臨床分子生物學(xué)檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)

內(nèi)容概要

本教材分二十六個(gè)實(shí)驗(yàn)及自主設(shè)計(jì)性實(shí)驗(yàn)。第一部分分子生物學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)實(shí)驗(yàn)室，包括分子生物學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)實(shí)驗(yàn)須知、分子生物學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)實(shí)驗(yàn)室介紹、分子生物學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)常用儀器及分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室生物安全。實(shí)驗(yàn)內(nèi)容包括六大部分：核酸的分離與純化；核酸擴(kuò)增技術(shù)；核酸分子雜交技術(shù)；分子克隆技術(shù)；其他分子檢驗(yàn)技術(shù)及自主設(shè)計(jì)性實(shí)驗(yàn)。每個(gè)實(shí)驗(yàn)包括原理、器材、試劑、操作步驟、結(jié)果討論、注意事項(xiàng)、臨床意義。附錄包括常用試劑和緩沖液的配制等。有的實(shí)驗(yàn)內(nèi)還包含若干個(gè)小實(shí)驗(yàn)供選擇，各校可根據(jù)自身?xiàng)l件、要求的不同，進(jìn)行取舍和組合，建議實(shí)驗(yàn)教學(xué)時(shí)數(shù)為30~60學(xué)時(shí)。
本書具有以下特點(diǎn)：①注重對(duì)學(xué)生進(jìn)行分子生物學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)的基礎(chǔ)知識(shí)和技能的訓(xùn)練，從微量取液器的使用到分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室的規(guī)范操作及基本的實(shí)驗(yàn)。分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中的試劑配制非常復(fù)雜，我們力求盡量詳細(xì)，以方便教學(xué)；②注重對(duì)有臨床應(yīng)用或者有應(yīng)用前景的分子生物學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)及項(xiàng)目的介紹，如PCR技術(shù)、基礎(chǔ)突變的檢測(cè)等；⑧注重對(duì)綜合性、設(shè)計(jì)性、研究性實(shí)驗(yàn)的介紹，加強(qiáng)對(duì)學(xué)生綜合分析能力的培養(yǎng)：實(shí)驗(yàn)中有的部分是根據(jù)科研課題改編而成，內(nèi)容新，方法先進(jìn)，更有利于學(xué)生掌握新知識(shí)、新技術(shù)；④自主設(shè)計(jì)性實(shí)驗(yàn)的開設(shè)，能開拓學(xué)生思維，提高學(xué)生的創(chuàng)新能力。

書籍目錄

第一部分　分子生物學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)實(shí)驗(yàn)室
　一、分子生物學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)實(shí)驗(yàn)須知
　二、分子生物學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)實(shí)驗(yàn)室介紹
　三、分子生物學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)常用儀器
　四、分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室生物安全
第二部分　核酸的分　離與純化
　實(shí)驗(yàn)一 真核基因組DNA的分離與純化
　實(shí)驗(yàn)二 真核細(xì)胞mRNA的分離與純化
　實(shí)驗(yàn)三 質(zhì)粒DNA的提取
　實(shí)驗(yàn)四 核酸的鑒定
第三部分　核酸擴(kuò)增技術(shù)
　實(shí)驗(yàn)五 聚合酶鏈反應(yīng)
　實(shí)驗(yàn)六 PCRRFLP檢測(cè)Nras癌基因突變
　實(shí)驗(yàn)七 等位基因特異性擴(kuò)增法檢測(cè)結(jié)核分枝桿菌rpoB基因突變
　實(shí)驗(yàn)八 TRAP銀染法檢測(cè)端粒酶活性
　實(shí)驗(yàn)九 多重PCR檢測(cè)d地中海貧血基因缺失
　實(shí)驗(yàn)十 PCR-SSCP檢測(cè)凝血因子V基因突變
　實(shí)驗(yàn)十一 實(shí)時(shí)PCR檢測(cè)乙型肝炎病毒(HBV)核酸
　實(shí)驗(yàn)十二 反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)檢測(cè)fl-actin mRNA
第四部分　核酸分子雜交技術(shù)
　實(shí)驗(yàn)十三 探針的制備
　實(shí)驗(yàn)十四 DNA分子雜交
　實(shí)驗(yàn)十五 RNA分子雜交
　實(shí)驗(yàn)十六 熒光原位雜交
　實(shí)驗(yàn)十七 用反向點(diǎn)雜法進(jìn)行p一地中海貧血基因診斷
第五部分分子克隆技術(shù)
　實(shí)驗(yàn)十八 質(zhì)粒DNA的限制性內(nèi)切酶酶切
　實(shí)驗(yàn)十九 目的片段的連接
　實(shí)驗(yàn)二十 感受態(tài)細(xì)胞的制備及重組子轉(zhuǎn)化
　實(shí)驗(yàn)二十一 重組子的鑒定
第六部分其他分子檢驗(yàn)技術(shù)
　實(shí)驗(yàn)二十二 真核細(xì)胞基因轉(zhuǎn)染技術(shù)
　實(shí)驗(yàn)二十三 Western印跡
　實(shí)驗(yàn)二十四 雙向聚丙烯酰胺凝膠電泳
　實(shí)驗(yàn)二十五 HLA基因分型
　實(shí)驗(yàn)二十六 乙型肝炎病毒基因分型(芯片法)
第七部分 自主設(shè)計(jì)性實(shí)驗(yàn)
附錄 分子生物學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)實(shí)驗(yàn)中常用試劑和緩沖液的配制

章節(jié)摘錄

版權(quán)頁(yè)：插圖：（2）每天實(shí)驗(yàn)結(jié)束之后一定要滅菌實(shí)驗(yàn)臺(tái)及安全操作裝置。如實(shí)驗(yàn)中發(fā)生污染，需立即加以滅菌。（3）與實(shí)驗(yàn)有關(guān)之生物材料之廢棄物，在丟棄前需做滅菌處理。被污染的器具需先經(jīng)高壓滅菌后，再清洗使用或丟棄。（4）不得用口做吸量操作。（5）實(shí)驗(yàn)室內(nèi)禁止飲食、吸煙及保存食物。（6）操作重組體時(shí)需戴手套以防污染，操作完畢后及離開實(shí)驗(yàn)室前需洗手。（7）在所有的操作中，應(yīng)盡量避免產(chǎn)生氣霧（例如，把燒熱的接種用白金環(huán)及接種針插入培養(yǎng)基時(shí)，若發(fā)生大量氣霧，就可能造成污染）。亦應(yīng)避免將吸管或針筒內(nèi)之液體用力射出。（8）要從實(shí)驗(yàn)室搬離被污染物品時(shí)，必須將其放入堅(jiān)固且不外漏的容器，并在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)密封之后，才可運(yùn)出。（9）防除實(shí)驗(yàn)室的非實(shí)驗(yàn)用生物，如昆蟲及鼠類等。（10）若有其他方法可用，應(yīng)避免使用針頭。（11）實(shí)驗(yàn)室內(nèi)，要穿著實(shí)驗(yàn)衣，離開前要脫掉。（12）禁止對(duì)實(shí)驗(yàn)性質(zhì)不了解的人進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室。（13）實(shí)驗(yàn)進(jìn)行中，要在實(shí)驗(yàn)室之入口，標(biāo)示“P2級(jí)實(shí)驗(yàn)室”，并掛上“P2級(jí)實(shí)驗(yàn)進(jìn)行中”的標(biāo)示。而且保存重組體之冰箱及冷凍庫(kù)也要做同樣的標(biāo)示。（14）實(shí)驗(yàn)室要經(jīng)常清理，保持清潔，不得放置與實(shí)驗(yàn)無關(guān)的物品。（15）安全操作裝置內(nèi)的HEPA過濾器，在更換前、定期檢查時(shí)及實(shí)驗(yàn)內(nèi)容變更時(shí)，需密封安全操作裝置。（16）若在此級(jí)實(shí)驗(yàn)室內(nèi)同時(shí)進(jìn)行P1級(jí)的實(shí)驗(yàn)時(shí)，需明確劃分實(shí)驗(yàn)區(qū)域，小心進(jìn)行操作。（二）基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室是以體外擴(kuò)增檢測(cè)DNA或RNA為目的的實(shí)驗(yàn)室。由于體外基因擴(kuò)增的高靈敏度，因此對(duì)其實(shí)驗(yàn)室有較嚴(yán)格的要求。基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室應(yīng)嚴(yán)格分區(qū)操作，各個(gè)區(qū)域需要有專用的儀器設(shè)備。一般要求基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)在四個(gè)分隔開的工作區(qū)域內(nèi)進(jìn)行，即分成四個(gè)區(qū)：試劑貯存和準(zhǔn)備區(qū)、樣本制備區(qū)、擴(kuò)增反應(yīng)混合物配制和擴(kuò)增區(qū)、擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)。試劑貯存和準(zhǔn)備區(qū)主要進(jìn)行貯存試劑的制備、試劑的分裝和主反應(yīng)混合液的制備。此區(qū)域需配備的儀器設(shè)備有普通冰箱、混勻器、微量移液器及消耗品等。樣本制各區(qū)主要進(jìn)行樣本的處理與保存、核酸（DNA、RNA）提取、貯存及加入到擴(kuò)增反應(yīng)管和測(cè)定mRNA時(shí)cDNA的合成等。需要配備的儀器設(shè)備包括普通冰箱、低溫冰箱、高速臺(tái)式離心機(jī)、混勻器、水浴箱、微量移液器、超凈工作臺(tái)等。擴(kuò)增反應(yīng)混合物配制和擴(kuò)增區(qū)主要進(jìn)行DNA或cDNA的擴(kuò)增。由于擴(kuò)增后的核酸量特別大，是最易導(dǎo)致污染（即所謂“產(chǎn)物污染”）的地方。配備的儀器設(shè)備包括核酸擴(kuò)增儀，微量移液器等。最后一個(gè)區(qū)域是擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)，主要進(jìn)行擴(kuò)增產(chǎn)物的分析、鑒定，如瓊脂糖凝膠電泳、聚丙烯酰胺凝膠電泳、膜上或微孔板上探針雜交、印跡轉(zhuǎn)移、核酸測(cè)序等。（三）細(xì)胞培養(yǎng)室細(xì)胞培養(yǎng)室是進(jìn)行體外培養(yǎng)工作的實(shí)驗(yàn)室，它有別于一般的實(shí)驗(yàn)室。細(xì)胞培養(yǎng)室最好是按標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)室的設(shè)計(jì)方案建立專用的實(shí)驗(yàn)室，設(shè)計(jì)原則是防止微生物污染和有害物的影響，環(huán)境要求清潔、空氣清新、無塵和干燥。

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《臨床分子生物學(xué)檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)(第3版)》供醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)專業(yè)用。

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