法205五、PCR?SSCP分析在毒理學(xué)中的應(yīng)用206第四節(jié)mRNA差異顯示PCR技術(shù)206一、基本原理207二、主要操作步驟及注意事項(xiàng)207三、該技術(shù)的不足之處及彌補(bǔ)辦法208四、mRNA差異顯示法在毒理學(xué)中的應(yīng)用209主要參考文獻(xiàn)209第十章基因芯片技術(shù)210第一節(jié)基因芯片的原理和合成方法210一、基因芯片的原理210二、基因芯片的離片合成法210三、基因芯片的在片合成法211四、基因芯片的基質(zhì)212五、基因芯片的微排列制作212六、基因芯片的生化反應(yīng)212七、基因芯片的結(jié)果檢測(cè)與分析213第二節(jié)基因芯片的分類213一、載體材料分類213二、點(diǎn)樣方式分類214三、DNA種類分類214四、用途分類215五、新近發(fā)展的兩種芯片技術(shù)215第三節(jié)基因芯片的廣泛應(yīng)用216一、在基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究方面的應(yīng)用216二、在藥物篩選方面的應(yīng)用217三、在指導(dǎo)用藥方面的應(yīng)用217四、在臨床診斷方面的應(yīng)用217五、在衛(wèi)生毒理學(xué)研究中的應(yīng)用217六、在其他方面的應(yīng)用219主要參考文獻(xiàn)219第十一章信號(hào)傳遞與細(xì)胞通訊220第一節(jié)細(xì)胞間縫隙連接通訊的檢測(cè)220一、劃痕標(biāo)記染料示蹤技術(shù)（SLDT）220二、顯微注射染料示蹤技術(shù)222三、代謝合作檢測(cè)法224第二節(jié)細(xì)胞膜受體的分離與純化225一、概述225二、受體溶脫226三、受體純化228第三節(jié)第二信使系統(tǒng)230一、磷脂酶A2230二、蛋白激酶C活性測(cè)定232三、環(huán)核苷酸233四、三磷酸肌醇的檢測(cè)234五、一氧化氮及合酶的測(cè)定235六、二酰甘油的測(cè)定241七、細(xì)胞內(nèi)pH值的測(cè)定243主要參考文獻(xiàn)245第十二章免疫毒理學(xué)方法246第一節(jié)B淋巴細(xì)胞功能檢測(cè)方法246一、空斑形成細(xì)胞檢測(cè)方法246二、血清溶血素測(cè)定249第二節(jié)T淋巴細(xì)胞功能檢測(cè)方法250一、小鼠外周血T淋巴細(xì)胞酸性α?醋酸萘酯酶（ANAE）染色法250二、T淋巴細(xì)胞亞群的檢測(cè)252三、T淋巴細(xì)胞增殖功能測(cè)定254四、遲發(fā)型超敏反應(yīng)試驗(yàn)256第三節(jié)巨噬細(xì)胞功能測(cè)定256一、巨噬細(xì)胞非特異性吞噬功能測(cè)定257二、巨噬細(xì)胞Fc受體功能檢測(cè)258三、腫瘤壞死因子（TNF）的測(cè)定260四、一氧化氮生成的測(cè)定261第四節(jié)中性粒細(xì)胞和NK細(xì)胞活性測(cè)定262一、中性粒細(xì)胞吞噬功能的測(cè)定262二、NK細(xì)胞活性的測(cè)定262第五節(jié)細(xì)胞因子的測(cè)定264一、白細(xì)胞介素1（IL?1）的檢測(cè)264二、白細(xì)胞介素2（IL?2）的檢測(cè)265第六節(jié)過敏反應(yīng)和自身免疫266一、皮膚致敏試驗(yàn)266二、小鼠耳腫脹試驗(yàn)268三、耳淋巴結(jié)試驗(yàn)268四、窩淋巴結(jié)實(shí)驗(yàn)269第七節(jié)宿主抵抗力試驗(yàn)270一、腫瘤細(xì)胞攻擊試驗(yàn)271二、對(duì)細(xì)菌的抵抗試驗(yàn)272三、對(duì)旋毛蟲螺旋體的抵抗試驗(yàn)274主要參考文獻(xiàn)275第十三章行為毒理學(xué)方法276第一節(jié)動(dòng)物行為評(píng)價(jià)方法276一、一般行為毒理學(xué)方法276二、行為致畸學(xué)方法279三、神經(jīng)科學(xué)的發(fā)展與行為毒理學(xué)283第二節(jié)人的行為功能評(píng)價(jià)方法289一、發(fā)展概況289二、研究方法290主要參考文獻(xiàn)292第十四章毒理學(xué)指標(biāo)的統(tǒng)計(jì)分析方法294第一節(jié)聯(lián)合作用的統(tǒng)計(jì)方法294一、比值法294二、效應(yīng)圖解法295三、等概率和曲線法295四、Logistic圖解法297第二節(jié)存活壽命表的統(tǒng)計(jì)指標(biāo)299一、存活壽命表的統(tǒng)計(jì)指標(biāo)299二、計(jì)算步驟300第三節(jié)生殖發(fā)育試驗(yàn)的統(tǒng)計(jì)指標(biāo)301一、試驗(yàn)動(dòng)物與劑量301二、生殖發(fā)育的統(tǒng)計(jì)指標(biāo)301三、數(shù)據(jù)處理和結(jié)果評(píng)價(jià)302第四節(jié)致突變?cè)囼?yàn)的統(tǒng)計(jì)指標(biāo)302一、概述302二、實(shí)例305第五節(jié)致癌試驗(yàn)的數(shù)學(xué)模式示例307一、幾項(xiàng)指標(biāo)307二、實(shí)例307第六節(jié)行為毒理學(xué)308第七節(jié)毒理學(xué)相關(guān)學(xué)科的統(tǒng)計(jì)分析指標(biāo)310一、數(shù)據(jù)類型310二、體重與器官重量311三、臨床化學(xué)312四、血液學(xué)313五、組織病理學(xué)損害的發(fā)生率314第八節(jié)樣品與染毒方式的統(tǒng)計(jì)問題315一、經(jīng)食物和空氣染毒分析315二、懸浮顆粒物統(tǒng)計(jì)量315第九節(jié)對(duì)毒理學(xué)數(shù)據(jù)處理中常見錯(cuò)誤的分析317一、統(tǒng)計(jì)學(xué)結(jié)論的描述性錯(cuò)誤318二、隨機(jī)分組不均衡318三、非參數(shù)資料不能用參數(shù)統(tǒng)計(jì)方法分析318四、配對(duì)關(guān)系318五、計(jì)量資料中方差是否整齊及計(jì)數(shù)資料中樣本是否足夠大319六、有順序關(guān)系的計(jì)數(shù)資料319七、有效數(shù)字的取舍319主要參考文獻(xiàn)320第十五章毒理學(xué)良好實(shí)驗(yàn)室規(guī)范322一、概述322二、良好實(shí)驗(yàn)室規(guī)范323三、附言326主要參考文獻(xiàn)326

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