細(xì)胞生物學(xué)及細(xì)胞工程實(shí)驗(yàn)

前言

細(xì)胞生物學(xué)是在不同層次（顯微、亞顯微與分子水平）上研究細(xì)胞基本生命活動(dòng)規(guī)律的科學(xué)，以研究細(xì)胞結(jié)構(gòu)與功能、細(xì)胞增殖、分化、衰老與凋亡、細(xì)胞信號(hào)傳遞、真核細(xì)胞基因表達(dá)與調(diào)控、細(xì)胞起源與進(jìn)化等為主要內(nèi)容。細(xì)胞工程是按照一定的設(shè)計(jì)方案，通過(guò)在細(xì)胞、亞細(xì)胞或組織水平上進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作，獲得重構(gòu)的細(xì)胞、組織、器官以及個(gè)體，創(chuàng)造優(yōu)良品種和產(chǎn)品的綜合性生物工程。細(xì)胞生物學(xué)是細(xì)胞工程的理論基礎(chǔ)，細(xì)胞工程既是一門獨(dú)立的學(xué)科，也屬細(xì)胞生物學(xué)的應(yīng)用領(lǐng)域。兩者均以細(xì)胞為研究和操作對(duì)象，聯(lián)系緊密，為此，我們把這兩門學(xué)科的實(shí)驗(yàn)內(nèi)容通過(guò)優(yōu)化整合編在了一起。細(xì)胞生物學(xué)是生命科學(xué)的重要理論基礎(chǔ)學(xué)科，細(xì)胞工程也是現(xiàn)代生物技術(shù)的基礎(chǔ)和公用技術(shù)平臺(tái)，這兩門學(xué)科的實(shí)驗(yàn)涉及的內(nèi)容非常廣泛。我們本著系統(tǒng)性、先進(jìn)性、可行性和實(shí)用性的原則選定實(shí)驗(yàn)內(nèi)容。從基礎(chǔ)性實(shí)驗(yàn)、綜合性實(shí)驗(yàn)和研究性實(shí)驗(yàn)三個(gè)層面上設(shè)置實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目，突出綜合能力和創(chuàng)新能力的培養(yǎng)?；A(chǔ)性實(shí)驗(yàn)內(nèi)容涉及細(xì)胞形態(tài)與結(jié)構(gòu)的觀察、流式細(xì)胞術(shù)、細(xì)胞測(cè)量與計(jì)數(shù)、細(xì)胞器的分級(jí)分離、細(xì)胞器與細(xì)胞骨架的觀察、細(xì)胞生理、細(xì)胞分裂、細(xì)胞凋亡、細(xì)胞培養(yǎng)、細(xì)胞復(fù)蘇與凍存、細(xì)胞轉(zhuǎn)染等方面，共計(jì)18個(gè)實(shí)驗(yàn)，屬細(xì)胞生物學(xué)和細(xì)胞工程的最基本的實(shí)驗(yàn)方法和技術(shù)。通過(guò)這些實(shí)驗(yàn)不僅可讓學(xué)生學(xué)會(huì)細(xì)胞生物學(xué)和細(xì)胞工程的基本研究手段，而且可增進(jìn)其對(duì)細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)和基本生命活動(dòng)的認(rèn)識(shí)。綜合性實(shí)驗(yàn)主要包括石蠟切片與細(xì)胞化學(xué)技術(shù)、動(dòng)植物染色體標(biāo)本的制備與觀察、免疫熒光與原位雜交技術(shù)、細(xì)胞傳代培養(yǎng)及其增殖動(dòng)力學(xué)檢測(cè)、細(xì)胞融合、雜交瘤技術(shù)、利用根瘤農(nóng)桿菌介導(dǎo)植物細(xì)胞的遺傳轉(zhuǎn)化技術(shù)及細(xì)胞核移植技術(shù)，共計(jì)9個(gè)實(shí)驗(yàn)，屬多技術(shù)和多層次的綜合性實(shí)驗(yàn)。這些實(shí)驗(yàn)難度較大，但學(xué)生了解和掌握這些實(shí)驗(yàn)技能有助于其將來(lái)從事細(xì)胞生物學(xué)和細(xì)胞工程領(lǐng)域更深層次的研究。由于這些實(shí)驗(yàn)持續(xù)時(shí)間較長(zhǎng)，開展起來(lái)可能有些困難，建議教師可帶領(lǐng)部分學(xué)生利用課余時(shí)間多做準(zhǔn)備實(shí)驗(yàn)，將實(shí)驗(yàn)中的一些關(guān)鍵環(huán)節(jié)留在實(shí)驗(yàn)課時(shí)進(jìn)行。如我們?cè)陂_展石蠟切片與細(xì)胞化學(xué)技術(shù)的實(shí)驗(yàn)時(shí)，讓一部分學(xué)生利用課余時(shí)間來(lái)取材、固定和脫水，然后在實(shí)驗(yàn)課上讓學(xué)生來(lái)包埋、切片和細(xì)胞化學(xué)染色，取得了較好的效果。研究性實(shí)驗(yàn)設(shè)置了5個(gè)實(shí)驗(yàn)，主要用于培養(yǎng)學(xué)生運(yùn)用細(xì)胞生物學(xué)與細(xì)胞工程的實(shí)驗(yàn)技術(shù)解決一些理論與實(shí)際問(wèn)題的能力，供學(xué)生開展創(chuàng)新性實(shí)驗(yàn)時(shí)參考。

內(nèi)容概要

本教程是本著系統(tǒng)性、先進(jìn)性、可行性和實(shí)用性的原則選定實(shí)驗(yàn)內(nèi)容編寫而成。從基礎(chǔ)性實(shí)驗(yàn)、綜合性實(shí)驗(yàn)和研究性實(shí)驗(yàn)三個(gè)層面上設(shè)置實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目?；A(chǔ)性實(shí)驗(yàn)內(nèi)容屬細(xì)胞生物學(xué)和細(xì)胞工程的最基本的實(shí)驗(yàn)方法和技術(shù)。綜合性實(shí)驗(yàn)屬多技術(shù)和多層次的綜合性實(shí)驗(yàn)。研究性實(shí)驗(yàn)設(shè)置了5個(gè)實(shí)驗(yàn)，主要用于培養(yǎng)學(xué)生運(yùn)用細(xì)胞生物學(xué)與細(xì)胞工程的實(shí)驗(yàn)技術(shù)解決一些理論與實(shí)際問(wèn)題的能力，供學(xué)生開展創(chuàng)新性實(shí)驗(yàn)時(shí)參考。    本教程是大學(xué)本科細(xì)胞生物學(xué)和細(xì)胞工程的基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)教材，適用于綜合性大學(xué)、師范院校、農(nóng)林院校和醫(yī)學(xué)院校生物科學(xué)、生物技術(shù)及其相關(guān)專業(yè)的學(xué)生使用，也可供相關(guān)專業(yè)的研究生和有關(guān)科研人員參考。

書籍目錄

前言第一部分　基礎(chǔ)性實(shí)驗(yàn)　實(shí)驗(yàn)1　特殊顯微鏡的原理及使用　實(shí)驗(yàn)2　電子顯微鏡的原理及使用　實(shí)驗(yàn)3　流式細(xì)胞儀的原理及使用　實(shí)驗(yàn)4　細(xì)胞測(cè)量與計(jì)數(shù)　實(shí)驗(yàn)5　植物細(xì)胞胞間連絲的觀察　實(shí)驗(yàn)6　細(xì)胞凝集反應(yīng)及細(xì)胞膜的滲透性　實(shí)驗(yàn)7　Feu1gen反應(yīng)顯示細(xì)胞中的DNA　實(shí)驗(yàn)8　細(xì)胞液泡系和線粒體的活體染色觀察　實(shí)驗(yàn)9　細(xì)胞骨架微絲束的普通光學(xué)顯微鏡觀察　實(shí)驗(yàn)10　細(xì)胞器的分級(jí)分離與觀察　實(shí)驗(yàn)11　吞噬細(xì)胞的吞噬作用觀察　實(shí)驗(yàn)12　細(xì)胞有絲分裂的觀察　實(shí)驗(yàn)13　細(xì)胞凋亡的檢測(cè)　實(shí)驗(yàn)14　植物培養(yǎng)基的配制與愈傷組織的誘導(dǎo)　實(shí)驗(yàn)15  動(dòng)物培養(yǎng)基的配制與動(dòng)物細(xì)胞原代培養(yǎng)　實(shí)驗(yàn)16  培養(yǎng)細(xì)胞的形態(tài)觀察和活細(xì)胞的鑒定與計(jì)數(shù)　實(shí)驗(yàn)17　細(xì)胞的凍存和復(fù)蘇　實(shí)驗(yàn)18　磷酸鈣沉淀法轉(zhuǎn)染細(xì)胞實(shí)驗(yàn)第二部分　綜合性實(shí)驗(yàn)　實(shí)驗(yàn)19　石蠟切片技術(shù)及用PAS反應(yīng)顯示細(xì)胞內(nèi)多糖物質(zhì)　實(shí)驗(yàn)20　動(dòng)植物染色體標(biāo)本的制作與觀察　實(shí)驗(yàn)21  免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)顯示細(xì)胞骨架微管結(jié)構(gòu)　實(shí)驗(yàn)22　染色體的熒光原位雜交實(shí)驗(yàn)　實(shí)驗(yàn)23　細(xì)胞融合實(shí)驗(yàn)　……第三部分　研究性實(shí)驗(yàn)參考文獻(xiàn)

章節(jié)摘錄

第一部分　基礎(chǔ)性實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)1 特殊顯微鏡的原理及使用1．暗視場(chǎng)顯微鏡【目的要求】了解暗視場(chǎng)顯微鏡的基本原理及構(gòu)造，掌握暗視場(chǎng)光擋的制作方法及暗視場(chǎng)顯微鏡使用方法?！緦?shí)驗(yàn)原理】暗視野顯微鏡是利用丁達(dá)爾現(xiàn)象(Tyndall phenomenon)原理設(shè)計(jì)的，主要是使用中央遮光板或暗視野聚光器(常用的是拋物面聚光器)，使光源的中央光束被阻擋，不能南下而上地通過(guò)標(biāo)本進(jìn)入物鏡，使光線改變途徑，傾斜地照射在觀察的標(biāo)本上，標(biāo)本遇光發(fā)生反射或散射，散射的光線投入物鏡內(nèi)，因而整個(gè)視野是黑暗的。視場(chǎng)內(nèi)的樣品，被斜射光線照明，可從樣品各種結(jié)構(gòu)表面散射和反射光線，看到許多細(xì)胞器的明亮輪廓，諸如細(xì)胞核、線粒體、液泡以及某些內(nèi)含物等。如果是正在分裂的細(xì)胞，其各類紡錘絲和染色體亦可看見(jiàn)。在暗視野中所觀察到的是被檢物體的衍射光圖像。并非物體的本身，所以只能看到物體的存在和運(yùn)動(dòng)，不能辨清物體的細(xì)微結(jié)構(gòu)。但被檢物體為非均質(zhì)時(shí)，并大于1／2波長(zhǎng)，則各級(jí)衍射光線同時(shí)進(jìn)入物鏡，在某種程度上可觀察物體的構(gòu)造。一般暗視野顯微鏡雖看不清物體的細(xì)微結(jié)構(gòu)，但卻可分辨0．04ixm以上的微粒的存在和運(yùn)動(dòng)，這是普通顯微鏡(最大的分辨力為0．2um)所不具有的特性，可用以觀察活細(xì)胞的結(jié)構(gòu)和細(xì)胞內(nèi)微粒的運(yùn)動(dòng)等。

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《細(xì)胞生物學(xué)及細(xì)胞工程實(shí)驗(yàn)》是由安徽人民出版社出版的。

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