細胞生物學及細胞工程實驗

前言

細胞生物學是在不同層次（顯微、亞顯微與分子水平）上研究細胞基本生命活動規(guī)律的科學，以研究細胞結(jié)構(gòu)與功能、細胞增殖、分化、衰老與凋亡、細胞信號傳遞、真核細胞基因表達與調(diào)控、細胞起源與進化等為主要內(nèi)容。細胞工程是按照一定的設(shè)計方案，通過在細胞、亞細胞或組織水平上進行實驗操作，獲得重構(gòu)的細胞、組織、器官以及個體，創(chuàng)造優(yōu)良品種和產(chǎn)品的綜合性生物工程。細胞生物學是細胞工程的理論基礎(chǔ)，細胞工程既是一門獨立的學科，也屬細胞生物學的應用領(lǐng)域。兩者均以細胞為研究和操作對象，聯(lián)系緊密，為此，我們把這兩門學科的實驗內(nèi)容通過優(yōu)化整合編在了一起。細胞生物學是生命科學的重要理論基礎(chǔ)學科，細胞工程也是現(xiàn)代生物技術(shù)的基礎(chǔ)和公用技術(shù)平臺，這兩門學科的實驗涉及的內(nèi)容非常廣泛。我們本著系統(tǒng)性、先進性、可行性和實用性的原則選定實驗內(nèi)容。從基礎(chǔ)性實驗、綜合性實驗和研究性實驗三個層面上設(shè)置實驗項目，突出綜合能力和創(chuàng)新能力的培養(yǎng)。基礎(chǔ)性實驗內(nèi)容涉及細胞形態(tài)與結(jié)構(gòu)的觀察、流式細胞術(shù)、細胞測量與計數(shù)、細胞器的分級分離、細胞器與細胞骨架的觀察、細胞生理、細胞分裂、細胞凋亡、細胞培養(yǎng)、細胞復蘇與凍存、細胞轉(zhuǎn)染等方面，共計18個實驗，屬細胞生物學和細胞工程的最基本的實驗方法和技術(shù)。通過這些實驗不僅可讓學生學會細胞生物學和細胞工程的基本研究手段，而且可增進其對細胞形態(tài)結(jié)構(gòu)和基本生命活動的認識。綜合性實驗主要包括石蠟切片與細胞化學技術(shù)、動植物染色體標本的制備與觀察、免疫熒光與原位雜交技術(shù)、細胞傳代培養(yǎng)及其增殖動力學檢測、細胞融合、雜交瘤技術(shù)、利用根瘤農(nóng)桿菌介導植物細胞的遺傳轉(zhuǎn)化技術(shù)及細胞核移植技術(shù)，共計9個實驗，屬多技術(shù)和多層次的綜合性實驗。這些實驗難度較大，但學生了解和掌握這些實驗技能有助于其將來從事細胞生物學和細胞工程領(lǐng)域更深層次的研究。由于這些實驗持續(xù)時間較長，開展起來可能有些困難，建議教師可帶領(lǐng)部分學生利用課余時間多做準備實驗，將實驗中的一些關(guān)鍵環(huán)節(jié)留在實驗課時進行。如我們在開展石蠟切片與細胞化學技術(shù)的實驗時，讓一部分學生利用課余時間來取材、固定和脫水，然后在實驗課上讓學生來包埋、切片和細胞化學染色，取得了較好的效果。研究性實驗設(shè)置了5個實驗，主要用于培養(yǎng)學生運用細胞生物學與細胞工程的實驗技術(shù)解決一些理論與實際問題的能力，供學生開展創(chuàng)新性實驗時參考。

內(nèi)容概要

本教程是本著系統(tǒng)性、先進性、可行性和實用性的原則選定實驗內(nèi)容編寫而成。從基礎(chǔ)性實驗、綜合性實驗和研究性實驗三個層面上設(shè)置實驗項目?；A(chǔ)性實驗內(nèi)容屬細胞生物學和細胞工程的最基本的實驗方法和技術(shù)。綜合性實驗屬多技術(shù)和多層次的綜合性實驗。研究性實驗設(shè)置了5個實驗，主要用于培養(yǎng)學生運用細胞生物學與細胞工程的實驗技術(shù)解決一些理論與實際問題的能力，供學生開展創(chuàng)新性實驗時參考。    本教程是大學本科細胞生物學和細胞工程的基礎(chǔ)實驗教材，適用于綜合性大學、師范院校、農(nóng)林院校和醫(yī)學院校生物科學、生物技術(shù)及其相關(guān)專業(yè)的學生使用，也可供相關(guān)專業(yè)的研究生和有關(guān)科研人員參考。

書籍目錄

前言第一部分　基礎(chǔ)性實驗　實驗1　特殊顯微鏡的原理及使用　實驗2　電子顯微鏡的原理及使用　實驗3　流式細胞儀的原理及使用　實驗4　細胞測量與計數(shù)　實驗5　植物細胞胞間連絲的觀察　實驗6　細胞凝集反應及細胞膜的滲透性　實驗7　Feu1gen反應顯示細胞中的DNA　實驗8　細胞液泡系和線粒體的活體染色觀察　實驗9　細胞骨架微絲束的普通光學顯微鏡觀察　實驗10　細胞器的分級分離與觀察　實驗11　吞噬細胞的吞噬作用觀察　實驗12　細胞有絲分裂的觀察　實驗13　細胞凋亡的檢測　實驗14　植物培養(yǎng)基的配制與愈傷組織的誘導　實驗15  動物培養(yǎng)基的配制與動物細胞原代培養(yǎng)　實驗16  培養(yǎng)細胞的形態(tài)觀察和活細胞的鑒定與計數(shù)　實驗17　細胞的凍存和復蘇　實驗18　磷酸鈣沉淀法轉(zhuǎn)染細胞實驗第二部分　綜合性實驗　實驗19　石蠟切片技術(shù)及用PAS反應顯示細胞內(nèi)多糖物質(zhì)　實驗20　動植物染色體標本的制作與觀察　實驗21  免疫細胞化學技術(shù)顯示細胞骨架微管結(jié)構(gòu)　實驗22　染色體的熒光原位雜交實驗　實驗23　細胞融合實驗　……第三部分　研究性實驗參考文獻

章節(jié)摘錄

第一部分　基礎(chǔ)性實驗實驗1 特殊顯微鏡的原理及使用1．暗視場顯微鏡【目的要求】了解暗視場顯微鏡的基本原理及構(gòu)造，掌握暗視場光擋的制作方法及暗視場顯微鏡使用方法?！緦嶒炘怼堪狄曇帮@微鏡是利用丁達爾現(xiàn)象(Tyndall phenomenon)原理設(shè)計的，主要是使用中央遮光板或暗視野聚光器(常用的是拋物面聚光器)，使光源的中央光束被阻擋，不能南下而上地通過標本進入物鏡，使光線改變途徑，傾斜地照射在觀察的標本上，標本遇光發(fā)生反射或散射，散射的光線投入物鏡內(nèi)，因而整個視野是黑暗的。視場內(nèi)的樣品，被斜射光線照明，可從樣品各種結(jié)構(gòu)表面散射和反射光線，看到許多細胞器的明亮輪廓，諸如細胞核、線粒體、液泡以及某些內(nèi)含物等。如果是正在分裂的細胞，其各類紡錘絲和染色體亦可看見。在暗視野中所觀察到的是被檢物體的衍射光圖像。并非物體的本身，所以只能看到物體的存在和運動，不能辨清物體的細微結(jié)構(gòu)。但被檢物體為非均質(zhì)時，并大于1／2波長，則各級衍射光線同時進入物鏡，在某種程度上可觀察物體的構(gòu)造。一般暗視野顯微鏡雖看不清物體的細微結(jié)構(gòu)，但卻可分辨0．04ixm以上的微粒的存在和運動，這是普通顯微鏡(最大的分辨力為0．2um)所不具有的特性，可用以觀察活細胞的結(jié)構(gòu)和細胞內(nèi)微粒的運動等。

編輯推薦

《細胞生物學及細胞工程實驗》是由安徽人民出版社出版的。

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