PCR聚合酶鏈反應/藥學實驗室技術(shù)系列

前言

　　生物制品是人類用于預防、治療和診斷疾病的有力武器，這些由微生物（細菌、噬菌體、立克次體、病毒等）或微生物代謝產(chǎn)物、動物毒素、人或動物主要組織經(jīng)純化或現(xiàn)代生物技術(shù)加工制成的產(chǎn)品，在預防人類各種傳染性疾病、治療或者輔助治療數(shù)種疾病方面發(fā)揮了重要作用，取得了良好的效果，提高了人類的健康水平。隨著時代變遷、經(jīng)濟發(fā)展，人類賴以生存的大環(huán)境和微環(huán)境逐步惡化，近30多年來，全球新發(fā)現(xiàn)的致病性病原體有40余種，其中一些病原體仍在人間傳播，肆虐人類健康，如人類免疫缺陷病毒HIV、變異冠狀病毒、高死亡率埃博拉病毒等；還有一些在不同物種間相互傳播的病原體，如高致病性禽流感H5N1病毒、引起動物和人腦疾病的朊病毒等都對當今和未來人類的健康構(gòu)成了嚴重威脅。目前對這些主要的病原體及其造成的疾病，尚未尋找到有效的預防和治療方法。盡管如此，人們?nèi)栽诓粩嗵剿鹘鉀Q這些問題的辦法。人類都寄希望于用生物制品來預防和治療某些疾病。疫苗是目前人類可以徹底控制某一傳染性疾病的唯一武器，預防接種不但保護了個體免受傳染病病原體的侵襲，而且在群體中也限制了病原微生物的傳播；同樣，診斷試劑的應用也在疾病預防中發(fā)揮重要作用。疫苗在消滅天花和控制脊髓灰質(zhì)炎等傳染病中所起到的關(guān)鍵性作用有力地證明了這一點。因此，生物制品的研究開發(fā)成為了疾病（特別是傳染性疾?。╊A防及控制的重要內(nèi)容。幾乎所有的疫苗和絕大多數(shù)生物制品在研究、生產(chǎn)及檢定過程中都離不開細胞培養(yǎng)，由于組織細胞，特別是來源于動物的原代細胞，可能帶有外源性的微生物，會給研究結(jié)果的可靠性、生產(chǎn)產(chǎn)品的安全性等帶來影響，因此必須對用于生產(chǎn)及檢定用的細胞進行檢測，確定其達到相關(guān)技術(shù)標準的要求，保障所生產(chǎn)制品的安全。因此，建立準確、靈敏、可靠、重復性好的檢測方法及標準，對于保障產(chǎn)品的質(zhì)量至關(guān)重要。我國已發(fā)布了相關(guān)的法律法規(guī)和藥典，對不同環(huán)節(jié)的檢測項目﹑控制標準都制定了基本要求。鑒于目前國外檢測技術(shù)的不斷完善，國內(nèi)生物制品企業(yè)日趨增多，編寫一部有關(guān)生物制品的質(zhì)量檢定手冊非常有必要。本書邀請了一批具有扎實理論基礎(chǔ)并在生物制品工作中積累了豐富經(jīng)驗的專家學者，根據(jù)《中華人民共和國藥典》本書后文簡稱《中國藥典》。（三部）中《生物制品生產(chǎn)用動物細胞基質(zhì)制備及檢定規(guī)程》的基本要求，結(jié)合一些工作經(jīng)驗，編寫了《生物制品檢定手冊——生產(chǎn)及檢定用細胞》一書供同行參考。本書較全面地描述了生物制品生產(chǎn)及檢定用細胞的種類﹑生長特性﹑培養(yǎng)方法﹑檢測內(nèi)容﹑操作程序﹑判斷標準等內(nèi)容。希望能對同行有所幫助，也希望通過本書的出版，加強生物制品界的交流與合作，為研究新生物制品、檢定制品的質(zhì)量共同努力。由于科技發(fā)展日新月異，我們掌握的資料和撰寫的水平都還有待提高，另外該書編寫時間緊，不妥和疏漏之處在所難免。衷心希望廣大專家﹑讀者給予諒解，批評指正。

內(nèi)容概要

本書分為三篇，原理篇簡要介紹PCR基本原理、技術(shù)發(fā)展及重要應用；操作方法／技術(shù)篇按照由簡單到復雜的順序，依次詳細地介紹各種主流PCR技術(shù)在實際操作中的方法與技巧：常見問題解答篇采用一問一答的方式，根據(jù)編寫人員的實踐經(jīng)驗，對PCR技術(shù)中常見的問題進行詳細解答。 　　內(nèi)容涉及： 　　常規(guī)PCR 　　反轉(zhuǎn)錄PCR 　　實時熒光定量PCR 　　免疫PCR 　　利用PCR構(gòu)建突變體 　　未知序列的克隆 　　其他常見PCR技術(shù) 　　PCR軟件的使用 　　與同類書相比，本書更加以實際經(jīng)驗為基礎(chǔ)，突出實際操作技巧,采取Step-by-Step方式進行說明，使方法與技巧更易于掌握。 　　本書適用于醫(yī)藥、生命科學相關(guān)實驗室的技術(shù)人員及相關(guān)研究堂。

書籍目錄

原理篇 　第1章　PCR技術(shù)基本原理　　1.1　基本原理　　1.2　PCR反應動力學　　1.3　PCR技術(shù)的特點　　1.4　PCR反應體系的組成　　1.5　PCR所需設(shè)備和器材　　參考文獻　第2章　PCR技術(shù)的發(fā)展　　2.1　PCR新技術(shù)的發(fā)展　　2.2　其他核酸擴增技術(shù)的發(fā)展　　參考文獻　第3章　PCR技術(shù)在醫(yī)學研究領(lǐng)域中的應用　　3.1　PCR在醫(yī)學檢驗中的應用　　3.2　對PCR技術(shù)醫(yī)學應用的正確認識　　3.3　PCR技術(shù)在醫(yī)學應用中的管理　　參考文獻操作方法/技術(shù)篇 　第4章　常規(guī)PCR　　4.1　常規(guī)PCR反應體系說明　　4.2　PCR操作　　4.3　PCR條件優(yōu)化　　參考文獻　第5章　反轉(zhuǎn)錄PCR　　5.1　RT?PCR原理　　5.2　RNA的提取和純化　　5.3　RT?PCR的操作　　5.4　衍生技術(shù)——基因表達系列分析　　參考文獻　第6章　實時熒光定量PCR　　6.1　原理　　6.2　實驗操作與優(yōu)化　　6.3　實時定量PCR數(shù)據(jù)分析93 　　6.4　qPCR的常用軟件——Primer Express99 　　6.5　qPCR儀的選擇　　參考文獻　第7章　免疫PCR　　7.1　原理　　7.2　實驗操作　　7.3　條件優(yōu)化　　參考文獻　第8章　利用PCR構(gòu)建突變體　　8.1　定點突變　　8.2　隨機誘變PCR　　8.3　衍生技術(shù)　　參考文獻　第9章　未知序列的克隆　　9.1　RNA連接酶介導的cDNA 5′末端快速擴增　　9.2　單側(cè)特異性引物擴增未知DNA序列　　9.3　反向PCR　　參考文獻　第10章　其他醫(yī)學領(lǐng)域常見PCR技術(shù)　　10.1　PCR技術(shù)應用于病原微生物檢測鑒定　　10.2　遺傳性疾病診斷的常用PCR技術(shù)　　10.3　PCR技術(shù)在腫瘤方面的應用　　10.4　甲基化特異性PCR　　參考文獻　第11章　PCR軟件使用　　11.1　Oligo 6的使用　　11.2　PerlPrimer的使用　　11.3　引物在線設(shè)計常見問題解答 附錄

編輯推薦

　　《PCR聚合酶鏈反應》較全面地描述了生物制品生產(chǎn)及檢定用細胞的種類﹑生長特性﹑培養(yǎng)方法﹑檢測內(nèi)容﹑操作程序﹑判斷標準等內(nèi)容。

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