生物化學(xué)與分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)

內(nèi)容概要

　　《“十二五”國(guó)家重點(diǎn)圖書(shū)出版規(guī)劃項(xiàng)目·中國(guó)科學(xué)技術(shù)大學(xué)精品教材：生物化學(xué)與分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)》主要內(nèi)容由學(xué)院多年使用的《生物化學(xué)與分子生物學(xué)基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)講義》及《生物化學(xué)與分子生物學(xué)高級(jí)講義》綜合選編而成。本書(shū)包括基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)和綜合實(shí)驗(yàn)兩個(gè)部分，涵蓋了生物化學(xué)與分子生物學(xué)的教學(xué)大綱的要求，從實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)、實(shí)驗(yàn)選材到實(shí)驗(yàn)操作，都經(jīng)歷過(guò)多次的教學(xué)實(shí)踐證實(shí)，很多實(shí)驗(yàn)內(nèi)容由科研成果直接轉(zhuǎn)化而來(lái)，是作者多年教學(xué)和科研經(jīng)驗(yàn)的積累。
　　《“十二五”國(guó)家重點(diǎn)圖書(shū)出版規(guī)劃項(xiàng)目·中國(guó)科學(xué)技術(shù)大學(xué)精品教材：生物化學(xué)與分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)》適合作為生命科學(xué)類專業(yè)及相關(guān)專業(yè)的本科生教材，重在基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)和基礎(chǔ)技能方面，旨在培養(yǎng)學(xué)生解決實(shí)際問(wèn)題的能力和創(chuàng)新能力，為學(xué)生日后的畢業(yè)實(shí)習(xí)和科學(xué)研究奠定堅(jiān)實(shí)的實(shí)驗(yàn)技術(shù)基礎(chǔ)。

書(shū)籍目錄

總序
前言
第一部分 基礎(chǔ)　實(shí)驗(yàn)
　實(shí)驗(yàn)一 蛋白質(zhì)的定量測(cè)定
　實(shí)驗(yàn)二 核酸的定量測(cè)定
　實(shí)驗(yàn)三 糖的定量測(cè)定
　實(shí)驗(yàn)四 不同去污劑對(duì)紅血球細(xì)胞膜的溶解作用比較
　實(shí)驗(yàn)五 凝膠過(guò)濾層析柱的裝填及柱效測(cè)定
　實(shí)驗(yàn)六 葡聚糖凝膠柱層析
　實(shí)驗(yàn)七 離子交換柱層析法分離蛋白質(zhì)
　實(shí)驗(yàn)八 硫酸銨分級(jí)沉淀法分離純化Rubisco蛋白
　實(shí)驗(yàn)九 聚丙烯酰胺凝膠電泳（Native-PAGE）分離植物過(guò)氧化物酶同工酶（活性染色法）
　實(shí)驗(yàn)十 SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS-PAGE）法測(cè)定蛋白質(zhì)的分子量
　實(shí)驗(yàn)十一 等電聚焦電泳（IEF）
　實(shí)驗(yàn)十二 雙向聚丙烯酰胺凝膠電泳（2D－PAGE）
　實(shí)驗(yàn)十三 酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法（ELISA）
　實(shí)驗(yàn)十四 蛋白質(zhì)免疫印記（Western Blotting）
　實(shí)驗(yàn)十五 交聯(lián)法（Cross-linking）鑒定蛋白質(zhì)的聚集特性
　實(shí)驗(yàn)十六 肌動(dòng)蛋白的體外聚合和共沉降
　實(shí)驗(yàn)十七 用正交法測(cè)定幾種因素對(duì)酶活力的影響
　實(shí)驗(yàn)十八 酸性磷酸酯酶動(dòng)力學(xué)性質(zhì)的分析
　實(shí)驗(yàn)十九 質(zhì)粒DNA的提取
　實(shí)驗(yàn)二十 質(zhì)粒DNA的酶切與鑒定
　實(shí)驗(yàn)二十一 PCR基因擴(kuò)增
　實(shí)驗(yàn)二十二 DNA樣品的膠回收及連接
　實(shí)驗(yàn)二十三 大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞的制備及轉(zhuǎn)化
　實(shí)驗(yàn)二十四 釀酒酵母總RNA的提取、純化與鑒定
　實(shí)驗(yàn)二十五 反轉(zhuǎn)錄PCR（RT-PCR）和實(shí)時(shí)熒光定量PCR（QRT-PCR）
第二部分 綜合　實(shí)驗(yàn)
　實(shí)驗(yàn)二十六 葡萄糖異構(gòu)酶（GI）基因的克隆、表達(dá)及GI的純化與性質(zhì)鑒定
附錄
　附錄一 　實(shí)驗(yàn)室用水常識(shí)
　附錄二 玻璃器皿的洗滌和常用洗液的配制
　附錄三 常見(jiàn)市售酸堿的濃度
　附錄四 國(guó)際相對(duì)原子質(zhì)量表（2001）
　附錄五 緩沖液的配制
　附錄六 硫酸銨飽和度常用表
　附錄七 常用分子量標(biāo)準(zhǔn)參照
　附錄八 常用核酸蛋白數(shù)據(jù)換算
　附錄九 柱層析介質(zhì)的技術(shù)參數(shù)
　附錄十 電泳相關(guān)的常用緩沖液的配制
　附錄十一 常用培養(yǎng)基
　附錄十二 常用抗生素
　附錄十三 分子生物學(xué)常用軟件
　附錄十四 學(xué)生　實(shí)驗(yàn)守則
　附錄十五 生物化學(xué)與分子生物　實(shí)驗(yàn)室安全及防護(hù)知識(shí)

章節(jié)摘錄

版權(quán)頁(yè)：   插圖：   分子大小和形狀不同的蛋白質(zhì)通過(guò)一定孔徑的分離膠時(shí)，受阻滯的程度不同而表現(xiàn)出不同的遷移率，這就是分子篩效應(yīng)。 經(jīng)上述濃縮效應(yīng)后，快、慢離子及蛋白質(zhì)均進(jìn)入pH=8.8的同一孔徑的分離膠中。此時(shí)，在均一的電壓梯度下，由于甘氨酸解離度增加，加之其分子量小，則有效泳動(dòng)率增加，趕上并超過(guò)各種蛋白。因此，各種蛋白進(jìn)入同一孔徑的小孔膠時(shí)，則分子遷移速度與分子量大小和形狀密切相關(guān)，分子量小且為球形的蛋白質(zhì)分子所受阻力小，移動(dòng)快，走在前面；反之，則阻力大，移動(dòng)慢，走在后面，從而通過(guò)凝膠的分子篩作用將各種蛋白質(zhì)分成各自的區(qū)帶。 這種分子篩效應(yīng)不同于柱層析中的分子篩效應(yīng)，后者是大分子先從凝膠顆粒間的縫隙流出，小分子后流出。 2.2.3電荷效應(yīng) 雖然各種蛋白質(zhì)在濃縮膠與分離膠界面處被高度濃縮，堆積成層，形成一狹窄的高濃度蛋白區(qū)，但進(jìn)入pH：8.8的分離膠中，各種蛋白質(zhì)所帶凈電荷不同，而呈現(xiàn)不同的遷移率，即表面電荷多，則遷移快；反之，則慢。 因此，各種蛋白質(zhì)按電荷多少、分子量及形狀，以一定順序排成一個(gè)個(gè)條型的區(qū)帶，從而達(dá)到分離的目的。 目前，PAGE不連續(xù)體系因具有高的分辨率，應(yīng)用非常廣；而PAGE連續(xù)體系雖然電泳過(guò)程中無(wú)濃縮效應(yīng)，但利用分子篩及電荷效應(yīng)也可使樣品得到較好的分離，加之在溫和的pH條件下，不致使蛋白質(zhì)、酶、核酸等活性物質(zhì)變性失活，也具備有一定的優(yōu)越性，多用于研究核酸與其結(jié)合蛋白（酶）之間的相互作用。 2.3植物過(guò)氧化物酶同工酶的測(cè)定原理 2.3.1植物同工酶 生物體內(nèi)，凡能催化同一種化學(xué)反應(yīng)，但其分子結(jié)構(gòu)不同的一組酶稱之為同工酶（isoenzvme）。同工酶是基因表達(dá)的產(chǎn)物，每一種生物都有相同的遺傳信息，其表達(dá)產(chǎn)物與某一生物的發(fā)育和所處的環(huán)境有十分密切的關(guān)系，同工酶譜的差異同樣是基因表達(dá)的差異造成的。植物不同組織和器官有著不同的形態(tài)特征和化學(xué)組成，從而合成不同的酶蛋白，而植物體內(nèi)的許多生理代謝過(guò)程又常與同工酶的活性及其種類有關(guān)。在研究植物基因調(diào)控與生長(zhǎng)發(fā)育、環(huán)境條件的關(guān)系以及許多生理生化和遺傳問(wèn)題時(shí)，常常需要分析同工酶譜的差異。因此，同工酶的研究在理論和實(shí)踐中都有非常重要的意義。

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《中國(guó)科學(xué)技術(shù)大學(xué)精品教材:生物化學(xué)與分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)》適合作為生命科學(xué)類專業(yè)及相關(guān)專業(yè)的本科生教材，重在基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)和基礎(chǔ)技能方面，旨在培養(yǎng)學(xué)生解決實(shí)際問(wèn)題的能力和創(chuàng)新能力，為學(xué)生日后的畢業(yè)實(shí)習(xí)和科學(xué)研究奠定堅(jiān)實(shí)的實(shí)驗(yàn)技術(shù)基礎(chǔ)。

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