生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)

前言

　　生命科學(xué)在20世紀(jì)以來有了突飛猛進(jìn)的發(fā)展，生物化學(xué)是其中最活躍的分支學(xué)科之一。如今，生物化學(xué)的方法與理論已經(jīng)滲透到了生命科學(xué)中的每一分支學(xué)科，并對其他分支學(xué)科的發(fā)展起著關(guān)鍵的作用。生物化學(xué)同時(shí)也是一門實(shí)驗(yàn)性很強(qiáng)的科學(xué)。鑒于近幾十年來生物化學(xué)新內(nèi)容不斷補(bǔ)充，新的實(shí)驗(yàn)方法和技術(shù)不斷出現(xiàn)，為了跟上學(xué)科的發(fā)展，我們生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)課程教學(xué)一直采用自編的生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)講義，該講義每年都做些改動和更新。但最近幾年，隨著大學(xué)招生人數(shù)的增加，需要學(xué)習(xí)生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)這門課程的人數(shù)也逐年增加，一方面，考慮到自編講義再不能滿足學(xué)生學(xué)習(xí)的需要；另一方面，從近幾年的教學(xué)實(shí)踐中發(fā)現(xiàn)，現(xiàn)在的學(xué)生學(xué)習(xí)熱情高，但對一些常規(guī)的實(shí)驗(yàn)技術(shù)規(guī)范掌握得又不夠，很難在市面上找到一本既介紹基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)技術(shù)規(guī)范，同時(shí)又包含基本實(shí)驗(yàn)技術(shù)的簡明扼要的實(shí)驗(yàn)教材。由此，我們就有了出版該書的初衷。

內(nèi)容概要

本書由生物化學(xué)技術(shù)原理、生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)和附錄三部分組成。生物化學(xué)技術(shù)原理部分重點(diǎn)介紹常規(guī)的實(shí)驗(yàn)室技術(shù)，內(nèi)容盡可能地簡潔扼要。生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)部分除了一些生物化學(xué)基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)外，還突出了有關(guān)酶的綜合大實(shí)驗(yàn)及免疫化學(xué)實(shí)驗(yàn)的內(nèi)容，由基本實(shí)驗(yàn)、綜合性實(shí)驗(yàn)和選擇性實(shí)驗(yàn)三大模塊組成，其中既保留了一些旨在加強(qiáng)學(xué)生基本實(shí)驗(yàn)方法和技能訓(xùn)練的傳統(tǒng)實(shí)驗(yàn)，也引進(jìn)了一些新近發(fā)展起來的生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)。旨在培養(yǎng)學(xué)生的動手能力和良好的科研素質(zhì)，培養(yǎng)學(xué)生科研思維和獨(dú)立開展研究工作的能力。　　本教材適用于高等院校生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)、生物、醫(yī)藥和農(nóng)林等專業(yè)學(xué)生可根據(jù)各自特點(diǎn)選擇使用。本書各實(shí)驗(yàn)單元也可按照各高校的實(shí)際情況自行拆分組合。

書籍目錄

第一部分　生物化學(xué)技術(shù)原理　一、實(shí)驗(yàn)記錄與實(shí)驗(yàn)報(bào)告的書寫　二、實(shí)驗(yàn)室基本操作　?。ㄒ唬┎Ａx器的洗滌與清潔　?。ǘ┧芰掀髅蟮那逑础　。ㄈ┣逑匆旱脑砼c配制　?。ㄋ模┝科黝惖氖褂梅ā　。ㄎ澹┻^濾方法　?。┰嚬芗半x心管中液體的混勻操作　三、幾種常規(guī)儀器的使用　?。ㄒ唬┓止夤舛扔?jì)　?。ǘ╇娮犹炱健　。ㄈ└稍锵浜秃銣叵洹　。ㄋ模╇姛岷銣厮洹　。ㄎ澹╇x心機(jī)　四、生物大分子的制備及鑒定　?。ㄒ唬}析技術(shù)　?。ǘ┩肝龊统瑸V　?。ㄈp壓濃縮和冷凍干燥　五、層析技術(shù)　?。ㄒ唬┪綄游觥　。ǘ┓峙鋵游觥　。ㄈ╇x子交換層析　?。ㄋ模┠z過濾層析　?。ㄎ澹┯H和層析　六、電泳技術(shù)　?。ㄒ唬┗驹怼　。ǘ┯绊懹緞勇实囊蛩亍　。ㄈ╇娪炯夹g(shù)的種類第二部分　生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)　第一節(jié)　基本實(shí)驗(yàn)　　實(shí)驗(yàn)一　苯酚－硫酸法測定水溶性多糖　　實(shí)驗(yàn)二　氨基酸紙上層析　　實(shí)驗(yàn)三　糖的硅膠G薄層層析　　實(shí)驗(yàn)四　磷脂的分離與鑒定——薄層層析法　　實(shí)驗(yàn)五　甲醛滴定法定量測定氨基酸　　實(shí)驗(yàn)六　蛋白質(zhì)的兩性反應(yīng)和等電點(diǎn)的測定　　實(shí)驗(yàn)七　蛋白質(zhì)濃度的測定　　實(shí)驗(yàn)八　微量凱氏定氮法沒總蛋白氮　　實(shí)驗(yàn)九　核酸的定量測定　　實(shí)驗(yàn)十　維生素C的定量測定——2，6－二氯酚靛酚滴定法　第二節(jié)　綜合性實(shí)驗(yàn)　　實(shí)驗(yàn)一　蔗糖酶的提取及初提純　　實(shí)驗(yàn)二　蔗糖酶的純化——Q Sepharose－柱層析法　　實(shí)驗(yàn)三　蔗糖酶活力的測定　　實(shí)驗(yàn)四　蔗糖酶蛋白質(zhì)含量測定及比活力計(jì)算　　實(shí)驗(yàn)五　SDS-PAGE測定蛋白質(zhì)的相對分子質(zhì)量　　實(shí)驗(yàn)六　蔗糖酶的固定化及活力測定　第三節(jié)　選擇性實(shí)驗(yàn)　　實(shí)驗(yàn)一　底物濃度對酶促進(jìn)反應(yīng)速度的影響——米氏常數(shù)的測定　　實(shí)驗(yàn)二　酶的特異性、溫度、pH及激活劑對酶活性的影響　　實(shí)驗(yàn)三　大豆總異黃酮的提取及含量測定　　實(shí)驗(yàn)四　類胡蘿卜互的色層分析及鑒定　　實(shí)驗(yàn)五　組織DNA的提取及定量測定　　實(shí)驗(yàn)六　DNA瓊脂糖凝膠電泳　　實(shí)驗(yàn)七　紙電泳法定量分析腺苷三磷酸　　實(shí)驗(yàn)八　葡聚糖凝膠層析法測定蛋白質(zhì)的分子量　　實(shí)驗(yàn)九　酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（ELISA）測定乳汁中孕酮含量　　實(shí)驗(yàn)十　血清蛋白質(zhì)的層析分離——血清γ－球蛋白的分離純化（他子篩層析法）　　實(shí)驗(yàn)十一　血清蛋白質(zhì)的電泳分離——醋酸纖維素薄膜電泳　　　實(shí)驗(yàn)十二　脲酶的凝膠過濾分離純化　　實(shí)驗(yàn)十三　血清蛋白質(zhì)的聚丙烯酰胺凝膠等電聚焦電泳　　實(shí)驗(yàn)十四　肝糖原的提取和定量　　實(shí)驗(yàn)十五　蛋白質(zhì)印跡分析　　實(shí)驗(yàn)十六　單向定量免疫電泳附錄　一、生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)室規(guī)則　　二、實(shí)驗(yàn)室安全及防護(hù)知識　三、常用數(shù)據(jù)表參考文獻(xiàn)

章節(jié)摘錄

　　五、層析技術(shù)　　層析技術(shù)是近代生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)中常用的分析方法之一，任何層析過程都是在兩個相中進(jìn)行的，一是固定于支持物上的固定相，另一是流經(jīng)固定相的流動相。由于樣品中各組分理化性質(zhì)（如溶解度、吸附能力、分子形狀、分子所帶電荷的性質(zhì)和數(shù)量、分子表面的特殊基團(tuán)、分子量等）不同，表現(xiàn)出對固定相和流動相的親和力各不相同。當(dāng)混合物通過多孔的支持物時(shí)，它們受固定相的阻力和受流動相的推力也不同，各組分移動速度各異并在支持物上集中分布于不同的區(qū)域，從而使各組分得以分離?！　「鶕?jù)層析法中兩相的性質(zhì)和操作方法不同，層析法有許多類型，僅就幾種常用的方法介紹如下?！　。ㄒ唬┪綄游觥　∥綄游觯╝bsorption chromatography），吸附作用是指某些物質(zhì)能夠從溶液 中將溶質(zhì)濃集在其表面的現(xiàn)象。吸附劑吸附能力的強(qiáng)弱與被吸附物質(zhì)的化學(xué)結(jié)構(gòu)、 溶劑的本質(zhì)和吸附劑的本質(zhì)有關(guān)。當(dāng)改變吸附劑周圍溶劑成分時(shí)，吸附劑對被吸附 物質(zhì)的親和力便發(fā)生變化，使被吸附物質(zhì)從吸附劑上解脫下來，這一解脫過程稱為 “洗脫”或“展層”?！　∥綄游鍪前盐絼┭b入玻璃柱內(nèi)（吸附柱層析法）或鋪在玻璃板上（薄層層析法），由于吸附劑的吸附能力可受溶劑影響而發(fā)生改變，樣品中的物質(zhì)被吸附劑吸附后，用適當(dāng)?shù)南疵撘簺_洗，改變吸附劑的吸附能力，使之解吸，隨洗脫液向前移動。當(dāng)解吸下來的物質(zhì)向前移動時(shí)，遇到前面新的吸附劑又重新被吸附。此被吸附的物質(zhì)再被后來的洗脫液解脫下來。經(jīng)如此反復(fù)的吸附一解吸一再吸附一再解吸過程，物質(zhì)即可沿著洗脫液的前進(jìn)方向移動。其移動速度取決于吸附劑對該物質(zhì)的吸附能力。由于同一吸附劑對樣品中各組分的吸附能力不同，所以在洗脫過程中各組分便會由于移動速度不同而逐漸分離出來，這就是吸附層析的基本過程。　　實(shí)驗(yàn)中常用的固體吸附劑有氧化鋁、硅酸鎂、磷酸鈣、氫氧化鈣、活性鈣、蔗糖、纖維素和淀粉。常用的洗脫液有乙烷、苯乙醚、氯仿，以及乙醇、丙酮或水與有機(jī)溶劑形成的各種混合物，吸附層析通常用于分離脂類、類固醇類、類胡蘿卜素、葉綠素以及它們的前體等非極性和極性不強(qiáng)的有機(jī)物。

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