醫(yī)學(xué)微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)

內(nèi)容概要

本書根據(jù)醫(yī)藥院校本、專科生醫(yī)學(xué)微生物學(xué)的教學(xué)要求，遵循適用性、科學(xué)性、先進(jìn)性和啟發(fā)展的原則，從實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、材料、方法、結(jié)果分析及思考題等方面入物，較為系統(tǒng)和較為全面地介紹了醫(yī)學(xué)微生物學(xué)的基本實(shí)驗(yàn)技術(shù)，主要包括各類病原微生物的形態(tài)與結(jié)構(gòu)檢查方法，常見病原微生物的分離培養(yǎng)與鑒定，細(xì)菌代謝產(chǎn)物和致病性的檢測(cè)，消毒與滅菌，變異現(xiàn)象等。隨著分子生物學(xué)技術(shù)在微生物學(xué)領(lǐng)域的廣泛應(yīng)用，本書也介紹了噬菌體、質(zhì)粒、核酸分子雜交、PCR等技術(shù)。為了方便讀者，本書在附錄中列舉了常見培養(yǎng)基、試劑、染色液和緩沖液的配制，以及菌種保藏方法等，在每個(gè)實(shí)驗(yàn)的最后列出了思考題，其目的是增強(qiáng)讀者的思維想象能力。    本書可作為醫(yī)藥院校本、?？粕奈⑸飳W(xué)實(shí)驗(yàn)教材，也可作為醫(yī)院、衛(wèi)生防疫部門及其他從事微生物實(shí)驗(yàn)工作的技術(shù)人員的參考書。

書籍目錄

微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室規(guī)則  實(shí)驗(yàn)一  顯微鏡的構(gòu)造與使用  實(shí)驗(yàn)二  觀察細(xì)菌的基本形態(tài)與特殊結(jié)構(gòu)  實(shí)驗(yàn)三  細(xì)菌不染色標(biāo)本檢查法  實(shí)驗(yàn)四  細(xì)菌染色標(biāo)本檢查法  實(shí)驗(yàn)五  細(xì)菌的分布試驗(yàn)  實(shí)驗(yàn)六  細(xì)菌基礎(chǔ)培養(yǎng)基的制備  實(shí)驗(yàn)七  細(xì)菌的分離培養(yǎng)法  實(shí)驗(yàn)八  觀察細(xì)菌的生長(zhǎng)現(xiàn)象  實(shí)驗(yàn)九  鑒定細(xì)菌常用的生化反應(yīng)實(shí)驗(yàn)  實(shí)驗(yàn)十  物理因素對(duì)細(xì)菌的影響  實(shí)驗(yàn)十一  化學(xué)因素對(duì)細(xì)菌的影響  實(shí)驗(yàn)十二  細(xì)菌對(duì)抗生素的藥物敏感試驗(yàn)  實(shí)驗(yàn)十三  細(xì)菌的遺傳與變異  實(shí)驗(yàn)十四  細(xì)菌的遺傳與變異  實(shí)驗(yàn)十五  動(dòng)物的實(shí)驗(yàn)感染法  實(shí)驗(yàn)十六  細(xì)菌的毒力試驗(yàn)  實(shí)驗(yàn)十七  病原微生物的核酸檢測(cè)技術(shù)  實(shí)驗(yàn)十八  病原性球菌  實(shí)驗(yàn)十九  腸道桿菌  實(shí)驗(yàn)二十  弧菌  實(shí)驗(yàn)二十一  厭氧性細(xì)菌  實(shí)驗(yàn)二十二  白喉?xiàng)U菌  實(shí)驗(yàn)二十三  結(jié)核桿菌  實(shí)驗(yàn)二十四  支原體、衣原體、立克次氏體  實(shí)驗(yàn)二十五  病原性螺旋體  實(shí)驗(yàn)二十六  病原性真菌  實(shí)驗(yàn)二十七  病毒的形態(tài)學(xué)檢查  實(shí)驗(yàn)二十八  病毒的培養(yǎng)技術(shù)  實(shí)驗(yàn)二十九  病毒的滴定、空斑技術(shù)及血凝試驗(yàn)  實(shí)驗(yàn)三十  病毒的血清學(xué)試驗(yàn)附錄  一、一般染色液的配制  二、特殊染色法  三、常用培養(yǎng)基配方   四、常用試劑、洗液及緩沖液的配制  五、常用菌種保藏法

章節(jié)摘錄

書摘材料    1．菌種：葡萄球菌，大腸桿菌18～24小時(shí)肉湯培養(yǎng)物。    2．培養(yǎng)基：普通瓊脂平板。    3．化學(xué)消毒劑：0．1％升汞、5％石炭酸、2％碘酒、2％紅汞。    4．其他：滅菌濾紙圓片（直徑6毫米）、鑷子等。    方法    1．分別以接種環(huán)挑取葡萄球菌、大腸桿菌菌液數(shù)環(huán)，分別放到兩個(gè)普通瓊脂平皿上，作來回連續(xù)劃線，使菌液密布于瓊脂平皿培養(yǎng)基表面。    2．用無菌鑷子夾取滅菌圓形濾紙片各數(shù)張，分別浸于升汞、石炭酸、碘酒和紅汞消毒劑內(nèi)，再——取出，分別放在已接種細(xì)菌的瓊脂平皿表面的中央及四周，各紙片間的距離要大致相等。    3．37℃培養(yǎng)24小時(shí)后，觀察各消毒紙片周圍有無抑菌圈，以及比較各抑菌圈的大小。二、石炭酸對(duì)不同細(xì)菌的殺菌試驗(yàn)    不同化學(xué)消毒劑對(duì)細(xì)菌的殺滅能力各不相同，而同一化學(xué)消毒劑對(duì)不同細(xì)菌的作用效果也不一致。一般而言，具有芽胞的細(xì)菌，對(duì)消毒劑的抵抗能力要比不能形成芽胞的細(xì)菌強(qiáng)。    材料    1．菌種：大腸桿菌肉湯18～24小時(shí)培養(yǎng)物、枯草桿菌肉湯18～24小時(shí)培養(yǎng)物。    2．培養(yǎng)基：肉湯培養(yǎng)基。    3．2％石炭酸管、生理鹽水管、吸管等。  方法    1．用吸管吸取大腸桿菌菌液O．2毫升，將0．1毫升加于2％石炭酸管，另O．1毫升加至生理鹽水管，混勻。同法加枯草桿菌菌液至另一石炭酸及生理鹽水管中。滴加菌液時(shí)，應(yīng)直接滴人消毒劑內(nèi)，勿使部分菌液懸掛在管壁而未與藥液接觸，以致得出錯(cuò)誤結(jié)果。    2．分別經(jīng)5、10、20及40分鐘后，自接種有不同細(xì)菌的石炭酸管內(nèi)各取一接種環(huán)液體接種至肉湯培養(yǎng)基內(nèi)。在40分鐘時(shí)，從生理鹽水管取一接種環(huán)液體接種至肉湯培養(yǎng)基中。    3．將全部10支接種過的肉湯管放37℃培養(yǎng)24小時(shí)，觀察殺菌情況。  三、不同濃度酒精的殺菌試驗(yàn)    酒精的殺菌作用是酒精使細(xì)菌菌體蛋白脫水而變性凝固。濃度高于70％～80％的酒精，可能因脫水過快，使細(xì)菌體表迅速凝固，影響酒精繼續(xù)滲入，故殺菌效能反而降低。    材料    1．菌種：已干燥的沾有葡萄球菌的濾紙條（5mm×15mm）。    2．培養(yǎng)基：肉湯培養(yǎng)基。    3．30％、50％、75％及95％的酒精溶液、鑷子等。    方法    1．用無菌鑷子夾取沾有干燥的葡萄球菌濾紙條，分別投入不同濃度的酒精溶液管中，每一管中放三條，肉湯管中放一條，作對(duì)照用。    2．經(jīng)5、15及30分鐘后，分別從不同濃度酒精管內(nèi)取出1條濾紙片，投入肉湯管中。    3．將所有的接種肉湯管置37℃培養(yǎng)24小時(shí)，觀察殺菌情況。思  考  題1．為什么芽胞對(duì)理化因素抵抗力較繁殖體強(qiáng)?2．如何證明抑茵圈內(nèi)的細(xì)茵是被抑制，還是被殺滅?（劉斌波）實(shí)驗(yàn)十二  細(xì)菌對(duì)抗生素的    藥物敏感試驗(yàn)    各種致病細(xì)菌對(duì)化學(xué)藥物、抗生素等敏感性各異，即使同一種細(xì)菌的不同菌株對(duì)不同藥物的敏感性也常發(fā)生改變，甚至出現(xiàn)耐藥菌株，亦即產(chǎn)生耐藥性變異。因此，測(cè)定細(xì)菌對(duì)藥物的敏感程度，對(duì)于臨床治療中選擇用藥，及時(shí)控制感染具有重要意義。    常用方法有紙片彌散法和試管稀釋法。實(shí)驗(yàn)?zāi)康?   了解細(xì)菌對(duì)藥物敏感試驗(yàn)的操作方法和判斷。實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目    一、紙片法    材料    1．菌種：1號(hào)、2號(hào)金黃色葡萄球菌16～18小時(shí)肉湯培養(yǎng)物、痢疾桿菌16～18小時(shí)肉湯培養(yǎng)物。    2．培養(yǎng)基：普通瓊脂平皿培養(yǎng)基。    3．藥物紙片：青霉素、鏈霉素、氯霉素、慶大霉素紙片。    4．其他：無菌棉棒、鑷子、酒精缸等。    方法    1．用滅菌棉棒分別沾取金黃色葡萄球菌1號(hào)和2號(hào)及痢疾桿菌肉湯培養(yǎng)物，分別涂布在瓊脂表面，每種菌涂一個(gè)平皿（沾菌棉棒用后，放入消毒缸中，勿亂丟）。        2．用小鑷子沾酒精燒灼消毒，待冷后鑷取一種藥物紙片，貼在涂有細(xì)菌的平皿上，然后將鑷子再沾酒精燒灼后，鑷取另一種藥物紙片，貼布于瓊脂平皿另一處，如此將幾種藥物紙片貼完，各紙片距離要大致相等。    3．將已做好的藥敏瓊脂平皿，置37℃培養(yǎng)18～24小時(shí)，觀察各藥物紙片的抑菌效果。即觀察藥物紙片周圍有無抑菌圈，如有，在平皿底面用尺量其直徑大小，測(cè)定藥物敏感程度。各種抗生素抑菌圈直徑與敏感標(biāo)準(zhǔn)見表12-1?！?/pre>








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