分子免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)指南

內(nèi)容概要

迄今，免疫學(xué)技術(shù)已廣泛應(yīng)用到生命科學(xué)研究的各個(gè)領(lǐng)域。本書涵蓋了目前常用的常規(guī)免疫學(xué)技術(shù)方法、分子生物學(xué)方法、生物信息學(xué)分析方法以及信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)研究常用的方法。除了簡單介紹各個(gè)常用實(shí)驗(yàn)技術(shù)的基本原理，還根據(jù)作者長年的工作經(jīng)驗(yàn)，在關(guān)鍵方法或步驟中提供了注意事項(xiàng)，歸納和闡述了具體實(shí)驗(yàn)中可能遭遇的問題和困惑，并對(duì)實(shí)驗(yàn)失敗的原因給予了分析。 　　本書適用于已經(jīng)開始或正計(jì)劃使用免疫學(xué)技術(shù)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)研究的本科生、研究生、科研工作者以及臨床檢驗(yàn)工作者。

書籍目錄

第一部分　常用免疫學(xué)技術(shù) 　第一章　蛋白質(zhì)分析與純化 　　第一節(jié)　蛋白質(zhì)濃度測(cè)定 　　　一、Bradford法 　　　二、Lowry法測(cè)蛋白質(zhì)含量 　　　三、紫外吸收法測(cè)蛋白質(zhì)含量 　　第二節(jié)　蛋白質(zhì)的聚丙烯酰胺凝膠電泳 　　第三節(jié)　Western印跡 　　第四節(jié)　蛋白質(zhì)純化 　　第五節(jié)　離子交換層析 　　第六節(jié)　親和層析 　　　一、谷胱甘肽親和層析 　　　二、金屬螯合親和層析 　　　三、Protein A、Protein G親和層析 　　第七節(jié)　疏水作用層析 　　參考文獻(xiàn) 　第二章　抗體制備技術(shù) 　　第一節(jié)　多克隆抗體的制備 　　　雙向免疫擴(kuò)散法測(cè)定抗血清效價(jià) 　　第二節(jié)　單克隆抗體的制備 　　　一、動(dòng)物免疫 　　　二、細(xì)胞融合技術(shù) 　　　三、雜交瘤細(xì)胞克隆化 　　　四、單抗亞類測(cè)定 　　　五、單克隆抗體的大量制備 　　　參考文獻(xiàn) 　第三章　抗體純化和標(biāo)記技術(shù) 　　第一節(jié)　抗體的純化 　　　一、IgG的純化 　　　二、IgM的純化 　　第二節(jié)　抗體片段的制備 　　　一、IgG片段的純化 　　　二、IgM片段的純化 　　第三節(jié)　放射性同位素標(biāo)記抗體技術(shù) 　　　一、氯胺T法 　　　二、Iodogen法 　　第四節(jié)　熒光素標(biāo)記抗體技術(shù) 　　第五節(jié)　酶標(biāo)記抗體技術(shù) 　　第六節(jié)　生物素標(biāo)記抗體技術(shù) 　　第七節(jié)　銪標(biāo)記抗體技術(shù) 　　第八節(jié)　膠體金標(biāo)記抗體技術(shù) 　　參考文獻(xiàn) 　　　第四章　免疫檢測(cè)技術(shù) 　　第一節(jié)　免疫熒光技術(shù) 　　　間接細(xì)胞免疫熒光技術(shù) 　　第二節(jié)　酶免疫技術(shù) 　　　一、雙抗體夾心法檢測(cè)抗原 　　　二、間接法測(cè)定抗體 　　　三、競爭法 　　第三節(jié)　放射免疫技術(shù) 　　　一、放射免疫分析 　　　二、免疫放射分析 　　第四節(jié)　化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù) 　　　化學(xué)發(fā)光酶聯(lián)免疫分析 　　　參考文獻(xiàn) 　第五章　免疫細(xì)胞分離技術(shù) 　　第一節(jié)　密度梯度分離技術(shù) 　　第二節(jié)　黏附分離技術(shù) 　　第三節(jié)　磁珠分離技術(shù) 　　第四節(jié)　流式細(xì)胞儀分離技術(shù) 　　參考文獻(xiàn) 　第六章　細(xì)胞功能檢測(cè) 　　第一節(jié)　細(xì)胞增殖試驗(yàn) 　　第二節(jié)　吞噬試驗(yàn) 　　第三節(jié)　細(xì)胞黏附試驗(yàn) 　　第四節(jié)　抗體依賴的細(xì)胞毒試驗(yàn) 　　第五節(jié)　補(bǔ)體介導(dǎo)的細(xì)胞毒試驗(yàn) 　　第六節(jié)　凋亡檢測(cè) 　　　一、細(xì)胞凋亡的形態(tài)學(xué)檢測(cè) 　　……　第七章　免疫組織化學(xué)和免疫電鏡 　第八章　細(xì)胞因子及其活性的檢測(cè) 第二部分　與分子免疫學(xué)有關(guān)的生物信息學(xué)　第九章　生物信息學(xué)簡介 　第十章　核酸與蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫 　第十一章　序列比對(duì)分析 　第十二章　核酸與蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè) 　第十三章　蛋白質(zhì)相互作用理論模擬 　第十四章　抗原表位預(yù)測(cè) 　第十五章　免疫信息學(xué) 　第十六章　免疫學(xué)相關(guān)重要Web網(wǎng)站的 第三部分　分子生物學(xué)技術(shù)　第十七章　基本分子生物學(xué)技術(shù) 　第十八章　PCR技術(shù) 　第十九章　分子文庫的構(gòu)建及篩選 　第二十章　分子雜交技術(shù) 　第二十一章　RNAi技術(shù) 第四部分　信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)常用研究技術(shù)　第二十二章　信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白的活化水平 　第二十三章　第二信使含量測(cè)定 　第二十四章　亞細(xì)胞定位分析 　第二十五章　蛋白?蛋白相互作用分析 　第二十六章　蛋白?DNA相互作用分析 　第二十七章　磷酸化多肽雙向作圖和磷酸 　　第二十八章　蛋白質(zhì)組學(xué)的雙向電泳與生物質(zhì)譜

章節(jié)摘錄

第二章　抗體制備技術(shù)第一節(jié) 多克隆抗體的制備【原理】當(dāng)將抗原注射人實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體內(nèi)時(shí)，抗原上不同表位（即抗原決定簇）刺激不同B細(xì)胞克隆，分化成一系列抗體生成細(xì)胞，因此，在血液中的抗體是針對(duì)抗原上不同抗原決定簇的抗體總和，稱為多克隆抗體。多克隆抗體中不同的抗體分子可以以不同的親和能力與抗原分子表面不同的部分——抗原決定簇相結(jié)合。將抗原導(dǎo)入敏感動(dòng)物體內(nèi)后，可刺激外周免疫器官，尤其是淋巴結(jié)和脾臟中的淋巴細(xì)胞大量增殖。如圖2.1所示，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物對(duì)初免次疫和二次免疫的應(yīng)答有明顯的不同。通常初免疫應(yīng)答往往比較弱，尤其是針對(duì)于易代謝、可溶性的抗原。首次注射后大約7天，在血清中可以觀察到抗體但抗體的濃度維持在一個(gè)較低的水平，在大約l0天左右抗體的滴度會(huì)到最大值。但同種抗原注射而產(chǎn)生的二次免疫應(yīng)答的結(jié)果明顯不同，和初次免疫應(yīng)答相比抗體的合成速度明顯增加并且保留時(shí)間也長。免疫應(yīng)答的動(dòng)山學(xué)結(jié)果取決于抗原和免疫動(dòng)物的種類，但初次和二次免疫應(yīng)答之間的關(guān)系是免疫應(yīng)答的一個(gè)重要特點(diǎn)。三次或以后的抗原注射所產(chǎn)生的應(yīng)答和二次應(yīng)答結(jié)果相似，即抗體的滴度明顯增加并且血清中抗體的種類和性質(zhì)發(fā)生了戰(zhàn)變，這種改變被稱為免疫應(yīng)答的成熟，具有重要的實(shí)際意義。通常在抗原注射4～6周后會(huì)產(chǎn)生具有高親和力的抗體。材料和試劑（1）實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：成年兔。（2）實(shí)驗(yàn)器材：特制兔盒，刀片，25G針頭，1ml。注射器，20mL血液收集管，藥鏟，離心機(jī)以及塑料離心管，加樣器及加樣管，燒杯。（3）實(shí)驗(yàn)試劑①抗原；乙醇；20mmol/l。磷酸緩沖溶液pH7 2。②弗氏完全佐劑和弗氏不完全佐劑。【實(shí)驗(yàn)步驟】（1）抗原的制備：由于純化的抗原適合產(chǎn)生特異性抗體，因此在注射前通常呆用一些典的方法，比如柱層析、分級(jí)萃取、亞細(xì)胞分離等進(jìn)行抗原的分離和純化。如果多肽抗原SDS/PAGE中為可見的單一帶，抗原從凝凝中的抽提可作為純化的最后一個(gè)步驟。

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