分子生物學(xué)

前言

　　分子生物學(xué)是研究生物大分子結(jié)構(gòu)和功能的學(xué)科，是現(xiàn)代生命科學(xué)中發(fā)展極快的分支學(xué)科。分子生物學(xué)的主要內(nèi)容是在生物大分子結(jié)構(gòu)、性質(zhì)及其相互作用的層面上，研究基因的結(jié)構(gòu)、功能、表達(dá)及其調(diào)控的分子機(jī)制。20世紀(jì)50年代以來，包括形態(tài)分類學(xué)和生態(tài)學(xué)等宏觀學(xué)科在內(nèi)的生命科學(xué)的各個(gè)領(lǐng)域，都在越來越多地用分子生物學(xué)的理論和方法研究一些深層次的問題。因此，對(duì)生命科學(xué)各個(gè)領(lǐng)域（包括農(nóng)學(xué)和醫(yī)學(xué)）的科學(xué)工作者來說，掌握分子生物學(xué)的理論體系和研究方法是至關(guān)重要的。對(duì)生命科學(xué)領(lǐng)域的本科生和研究生來說，分子生物學(xué)無疑是一門十分重要的課程?！　∮捎诜肿由飳W(xué)的內(nèi)容抽象而復(fù)雜，且發(fā)展速度極快，教好分子生物學(xué)，或?qū)W好分子生物學(xué)都是相當(dāng)困難的。推出一本內(nèi)容充實(shí)、條例清楚、重點(diǎn)突出、文字簡(jiǎn)明通俗，圖片精美，篇幅適中的教材，使學(xué)生能夠比較容易地學(xué)到深入扎實(shí)的分子生物學(xué)理論和技術(shù)原理，是本書編者追求的目標(biāo)。　　編者力求使本書具備下列特色?！　。?）內(nèi)容充實(shí)，反映學(xué)科新進(jìn)展。由于分子生物學(xué)是一個(gè)實(shí)驗(yàn)學(xué)科，本書各章均在力求全面深入地講述有關(guān)理論的基礎(chǔ)上，介紹相關(guān)研究技術(shù)的基本原理，且力求反映新理論和新技術(shù)。如在深入講述核酸結(jié)構(gòu)和性質(zhì)的基礎(chǔ)上，順理成章地介紹包括分子雜交和基因芯片在內(nèi)的研究技術(shù);在講述基因結(jié)構(gòu)和功能的基礎(chǔ)上，系統(tǒng)的論述結(jié)構(gòu)基因組學(xué)和功能基因組學(xué)的研究方法和成就;將基因結(jié)構(gòu)、表達(dá)及其調(diào)控研究的新進(jìn)展，焦磷酸測(cè)序技術(shù)、實(shí)時(shí)定量PCR、基因的克隆和表達(dá)等新技術(shù)納入教材。使學(xué)生能夠掌握分子生物學(xué)的理論體系和技術(shù)原理，熟悉學(xué)科的發(fā)展動(dòng)態(tài)，具備從事有關(guān)科學(xué)工作的基本能力?！　。?）注重培養(yǎng)學(xué)生科學(xué)思維的能力和敬業(yè)精神。本書各章注重概要介紹一些重大科學(xué)發(fā)現(xiàn)的過程，如DNA結(jié)構(gòu)的發(fā)現(xiàn)，遺傳密碼的破譯，基因表達(dá)調(diào)控的研究方法等，使學(xué)生能夠領(lǐng)悟科學(xué)思維的方法，和科學(xué)工作者不畏勞苦的敬業(yè)精神?！　。?）教師容易教，學(xué)生容易學(xué)。編者在構(gòu)建本書的知識(shí)框架時(shí)，力求做到條例清楚、重點(diǎn)突出、圖片精美，篇幅適中。語言表達(dá)力求簡(jiǎn)明通俗，層次分明，使采用本教材的教師能夠教得輕松，學(xué)生能夠?qū)W得容易。

內(nèi)容概要

　　分子生物學(xué)專業(yè)的一線教師集體編寫而成，力求反映分子生物學(xué)的基礎(chǔ)理論和最新研究趨勢(shì)與進(jìn)展?！　∪珪空乱砸巳雱俚膶?dǎo)言為開端，以本章內(nèi)容的發(fā)展史，理論和實(shí)踐方面的意義為切入點(diǎn)來激發(fā)學(xué)生的學(xué)習(xí)興趣，并注意將科學(xué)史上一些重要發(fā)現(xiàn)的概況編入教材，以培養(yǎng)學(xué)生科學(xué)思維的能力和敬業(yè)精神。分12章深入地闡述了主要生物大分子的結(jié)構(gòu)、生物合成及其調(diào)控機(jī)制，介紹了基因組學(xué)、PCR、DNA克隆、克隆基因的表達(dá)等研究方法的基本原理和應(yīng)用。每章后附有小結(jié)和思考題，概括本章的主要內(nèi)容，使讀者能抓住復(fù)習(xí)的重點(diǎn)?！　”緯鴥?nèi)容充實(shí)，條理清楚，重點(diǎn)突出，簡(jiǎn)明通俗，篇幅適中，可作為各類高等院校生物、農(nóng)林、醫(yī)學(xué)等專業(yè)本科生和研究生的教科書，也可作為相關(guān)專業(yè)教師和科研人員的參考書。

書籍目錄

1 緒論11.1 分子生物學(xué)的概念11.2 分子生物學(xué)的研究?jī)?nèi)容11.3 分子生物的發(fā)展和展望21.3.1 分子生物學(xué)的興起21.3.2 分子生物學(xué)的發(fā)展41.3.3 分子生物學(xué)的展望5本章內(nèi)容提要6思考題62 核酸的結(jié)構(gòu)和功能72.1 DNA是主要的遺傳物質(zhì)72.2 核酸的組成成分82.2.1 戊糖82.2.2 含氮堿基92.2.3 核苷102.2.4 核苷酸102.3 核酸的一級(jí)結(jié)構(gòu)132.4 DNA的二級(jí)結(jié)構(gòu)132.4.1 DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)的實(shí)驗(yàn)依據(jù)142.4.2 DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)的要點(diǎn)142.4.3 DNA二級(jí)結(jié)構(gòu)的其他類型162.5 DNA的高級(jí)結(jié)構(gòu)192.5.1 環(huán)狀DNA的超螺旋結(jié)構(gòu)192.5.2 真核生物染色體的結(jié)構(gòu)202.6 RNA的結(jié)構(gòu)和功能232.6.1 tRNA232.6.2 rRNA242.6.3 mRNA和hnRNA252.6.4 snRNA和snoRNA252.6.5 asRNA和RNAi252.6.6 非編碼RNA的多樣性262.7 核酸的性質(zhì)272.7.1 一般理化性質(zhì)272.7.2 紫外吸收性質(zhì)282.7.3 核酸結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性282.7.4 核酸的變性282.7.5 核酸的復(fù)性292.8 核酸的研究方法312.8.1 核酸的提取與沉淀312.8.2 核酸的電泳分離322.８.3 核酸的超速離心322.8.4 核酸的分子雜交332.８.5 DNA芯片技術(shù)及應(yīng)用342.８.6 DNA的化學(xué)合成342.9 核酸的序列測(cè)定352.9.1 鏈終止法352.9.2 焦磷酸測(cè)序技術(shù)37本章內(nèi)容提要38思考題403 基因和基因組413.1 基因的概念413.2 基因的類型433.2.1 基因家族和基因簇433.2.2 假基因453.2.3 重疊基因463.2.4 移動(dòng)基因463.2.5 斷裂基因463.3 基因組513.３.1 基因組的概念513.３.2 病毒的基因組523.3.3 原核生物的基因組553.4 真核生物的基因組573.4.1 真核生物基因組的特點(diǎn)573.4.2 真核生物基因組的重復(fù)序列583.4.3 線粒體基因組的結(jié)構(gòu)633.4.4 葉綠體基因組的結(jié)構(gòu)653.5 結(jié)構(gòu)基因組學(xué)663.5.1 遺傳圖譜和物理圖譜673.5.2 重疊群的建立673.5.3 高分辨率物理圖譜的制作683.5.4 序列測(cè)定693.5.5 基因定位713.6 功能基因組學(xué)713.6.1 功能基因組學(xué)的概念713.6.2 蛋白質(zhì)組學(xué)723.6.3 生物信息學(xué)75本章內(nèi)容提要77思考題794 DNA的生物合成804.1 DNA復(fù)制的概況804.1.1 DNA的半保留復(fù)制804.1.2 復(fù)制的起點(diǎn)和方向814.2 原核生物DNA的復(fù)制824.2.1 參與原核生物DNA復(fù)制的酶和蛋白質(zhì)824.2.2 復(fù)制的起始884.2.3 DNA鏈的延伸894.2.4 復(fù)制的終止914.3 真核生物DNA的復(fù)制924.3.1 參與真核生物DNA復(fù)制的酶和蛋白質(zhì)924.3.2 真核生物DNA復(fù)制的特點(diǎn)934.3.3 真核生物DNA復(fù)制的過程944.3.4 端粒DNA的復(fù)制954.3.5 DNA復(fù)制與核小體組裝964.4 DNA復(fù)制的其他方式974.4.1 滾環(huán)復(fù)制974.4.2 取代環(huán)復(fù)制974.4.3 線形DNA末端復(fù)制的問題984.5 DNA復(fù)制的高度忠實(shí)性1004.6 逆轉(zhuǎn)錄作用1004.6.1 逆轉(zhuǎn)錄病毒的結(jié)構(gòu)1014.6.2 cDNA的合成1034.6.3 原病毒DNA的整合1044.6.4 逆轉(zhuǎn)錄作用的生物學(xué)意義1054.7 原核生物DNA復(fù)制的調(diào)控1054.7.1 大腸桿菌染色體DNA復(fù)制的調(diào)控1054.7.2 ColEl質(zhì)粒DNA復(fù)制的調(diào)控1064.7.3 R6K質(zhì)粒DNA復(fù)制的調(diào)控1064.7.4 單鏈DNA噬菌體復(fù)制的調(diào)控1074.7.5 λ噬菌體DNA復(fù)制的調(diào)控1074.8 真核生物DNA復(fù)制的調(diào)控1074.8.1 SV40病毒DNA復(fù)制的調(diào)控1084.8.2 腺病毒DNA復(fù)制的調(diào)控1084.8.3 酵母染色體DNA復(fù)制的調(diào)控108本章內(nèi)容提要109思考題1115 DNA的損傷與修復(fù)1135.1 DNA損傷的產(chǎn)生1135.1.1 DNA分子的自發(fā)性損傷1135.1.2 物理因素引起的DNA損傷1155.1.3 化學(xué)因素引起的DNA損傷1165.2 基因的突變1195.2.1 突變的類型1195.2.2 突變的回復(fù)和校正1205.2.3 誘變劑和致癌劑的檢測(cè)1225.3 DNA損傷的修復(fù)1225.3.1 直接修復(fù)1225.3.2 切除修復(fù)1245.3.3 錯(cuò)配修復(fù)1295.3.4 雙鏈斷裂的修復(fù)1305.4 損傷跨越1315.4.1 重組跨越1315.4.2 跨越合成1325.5 DNA修復(fù)缺陷與癌癥的關(guān)系133本章內(nèi)容提要134思考題1356 DNA重組和克隆1376.1 同源重組1376.1.1 同源重組的分子模型1376.1.2 細(xì)菌的基因轉(zhuǎn)移與重組1396.1.3 細(xì)菌同源重組的酶學(xué)機(jī)制1426.1.4 真核生物的同源重組1436.2 位點(diǎn)特異性重組1456.2.1 位點(diǎn)特異性重組的機(jī)制1456.2.2 λ噬菌體DNA的整合與切除1466.2.3 細(xì)菌的特異位點(diǎn)重組1476.2.4 免疫球蛋白基因的V(D)J重組1476.3 轉(zhuǎn)座重組1496.3.1 轉(zhuǎn)座子的概念1496.3.2 原核生物的轉(zhuǎn)座子1506.3.3 真核生物的轉(zhuǎn)座子1526.4 逆轉(zhuǎn)錄轉(zhuǎn)座子1556.4.1 逆轉(zhuǎn)錄轉(zhuǎn)座子的結(jié)構(gòu)1556.4.2 逆轉(zhuǎn)錄轉(zhuǎn)座子的生物學(xué)意義1576.5 轉(zhuǎn)座的分子機(jī)制1586.5.1 非復(fù)制型轉(zhuǎn)座1586.5.2 復(fù)制型轉(zhuǎn)座1586.6 聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)技術(shù)1606.6.1 PCR的基本原理1606.6.2 PCR反應(yīng)體系的優(yōu)化1616.6.3 PCR技術(shù)的擴(kuò)展1626.7 DNA克隆1636.7.1 用于DNA克隆的工具酶1636.7.2 常用的克隆載體1646.7.3 DNA分子的體外連接1666.7.4 重組子導(dǎo)入受體細(xì)胞1676.7.5 重組子的篩選1676.7.6 基因組文庫的構(gòu)建1696.7.7 cDNA文庫的構(gòu)建1706.７.8 目的基因的來源1706.8 克隆基因的表達(dá)1716.8.1 檢測(cè)表達(dá)產(chǎn)物的方法1716.８.2 外源基因在原核細(xì)胞中的表達(dá)1736.８.3 外源基因在真核細(xì)胞中的表達(dá)1756.9 轉(zhuǎn)基因植物和轉(zhuǎn)基因動(dòng)物1796.9.1 轉(zhuǎn)基因植物1796.9.2 轉(zhuǎn)基因動(dòng)物180本章內(nèi)容提要181思考題1837 RNA的生物合成1857.1 RNA生物合成的概況1857.2 原核生物的轉(zhuǎn)錄1867.2.1 原核生物的RNA聚合酶1867.2.2 轉(zhuǎn)錄的起始1887.2.3 RNA鏈的延伸1907.2.4 轉(zhuǎn)錄的終止1917.3 真核生物的轉(zhuǎn)錄1937.3.1 真核生物轉(zhuǎn)錄的特點(diǎn)1937.3.2 真核生物的RNA聚合酶1937.3.3 RNA聚合酶Ⅱ催化的轉(zhuǎn)錄1947.3.4 RNA聚合酶Ⅰ催化的轉(zhuǎn)錄1987.3.5 RNA聚合酶Ⅲ催化的轉(zhuǎn)錄1997.4 轉(zhuǎn)錄校對(duì)2007.5 轉(zhuǎn)錄過程的選擇性抑制2007.5.1 堿基類似物2017.5.2 DNA模板功能的抑制劑2017.5.3 RNA聚合酶的抑制物2027.6 RNA復(fù)制2037.6.1 RNA復(fù)制的特點(diǎn)2037.6.2 雙鏈RNA病毒的RNA復(fù)制2037.6.3 正鏈RNA病毒的RNA復(fù)制2037.6.4 負(fù)鏈RNA病毒的RNA復(fù)制2047.6.5 無模板的RNA合成205本章內(nèi)容提要205思考題2078 轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物的加工2088.1 原核生物RNA的轉(zhuǎn)錄后加工2088.1.1 原核生物tRNA前體的加工2088.1.2 原核生物rRNA前體的加工2098.1.3 原核生物mRNA前體的加工2108.2 真核生物tRNA前體的轉(zhuǎn)錄后加工2118.2.1 真核生物tRNA前體的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)2118.2.2 內(nèi)含子的剪接2118.2.3 在3′?端添加?CCA2128.2.4 核苷酸的修飾2128.3 真核生物rRNA前體的轉(zhuǎn)錄后加工2128.3.1 rRNA基因的結(jié)構(gòu)2128.3.2 rRNA前體的核苷酸修飾2138.3.3 rRNA前體的剪切2148.4 真核生物mRNA前體的加工2158.4.1 形成5′?端帽子結(jié)構(gòu)2158.4.2 形成3′?端的多聚腺苷酸2178.4.3 斷裂基因的拼接2198.5 不同類型內(nèi)含子的比較2228.5.1 Ⅰ型內(nèi)含子2228.5.2 Ⅱ型內(nèi)含子2238.5.3 內(nèi)含子剪接機(jī)制的比較2258.6 核酶2258.6.1 核酶的發(fā)現(xiàn)2258.6.2 核酶的類型2268.6.3 核酶的結(jié)構(gòu)226本章內(nèi)容提要227思考題2299 蛋白質(zhì)的生物合成2309.1 蛋白質(zhì)生物合成的概述2309.1.1 mRNA是蛋白質(zhì)合成的模板2309.1.2 tRNA是氨基酸的運(yùn)載體2329.1.3 核糖體是蛋白質(zhì)合成的場(chǎng)所2339.1.4 參與蛋白質(zhì)合成的各種輔因子2359.2 遺傳密碼的破譯2359.2.1 遺傳密碼是三聯(lián)體2369.2.2 用人工合成的多聚核苷酸破譯遺傳密碼2369.2.3 用人工合成的三核苷酸破譯遺傳密碼2379.3 遺傳密碼的特性2389.3.1 遺傳密碼是連續(xù)排列的三聯(lián)體2389.3.2 起始密碼與終止密碼2389.3.3 遺傳密碼的簡(jiǎn)并性2399.3.4 遺傳密碼的變偶性2399.3.5 遺傳密碼的通用性2409.3.6 遺傳密碼的防錯(cuò)系統(tǒng)2419.3.7 可讀框2429.4 氨酰?tRNA的合成2429.4.1 合成氨酰?tRNA的反應(yīng)2429.4.2 氨酰?tRNA合成酶的特異性2449.5 原核生物的蛋白質(zhì)合成2459.5.1 原核生物肽鏈合成的起始2459.5.2 原核生物肽鏈合成的延伸2479.5.3 原核生物肽鏈合成的終止2499.6 真核生物的蛋白質(zhì)合成2509.6.1 真核生物肽鏈合成的起始2509.6.2 真核生物肽鏈合成的延伸2539.6.3 真核生物肽鏈合成的終止2539.7 蛋白質(zhì)生物合成的抑制劑2549.7.1 原核生物肽鏈合成的抑制劑2549.7.2 真核生物肽鏈合成的抑制劑2549.7.3 作用于原核生物和真核生物的肽鏈合成抑制劑255本章內(nèi)容提要255思考題25610 肽鏈合成后的加工和輸送25710.1 肽鏈合成后的加工25710.1.1 肽鏈的剪接25710.1.2 氨基酸殘基的修飾25810.1.3 多肽鏈的折疊26110.2 肽鏈合成后的定向輸送26410.2.1 共翻譯途徑26510.2.2 翻譯后途徑267本章內(nèi)容提要271思考題27211 原核生物基因表達(dá)的調(diào)控27311.1 原核生物基因表達(dá)調(diào)控的概述27311.2 DNA水平的調(diào)控27411.2.1 細(xì)菌DNA重排對(duì)基因表達(dá)的影響27411.2.2 σ因子對(duì)原核生物轉(zhuǎn)錄起始的調(diào)控27511.3 操縱子對(duì)基因表達(dá)的調(diào)控27611.3.1 操縱子的基本結(jié)構(gòu)27711.3.2 乳糖操縱子27811.3.3 阿拉伯糖操縱子28111.3.4 色氨酸操縱子28211.4 轉(zhuǎn)錄終止階段的調(diào)控28511.4.1 抗終止作用28611.4.2 弱化作用28711.5 翻譯水平的調(diào)控28711.5.1 mRNA二級(jí)結(jié)構(gòu)對(duì)基因表達(dá)的調(diào)控28811.5.2 mRNA穩(wěn)定性對(duì)翻譯的調(diào)節(jié)28811.5.3 反義RNA對(duì)翻譯的調(diào)控28911.5.4 蛋白質(zhì)合成的自體調(diào)控29011.5.5 嚴(yán)謹(jǐn)反應(yīng)與核糖體合成的調(diào)控29311.6 核開關(guān)和群體感應(yīng)29411.6.1 核開關(guān)29411.6.2 群體感應(yīng)295本章內(nèi)容提要296思考題29712 真核生物基因表達(dá)的調(diào)控29812.1 真核生物基因表達(dá)調(diào)控的特點(diǎn)29812.1.1 原核生物和真核生物基因表達(dá)調(diào)控的差別29812.1.2 真核生物基因表達(dá)調(diào)控的層次29912.2 染色體水平的調(diào)控30012.2.1 異染色質(zhì)化對(duì)基因活性的影響30012.2.2 組蛋白對(duì)基因活性的影響30112.2.3 非組蛋白對(duì)基因活性的影響30512.2.4 核基質(zhì)對(duì)基因活性的影響30612.2.5 基因的丟失30712.2.6 基因的擴(kuò)增30712.3 染色體基因的重排30812.3.1 免疫球蛋白基因的重排30812.3.2 酵母交配型染色體的重排31012.4 DNA水平的調(diào)控31012.4.1 DNA的甲基化31012.4.2 DNA甲基化對(duì)轉(zhuǎn)錄活性的影響31112.5 真核生物轉(zhuǎn)錄水平的調(diào)控31312.5.1 順式作用元件31312.5.2 反式作用因子31512.5.3 轉(zhuǎn)錄調(diào)控的作用機(jī)制31912.5.4 固醇類激素對(duì)基因轉(zhuǎn)錄的調(diào)控32212.6 轉(zhuǎn)錄后水平的調(diào)控32512.6.1 可變剪接32612.6.2 反式剪接32812.6.3 RNA編輯32912.6.4 RNA的轉(zhuǎn)運(yùn)33012.7 翻譯水平的調(diào)控33112.7.1 mRNA穩(wěn)定性對(duì)基因活性的影響33112.7.2 翻譯起始階段的調(diào)控33312.7.3 mRNA的選擇性翻譯33512.7.4 RNA干擾導(dǎo)致的基因沉默33612.8 翻譯后調(diào)控33712.9 真核生物發(fā)育過程中的基因表達(dá)調(diào)控33912.9.1 母性基因33912.9.2 分節(jié)基因34012.9.3 同源異型基因340本章內(nèi)容提要342思考題343參考文獻(xiàn)345中文索引346英文縮寫詞索引351

章節(jié)摘錄

　　2.8.1核酸的提取與沉淀　　核酸類化合物都溶于水而不溶于有機(jī)溶劑，所以核酸可用水溶液提取，除去雜質(zhì)后，用有機(jī)溶劑沉淀。在細(xì)胞內(nèi)，核糖核酸與蛋白質(zhì)結(jié)合成核糖核蛋白（RNP），脫氧核糖核酸與蛋白質(zhì)結(jié)合成脫氧核糖核蛋白（DNP）。在O.14tool／L的氯化鈉溶液中，RNP的溶解度相當(dāng)大，而DNP的溶解度僅為在水中溶解度的1％。當(dāng)氯化鈉的濃度達(dá)到1mol／L的時(shí)候，RNP的溶解度小，而DNP的溶解度比在水中的溶解度大2倍。所以常選用O.14mol／L的氯化鈉溶液提取RNP，選用1mol／L的氯化鈉溶液提取DNP。兩種核蛋自在不同pH條件下溶解度也不相同，RNP在pH2.0～2.5時(shí)溶解度最低，而DNP則在pH4.2時(shí)溶解度最低。　　核酸分離純化一般應(yīng)維持在0～4℃的低溫條件下，以防止核酸的變性和降解。為防止核酸酶引起的水解作用，可加入十二烷基硫酸鈉（SDS）、乙二胺四乙酸（EDTA）、8一羥基喹啉、檸檬酸鈉等抑制核酸酶的活性。2.8.1.1 RNA的提取　　tRNA約占細(xì)胞內(nèi)RNA的15％，相對(duì)分子質(zhì)量較小，在細(xì)胞破碎以后溶解在水溶液中，離心或過濾除去組織或細(xì)胞殘?jiān)?，用酸處理調(diào)節(jié)到pH5，得到的沉淀即為tRAN粗品。mRNA占細(xì)胞RNA的5％左右，很不穩(wěn)定，提取條件要嚴(yán)格控制。rRNA約占細(xì)胞內(nèi)RNA的80％，一般提取的RNA主要是rRNA。　?。?）稀鹽溶液提取法　用0.14mol／L的氯化鈉溶液反復(fù)抽提組織勻漿或細(xì)胞裂解液，得到RNP提取液，再進(jìn)一步去除DNP、蛋白質(zhì)、多糖等雜質(zhì)，獲得純化的RNA。　?。?）苯酚水溶液提取法　在組織勻漿或細(xì)胞裂解液中加入等體積的90 9／6苯酚水溶液，在一定條件下振蕩一定時(shí)間，將RNA與蛋白質(zhì)分開，離心分層后，DNA和蛋白質(zhì)處于苯酚層中，而RNA和多糖溶解于水層中。苯酚溶液提取法操作時(shí)溫度可控制在2～5℃進(jìn)行，稱為冷酚法提取。也可控制在60℃左右，稱為熱酚法提取。苯酚溶液提取法不需事先提取RNP，而是直接將RNA與蛋白質(zhì)和DNA等初步分開，是目前提取RNA的常用方法。必須注意，市售的苯酚往往含有某些重金屬和雜質(zhì)，可能引起核酸的變性或降解。使用時(shí)苯酚一般需要減壓重蒸，或使用市售的水飽和酚。通常多次用苯酚或氯仿處理使蛋白質(zhì)變性，每次處理后離心取上層水相。用Trizol試劑可以制備高質(zhì)量的RNA，但Trizol試劑的價(jià)格較高。此外也可用表面活性劑，如sDS和二甲基苯磺酸鈉等處理細(xì)胞勻漿來提取RNA。mR-NA可用寡聚dT一纖維素親和層析，或偶聯(lián)寡聚dT的磁珠從總RNA中分離?！　∮捎赗NA酶存在廣泛，且十分穩(wěn)定，破碎細(xì)胞時(shí)要加入胍鹽破壞RNA酶，試劑要用O.1％的DEPC（焦碳酸二乙酯）配制，器皿要高壓滅菌或用O.1％的DEPC處理。2.8.1.2 DNA的提取　　從細(xì)胞中提取DNA，一般在細(xì)胞破碎后用濃鹽法提取。即用1tool／L的氯化鈉溶液從細(xì)胞勻漿中提取DNP，再與含有少量辛醇或戊醇的氯仿一起振蕩除去蛋白質(zhì)?；蛘呦纫設(shè).14mol／L氯化鈉溶液（也可用O.1tool／L NaCl加上O.05tool／L檸檬酸代替）反復(fù)洗滌除去RNP后，再用1mol／L氯化鈉溶液提取DNP，經(jīng)水飽和酚和氯仿戊醇（辛醇）反復(fù)處理，除去蛋白質(zhì)，而得到DNA。

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