生物化學(xué)與分子生物學(xué)實驗

前言

培養(yǎng)大學(xué)生的創(chuàng)新實踐能力已成為當(dāng)前我國高等教育教學(xué)改革的核心目標之一。也是促進我國高等教育可持續(xù)發(fā)展的不竭動力。21世紀是生命科學(xué)發(fā)展的重要時機，研究成果日新月異。生物化學(xué)與分子生物學(xué)研究方法和實驗技術(shù)已經(jīng)成為生命科學(xué)各領(lǐng)域的重要工具，該課程作為我國生物科學(xué)、生物技術(shù)、生物工程及其他相關(guān)專業(yè)學(xué)生必修的一門重要基礎(chǔ)課，在訓(xùn)練學(xué)生的基本技能、培養(yǎng)動手能力和創(chuàng)新能力等方面起著重要的作用。在高校，創(chuàng)新的源頭在實驗室.我們迫切需要能夠體現(xiàn)新知識體系的教材作為實驗教學(xué)的載體。本書就是在這樣的時代背景和強烈責(zé)任感的沖擊下編寫完成的。本教材按144學(xué)時編寫，分3個學(xué)期完成。根據(jù)生物化學(xué)與分子生物學(xué)實驗技術(shù)從易到難的順序，分為四篇十三章，將四十七個有代表性的實驗按技術(shù)難度等級分列于第二篇和第三篇中。第一篇為基本技能訓(xùn)練，下設(shè)七章，主要介紹了生物化學(xué)與分子生物學(xué)實驗的基本知識與基本操作。第二篇是生物化學(xué)實驗，分三章，包括生物化學(xué)基礎(chǔ)、強化、綜合共三十六個實驗.第一學(xué)期完成其中的基礎(chǔ)實驗與強化實驗，第二學(xué)期完成綜合實驗。第三篇是分子生物學(xué)實驗，第三學(xué)期完成，內(nèi)容分二章，包括基礎(chǔ)和綜合共十一個實驗。第四篇中設(shè)計了二十一個創(chuàng)新項目.可作為課外創(chuàng)新訓(xùn)練題材自由選做。最后的附錄中收錄了常用儀器的使用方法、常用緩沖溶液的配制、一些數(shù)據(jù)表等。全書內(nèi)容設(shè)置包括對糖、脂質(zhì)、氨基酸、蛋白質(zhì)、酶、維生素、核酸、激素等生命大分子的研究，還包括物質(zhì)代謝與生物氧化實驗，在綜合實驗和創(chuàng)新項目方面均得到充實和加強。實驗方法涵蓋滴定、蒸餾、離心、分光光度比色、薄層層析、凝膠層析、離子交換層析、親和層析、氣相色譜、高效液相色譜、電泳、熒光、旋光法、質(zhì)粒DNA的提取、酶切、鑒定、基因芯片鑒定、DNA雜交、重組和轉(zhuǎn)化、PCR、RAPD等技術(shù)。選編的實驗代表性強，除了對一些經(jīng)典實驗中的某些步驟有創(chuàng)新外，其中“卵磷脂的制備及氣相色譜分析”、“高效液相色譜法測定雌激素含量”和“旋光法測定淀粉含量”三個實驗是編者根據(jù)多年教學(xué)科研工作積累編著的，填補了這些教學(xué)內(nèi)容的空白。全書從學(xué)習(xí)該課程的基本技能訓(xùn)練入手，以培養(yǎng)學(xué)生掌握基本的研究手段，強化提高其綜合運用.最后能獨立完成創(chuàng)新課題為主線，將生物化學(xué)與分子生物學(xué)實驗原理和技術(shù)方法直接融入到具體的實驗之中，不作單獨闡述，這樣既便于學(xué)生掌握，又避免了理論與實際相脫離的弊端。本書是對同類教材的繼承和發(fā)展，力求廣度和深度有所突破。

內(nèi)容概要

　　《生物化學(xué)與分子生物學(xué)實驗》按144學(xué)時編寫，分3個學(xué)期完成。根據(jù)生物化學(xué)與分子生物學(xué)實驗技術(shù)從易到難的順序，分為四篇十三章，將四十七個有代表性的實驗按技術(shù)難度等級分列于第二篇和第三篇中。第一篇為基本技能訓(xùn)練，下設(shè)七章，主要介紹了生物化學(xué)與分子生物學(xué)實驗的基本知識與基本操作。第二篇是生物化學(xué)實驗，分三章，包括生物化學(xué)基礎(chǔ)、強化、綜合共三十六個實驗.第一學(xué)期完成其中的基礎(chǔ)實驗與強化實驗，第二學(xué)期完成綜合實驗。第三篇是分子生物學(xué)實驗，第三學(xué)期完成，內(nèi)容分二章，包括基礎(chǔ)和綜合共十一個實驗。

書籍目錄

第一篇 基本技能訓(xùn)練第一章 實驗室規(guī)則一、學(xué)生實驗守則二、實驗室安全防護知識三、實驗室滅火法第二章 玻璃儀器的洗滌一、生物化學(xué)與分子生物學(xué)實驗常用玻璃儀器二、實驗室常用的洗滌方法三、常用玻璃儀器的洗滌四、玻璃器皿的干燥第三章 常用容量器的正確使用一、吸管二、微量移液器三、容量瓶四、滴定管五、量筒第四章 試劑的配制一、溶液濃度的表示及配制二、溶液濃度的調(diào)整三、試劑配制中的注意事項第五章 制備生命大分子物質(zhì)的基本操作一、實驗材料的選擇和處理二、細胞的破碎三、有效成分的提取四、振蕩與攪拌五、離心六、沉淀的過濾與洗滌七、生命大分子物質(zhì)的濃縮八、生命大分子物質(zhì)的冷凍干燥第六章 實驗誤差和數(shù)據(jù)處理一、實驗誤差二、數(shù)據(jù)處理第七章 實驗記錄、實驗報告及考評方式一、實驗記錄二、實驗報告三、考核方式與評分方法第二篇 生物化學(xué)實驗第八章 生物化學(xué)基礎(chǔ)實驗實驗一 硅膠G薄層層析法分離鑒定糖類實驗二植物水溶性總糖的提取和含量測定(蒽酮比色法)實驗三 脂肪碘值的測定實驗四 磷硫鐵法測定血清總膽固醇含量實驗五 甲醛滴定法測定氨基氮實驗六 紙層析法分離鑒定氨基酸實驗七 蛋白質(zhì)兩性性質(zhì)與等電點的測定實驗八 蛋白質(zhì)的沉淀、變性反應(yīng)實驗九 蛋白質(zhì)含量的測定(雙縮脲法)實驗十 蛋白質(zhì)含量的測定(F0lin一酚法)實驗十一 蛋白質(zhì)含量的測定(考馬斯亮藍法)實驗十二 酶的特異性實驗十三 酶促反應(yīng)動力學(xué)實驗十四 動物肝臟DNA的提取實驗十五 二苯胺定糖法測定DNA含量實驗十六 定磷法測定RNA含量實驗十七 2，6一二氯酚靛酚法測定維生素C含量第九章 生物化學(xué)強化實驗實驗十八 3，5一二硝基水楊酸比色定糖法實驗十九 粗脂肪的提取及含量的測定實驗二十 酪蛋白的制備及含量的測定實驗二十一 蛋白質(zhì)含量的測定(微量凱氏定氮法)實驗二十二 血清蛋白醋酸纖維素薄膜電泳實驗二十三 蛋白質(zhì)的分級鹽析及凝膠過濾法脫鹽實驗二十四 瓊脂糖凝膠電泳分離乳酸脫氫酶同功酶實驗二十五 薄層層析法鑒定轉(zhuǎn)氨酶的轉(zhuǎn)氨基作用實驗二十六 熒光分光光度法測定維生素B：的含量第十章 生物化學(xué)綜合實驗實驗二十七 卵磷脂的制備及氣相色譜分析實驗二十八 大豆蛋白的提取、含量測定及氨基酸組成分析實驗二十九 雞卵類粘蛋白的分離與純化實驗三十 細胞色素C的制備及測定實驗三十一 SDS-PAGE測定蛋白質(zhì)相對分子質(zhì)量實驗三十二 凝膠過濾層析法測定蛋白質(zhì)相對分子質(zhì)量實驗三十三 親和層析法純化胰蛋白酶實驗三十四 高效液相色譜法測定雌激素含量實驗三十五 離子交換柱層析分離核苷酸實驗三十六 旋光法測定淀粉含量第三篇 分子生物學(xué)實驗第十一章 分子生物學(xué)基礎(chǔ)實驗實驗一 堿變性法提取質(zhì)粒DNA及純化實驗二 質(zhì)粒DNA的限制內(nèi)切酶酶切及瓊脂糖凝膠電泳分析實驗三 脈沖電泳技術(shù)實驗四 A噬菌體感染與效價測定實驗五 提取純化大腸桿菌基因組DNA實驗六 哺乳動物mRNA的分離及純化第十二章 分子生物學(xué)綜合實驗實驗七 Western Blotting實驗八 DNA重組和轉(zhuǎn)化實驗九 大腸細菌的基因芯片鑒定實驗十 DNA的Southern雜交實驗十一 生物系統(tǒng)學(xué)研究中的RAPD技術(shù)第四篇 創(chuàng)新設(shè)計項目第十三章 生物化學(xué)與分子生物學(xué)創(chuàng)新設(shè)計項目一、實驗?zāi)康亩?、基本要求三、結(jié)果處理四、選題范圍附錄一、生物化學(xué)與分子生物學(xué)實驗常用儀器的使用方法(一)分光光度計(二)離心機(三)電泳儀(四)PCR儀(五)凝膠成像系統(tǒng)(六)恒溫水浴鍋(七)酸度計(八)恒溫振蕩培養(yǎng)箱(九)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(十)高效液相色譜儀(十一)核酸蛋白檢測系統(tǒng)(十二)超凈工作臺(十三)高壓滅菌鍋二、常用緩沖溶液的配制(一)甘氨酸一鹽酸緩沖液(二)氯化鉀一鹽酸緩沖液(三)鄰苯二甲酸氫鉀一鹽酸緩沖液(四)醋酸一醋酸鈉緩沖液(五)鄰苯二甲酸氫鉀一氫氧化鈉緩沖液(六)檸檬酸一檸檬酸鈉緩沖液(七)磷酸二氫鉀一氫氧化鈉緩沖液(八)磷酸氫二鈉一檸檬酸緩沖液(九)磷酸氫二鈉一磷酸二氫鈉緩沖液(十)巴比妥一鹽酸緩沖液(十一)Tris一鹽酸緩沖液(十二)硼酸一硼砂緩沖液(十三)硼砂緩沖液(十四)甘氨酸一氫氧化鈉緩沖液(十五)碳酸鈉一碳酸氫鈉緩沖液(十六)酸度計常用標準緩沖溶液的配制三、層析法常用數(shù)據(jù)表(一)凝膠過濾用相對分子質(zhì)量標準品(二)瓊脂糖凝膠技術(shù)數(shù)據(jù)(三)SephadexG型交聯(lián)葡聚糖凝膠的數(shù)據(jù)(四)SephadexG型交聯(lián)葡聚糖凝膠溶脹所需時間(五)聚丙烯酰胺凝膠技術(shù)數(shù)據(jù)(六)層析介質(zhì)的選擇(七)薄層層析分離各類物質(zhì)常用的展層溶劑四、硫酸銨飽和度常用表(一)不同溫度下飽和硫酸銨溶液的數(shù)據(jù)(二)調(diào)整硫酸銨溶液飽和度計算表(0℃)(三)調(diào)整硫酸銨溶液飽和度計算表(25℃)五、細菌培養(yǎng)基、抗生素(一)LB培養(yǎng)基配制方法(二)NZCYM培養(yǎng)基配制方法(三)NZYM培養(yǎng)基配制方法(四)高濃度肉湯配制方法(五)SOB培養(yǎng)基配制方法(六)M9培養(yǎng)基(七)2×YT培養(yǎng)基(八)固體培養(yǎng)基(九)常用抗生素溶液

章節(jié)摘錄

插圖：（一）滴定管使用前的準備1.檢查試漏滴定管洗凈后，先檢查旋塞轉(zhuǎn)動是否靈活，是否漏水。關(guān)閉旋塞，將滴定管充滿水，用濾紙在旋塞周圍和管尖處檢查。然后將旋塞旋轉(zhuǎn)180度，直立2min，再用濾紙檢查。如果漏水，酸式管涂凡士林；堿式滴定管使用前應(yīng)先檢查橡皮管是否老化，檢查玻璃珠大小是否適當(dāng)，若有問題，應(yīng)及時更換。2.潤洗滴定管在使用前還必須用操作溶液潤洗3次，每次10～15mL。潤洗液棄去。3.裝液排氣泡洗滌后再將操作溶液注入至零線以上，檢查活塞周圍是否有氣泡。若有，開大酸式滴定管的活塞使溶液沖出，排出氣泡。堿式滴定管排氣泡的方法是將堿式滴定管管體豎直，左手拇指捏住玻璃珠，使橡膠管彎曲，管尖斜向上約45度，擠壓玻璃珠處膠管，使溶液沖出，以排出氣泡。滴定劑的裝入必須直接注入，不能使用漏斗或其他器皿輔助。4.讀初讀數(shù)放出溶液后（裝滿或滴定完后）需等待1～2rain后方可讀數(shù)。讀數(shù)時，視線與彎月面最低點刻度水平線相切。視線若在彎月面上方，讀數(shù)就會偏高；若在彎月面下方，讀數(shù)就會偏低。若為有色溶液，其彎月面不夠清晰，則讀取液面最高點。一般初讀數(shù)為0.00Ml或0～1mL之間的任一刻度，以減小體積誤差。有的滴定管背面有一條藍帶，稱為藍帶滴定管。藍帶滴定管的讀數(shù)與普通滴定管類似，當(dāng)藍帶滴定管盛溶液后將有兩個彎月面相交，此交點的位置即為藍帶滴定管的讀數(shù)位置。（二）滴定1.滴定操作將滴定管垂直地夾在滴定管夾上，滴定管離錐形瓶口約1Cm，用左手控制旋塞，拇指在前，食指、中指在后，無名指和小指彎曲在滴定管和旋塞下方之間的直角中。轉(zhuǎn)動旋塞時，手指彎曲，手掌要空。右手三指拿住瓶頸，瓶底離臺約2～3cm，滴定管下端伸入瓶口約1em，微動右手腕關(guān)節(jié)搖動錐形瓶，邊滴邊搖使滴下的溶液混合均勻。搖動錐形瓶的規(guī)范方式為：右手執(zhí)錐形瓶頸部。手腕用力使瓶底沿順時針方向畫圓，要求使溶液在錐形瓶內(nèi)均勻旋轉(zhuǎn)，形成漩渦，溶液不能有跳動。管口與錐形瓶應(yīng)無接觸。堿式滴定管操作方法：滴定時，以左手握住滴定管，拇指在前，食指在后，用其他指頭輔助固定管尖。用拇指和食指捏住玻璃珠所在部位，向前擠壓膠管，使玻璃珠偏向手心，溶液就可以從空隙中流出。

編輯推薦

《生物化學(xué)與分子生物學(xué)實驗》是由蘭州大學(xué)出版社出版的。

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