生物化學(xué)與分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)

前言

培養(yǎng)大學(xué)生的創(chuàng)新實(shí)踐能力已成為當(dāng)前我國(guó)高等教育教學(xué)改革的核心目標(biāo)之一。也是促進(jìn)我國(guó)高等教育可持續(xù)發(fā)展的不竭動(dòng)力。21世紀(jì)是生命科學(xué)發(fā)展的重要時(shí)機(jī)，研究成果日新月異。生物化學(xué)與分子生物學(xué)研究方法和實(shí)驗(yàn)技術(shù)已經(jīng)成為生命科學(xué)各領(lǐng)域的重要工具，該課程作為我國(guó)生物科學(xué)、生物技術(shù)、生物工程及其他相關(guān)專業(yè)學(xué)生必修的一門重要基礎(chǔ)課，在訓(xùn)練學(xué)生的基本技能、培養(yǎng)動(dòng)手能力和創(chuàng)新能力等方面起著重要的作用。在高校，創(chuàng)新的源頭在實(shí)驗(yàn)室.我們迫切需要能夠體現(xiàn)新知識(shí)體系的教材作為實(shí)驗(yàn)教學(xué)的載體。本書就是在這樣的時(shí)代背景和強(qiáng)烈責(zé)任感的沖擊下編寫完成的。本教材按144學(xué)時(shí)編寫，分3個(gè)學(xué)期完成。根據(jù)生物化學(xué)與分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)從易到難的順序，分為四篇十三章，將四十七個(gè)有代表性的實(shí)驗(yàn)按技術(shù)難度等級(jí)分列于第二篇和第三篇中。第一篇為基本技能訓(xùn)練，下設(shè)七章，主要介紹了生物化學(xué)與分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的基本知識(shí)與基本操作。第二篇是生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)，分三章，包括生物化學(xué)基礎(chǔ)、強(qiáng)化、綜合共三十六個(gè)實(shí)驗(yàn).第一學(xué)期完成其中的基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)與強(qiáng)化實(shí)驗(yàn)，第二學(xué)期完成綜合實(shí)驗(yàn)。第三篇是分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)，第三學(xué)期完成，內(nèi)容分二章，包括基礎(chǔ)和綜合共十一個(gè)實(shí)驗(yàn)。第四篇中設(shè)計(jì)了二十一個(gè)創(chuàng)新項(xiàng)目.可作為課外創(chuàng)新訓(xùn)練題材自由選做。最后的附錄中收錄了常用儀器的使用方法、常用緩沖溶液的配制、一些數(shù)據(jù)表等。全書內(nèi)容設(shè)置包括對(duì)糖、脂質(zhì)、氨基酸、蛋白質(zhì)、酶、維生素、核酸、激素等生命大分子的研究，還包括物質(zhì)代謝與生物氧化實(shí)驗(yàn)，在綜合實(shí)驗(yàn)和創(chuàng)新項(xiàng)目方面均得到充實(shí)和加強(qiáng)。實(shí)驗(yàn)方法涵蓋滴定、蒸餾、離心、分光光度比色、薄層層析、凝膠層析、離子交換層析、親和層析、氣相色譜、高效液相色譜、電泳、熒光、旋光法、質(zhì)粒DNA的提取、酶切、鑒定、基因芯片鑒定、DNA雜交、重組和轉(zhuǎn)化、PCR、RAPD等技術(shù)。選編的實(shí)驗(yàn)代表性強(qiáng)，除了對(duì)一些經(jīng)典實(shí)驗(yàn)中的某些步驟有創(chuàng)新外，其中“卵磷脂的制備及氣相色譜分析”、“高效液相色譜法測(cè)定雌激素含量”和“旋光法測(cè)定淀粉含量”三個(gè)實(shí)驗(yàn)是編者根據(jù)多年教學(xué)科研工作積累編著的，填補(bǔ)了這些教學(xué)內(nèi)容的空白。全書從學(xué)習(xí)該課程的基本技能訓(xùn)練入手，以培養(yǎng)學(xué)生掌握基本的研究手段，強(qiáng)化提高其綜合運(yùn)用.最后能獨(dú)立完成創(chuàng)新課題為主線，將生物化學(xué)與分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)原理和技術(shù)方法直接融入到具體的實(shí)驗(yàn)之中，不作單獨(dú)闡述，這樣既便于學(xué)生掌握，又避免了理論與實(shí)際相脫離的弊端。本書是對(duì)同類教材的繼承和發(fā)展，力求廣度和深度有所突破。

內(nèi)容概要

　　《生物化學(xué)與分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)》按144學(xué)時(shí)編寫，分3個(gè)學(xué)期完成。根據(jù)生物化學(xué)與分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)從易到難的順序，分為四篇十三章，將四十七個(gè)有代表性的實(shí)驗(yàn)按技術(shù)難度等級(jí)分列于第二篇和第三篇中。第一篇為基本技能訓(xùn)練，下設(shè)七章，主要介紹了生物化學(xué)與分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的基本知識(shí)與基本操作。第二篇是生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)，分三章，包括生物化學(xué)基礎(chǔ)、強(qiáng)化、綜合共三十六個(gè)實(shí)驗(yàn).第一學(xué)期完成其中的基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)與強(qiáng)化實(shí)驗(yàn)，第二學(xué)期完成綜合實(shí)驗(yàn)。第三篇是分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)，第三學(xué)期完成，內(nèi)容分二章，包括基礎(chǔ)和綜合共十一個(gè)實(shí)驗(yàn)。

書籍目錄

第一篇 基本技能訓(xùn)練第一章 實(shí)驗(yàn)室規(guī)則一、學(xué)生實(shí)驗(yàn)守則二、實(shí)驗(yàn)室安全防護(hù)知識(shí)三、實(shí)驗(yàn)室滅火法第二章 玻璃儀器的洗滌一、生物化學(xué)與分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)常用玻璃儀器二、實(shí)驗(yàn)室常用的洗滌方法三、常用玻璃儀器的洗滌四、玻璃器皿的干燥第三章 常用容量器的正確使用一、吸管二、微量移液器三、容量瓶四、滴定管五、量筒第四章 試劑的配制一、溶液濃度的表示及配制二、溶液濃度的調(diào)整三、試劑配制中的注意事項(xiàng)第五章 制備生命大分子物質(zhì)的基本操作一、實(shí)驗(yàn)材料的選擇和處理二、細(xì)胞的破碎三、有效成分的提取四、振蕩與攪拌五、離心六、沉淀的過濾與洗滌七、生命大分子物質(zhì)的濃縮八、生命大分子物質(zhì)的冷凍干燥第六章 實(shí)驗(yàn)誤差和數(shù)據(jù)處理一、實(shí)驗(yàn)誤差二、數(shù)據(jù)處理第七章 實(shí)驗(yàn)記錄、實(shí)驗(yàn)報(bào)告及考評(píng)方式一、實(shí)驗(yàn)記錄二、實(shí)驗(yàn)報(bào)告三、考核方式與評(píng)分方法第二篇 生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)第八章 生物化學(xué)基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)一 硅膠G薄層層析法分離鑒定糖類實(shí)驗(yàn)二植物水溶性總糖的提取和含量測(cè)定(蒽酮比色法)實(shí)驗(yàn)三 脂肪碘值的測(cè)定實(shí)驗(yàn)四 磷硫鐵法測(cè)定血清總膽固醇含量實(shí)驗(yàn)五 甲醛滴定法測(cè)定氨基氮實(shí)驗(yàn)六 紙層析法分離鑒定氨基酸實(shí)驗(yàn)七 蛋白質(zhì)兩性性質(zhì)與等電點(diǎn)的測(cè)定實(shí)驗(yàn)八 蛋白質(zhì)的沉淀、變性反應(yīng)實(shí)驗(yàn)九 蛋白質(zhì)含量的測(cè)定(雙縮脲法)實(shí)驗(yàn)十 蛋白質(zhì)含量的測(cè)定(F0lin一酚法)實(shí)驗(yàn)十一 蛋白質(zhì)含量的測(cè)定(考馬斯亮藍(lán)法)實(shí)驗(yàn)十二 酶的特異性實(shí)驗(yàn)十三 酶促反應(yīng)動(dòng)力學(xué)實(shí)驗(yàn)十四 動(dòng)物肝臟DNA的提取實(shí)驗(yàn)十五 二苯胺定糖法測(cè)定DNA含量實(shí)驗(yàn)十六 定磷法測(cè)定RNA含量實(shí)驗(yàn)十七 2，6一二氯酚靛酚法測(cè)定維生素C含量第九章 生物化學(xué)強(qiáng)化實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)十八 3，5一二硝基水楊酸比色定糖法實(shí)驗(yàn)十九 粗脂肪的提取及含量的測(cè)定實(shí)驗(yàn)二十 酪蛋白的制備及含量的測(cè)定實(shí)驗(yàn)二十一 蛋白質(zhì)含量的測(cè)定(微量凱氏定氮法)實(shí)驗(yàn)二十二 血清蛋白醋酸纖維素薄膜電泳實(shí)驗(yàn)二十三 蛋白質(zhì)的分級(jí)鹽析及凝膠過濾法脫鹽實(shí)驗(yàn)二十四 瓊脂糖凝膠電泳分離乳酸脫氫酶同功酶實(shí)驗(yàn)二十五 薄層層析法鑒定轉(zhuǎn)氨酶的轉(zhuǎn)氨基作用實(shí)驗(yàn)二十六 熒光分光光度法測(cè)定維生素B：的含量第十章 生物化學(xué)綜合實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)二十七 卵磷脂的制備及氣相色譜分析實(shí)驗(yàn)二十八 大豆蛋白的提取、含量測(cè)定及氨基酸組成分析實(shí)驗(yàn)二十九 雞卵類粘蛋白的分離與純化實(shí)驗(yàn)三十 細(xì)胞色素C的制備及測(cè)定實(shí)驗(yàn)三十一 SDS-PAGE測(cè)定蛋白質(zhì)相對(duì)分子質(zhì)量實(shí)驗(yàn)三十二 凝膠過濾層析法測(cè)定蛋白質(zhì)相對(duì)分子質(zhì)量實(shí)驗(yàn)三十三 親和層析法純化胰蛋白酶實(shí)驗(yàn)三十四 高效液相色譜法測(cè)定雌激素含量實(shí)驗(yàn)三十五 離子交換柱層析分離核苷酸實(shí)驗(yàn)三十六 旋光法測(cè)定淀粉含量第三篇 分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)第十一章 分子生物學(xué)基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)一 堿變性法提取質(zhì)粒DNA及純化實(shí)驗(yàn)二 質(zhì)粒DNA的限制內(nèi)切酶酶切及瓊脂糖凝膠電泳分析實(shí)驗(yàn)三 脈沖電泳技術(shù)實(shí)驗(yàn)四 A噬菌體感染與效價(jià)測(cè)定實(shí)驗(yàn)五 提取純化大腸桿菌基因組DNA實(shí)驗(yàn)六 哺乳動(dòng)物mRNA的分離及純化第十二章 分子生物學(xué)綜合實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)七 Western Blotting實(shí)驗(yàn)八 DNA重組和轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)九 大腸細(xì)菌的基因芯片鑒定實(shí)驗(yàn)十 DNA的Southern雜交實(shí)驗(yàn)十一 生物系統(tǒng)學(xué)研究中的RAPD技術(shù)第四篇 創(chuàng)新設(shè)計(jì)項(xiàng)目第十三章 生物化學(xué)與分子生物學(xué)創(chuàng)新設(shè)計(jì)項(xiàng)目一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康亩?、基本要求三、結(jié)果處理四、選題范圍附錄一、生物化學(xué)與分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)常用儀器的使用方法(一)分光光度計(jì)(二)離心機(jī)(三)電泳儀(四)PCR儀(五)凝膠成像系統(tǒng)(六)恒溫水浴鍋(七)酸度計(jì)(八)恒溫振蕩培養(yǎng)箱(九)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(十)高效液相色譜儀(十一)核酸蛋白檢測(cè)系統(tǒng)(十二)超凈工作臺(tái)(十三)高壓滅菌鍋二、常用緩沖溶液的配制(一)甘氨酸一鹽酸緩沖液(二)氯化鉀一鹽酸緩沖液(三)鄰苯二甲酸氫鉀一鹽酸緩沖液(四)醋酸一醋酸鈉緩沖液(五)鄰苯二甲酸氫鉀一氫氧化鈉緩沖液(六)檸檬酸一檸檬酸鈉緩沖液(七)磷酸二氫鉀一氫氧化鈉緩沖液(八)磷酸氫二鈉一檸檬酸緩沖液(九)磷酸氫二鈉一磷酸二氫鈉緩沖液(十)巴比妥一鹽酸緩沖液(十一)Tris一鹽酸緩沖液(十二)硼酸一硼砂緩沖液(十三)硼砂緩沖液(十四)甘氨酸一氫氧化鈉緩沖液(十五)碳酸鈉一碳酸氫鈉緩沖液(十六)酸度計(jì)常用標(biāo)準(zhǔn)緩沖溶液的配制三、層析法常用數(shù)據(jù)表(一)凝膠過濾用相對(duì)分子質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)品(二)瓊脂糖凝膠技術(shù)數(shù)據(jù)(三)SephadexG型交聯(lián)葡聚糖凝膠的數(shù)據(jù)(四)SephadexG型交聯(lián)葡聚糖凝膠溶脹所需時(shí)間(五)聚丙烯酰胺凝膠技術(shù)數(shù)據(jù)(六)層析介質(zhì)的選擇(七)薄層層析分離各類物質(zhì)常用的展層溶劑四、硫酸銨飽和度常用表(一)不同溫度下飽和硫酸銨溶液的數(shù)據(jù)(二)調(diào)整硫酸銨溶液飽和度計(jì)算表(0℃)(三)調(diào)整硫酸銨溶液飽和度計(jì)算表(25℃)五、細(xì)菌培養(yǎng)基、抗生素(一)LB培養(yǎng)基配制方法(二)NZCYM培養(yǎng)基配制方法(三)NZYM培養(yǎng)基配制方法(四)高濃度肉湯配制方法(五)SOB培養(yǎng)基配制方法(六)M9培養(yǎng)基(七)2×YT培養(yǎng)基(八)固體培養(yǎng)基(九)常用抗生素溶液

章節(jié)摘錄

插圖：（一）滴定管使用前的準(zhǔn)備1.檢查試漏滴定管洗凈后，先檢查旋塞轉(zhuǎn)動(dòng)是否靈活，是否漏水。關(guān)閉旋塞，將滴定管充滿水，用濾紙?jiān)谛車凸芗馓帣z查。然后將旋塞旋轉(zhuǎn)180度，直立2min，再用濾紙檢查。如果漏水，酸式管涂凡士林；堿式滴定管使用前應(yīng)先檢查橡皮管是否老化，檢查玻璃珠大小是否適當(dāng)，若有問題，應(yīng)及時(shí)更換。2.潤(rùn)洗滴定管在使用前還必須用操作溶液潤(rùn)洗3次，每次10～15mL。潤(rùn)洗液棄去。3.裝液排氣泡洗滌后再將操作溶液注入至零線以上，檢查活塞周圍是否有氣泡。若有，開大酸式滴定管的活塞使溶液沖出，排出氣泡。堿式滴定管排氣泡的方法是將堿式滴定管管體豎直，左手拇指捏住玻璃珠，使橡膠管彎曲，管尖斜向上約45度，擠壓玻璃珠處膠管，使溶液沖出，以排出氣泡。滴定劑的裝入必須直接注入，不能使用漏斗或其他器皿輔助。4.讀初讀數(shù)放出溶液后（裝滿或滴定完后）需等待1～2rain后方可讀數(shù)。讀數(shù)時(shí)，視線與彎月面最低點(diǎn)刻度水平線相切。視線若在彎月面上方，讀數(shù)就會(huì)偏高；若在彎月面下方，讀數(shù)就會(huì)偏低。若為有色溶液，其彎月面不夠清晰，則讀取液面最高點(diǎn)。一般初讀數(shù)為0.00Ml或0～1mL之間的任一刻度，以減小體積誤差。有的滴定管背面有一條藍(lán)帶，稱為藍(lán)帶滴定管。藍(lán)帶滴定管的讀數(shù)與普通滴定管類似，當(dāng)藍(lán)帶滴定管盛溶液后將有兩個(gè)彎月面相交，此交點(diǎn)的位置即為藍(lán)帶滴定管的讀數(shù)位置。（二）滴定1.滴定操作將滴定管垂直地夾在滴定管夾上，滴定管離錐形瓶口約1Cm，用左手控制旋塞，拇指在前，食指、中指在后，無(wú)名指和小指彎曲在滴定管和旋塞下方之間的直角中。轉(zhuǎn)動(dòng)旋塞時(shí)，手指彎曲，手掌要空。右手三指拿住瓶頸，瓶底離臺(tái)約2～3cm，滴定管下端伸入瓶口約1em，微動(dòng)右手腕關(guān)節(jié)搖動(dòng)錐形瓶，邊滴邊搖使滴下的溶液混合均勻。搖動(dòng)錐形瓶的規(guī)范方式為：右手執(zhí)錐形瓶頸部。手腕用力使瓶底沿順時(shí)針方向畫圓，要求使溶液在錐形瓶?jī)?nèi)均勻旋轉(zhuǎn)，形成漩渦，溶液不能有跳動(dòng)。管口與錐形瓶應(yīng)無(wú)接觸。堿式滴定管操作方法：滴定時(shí)，以左手握住滴定管，拇指在前，食指在后，用其他指頭輔助固定管尖。用拇指和食指捏住玻璃珠所在部位，向前擠壓膠管，使玻璃珠偏向手心，溶液就可以從空隙中流出。

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《生物化學(xué)與分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)》是由蘭州大學(xué)出版社出版的。

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