臨床分子生物學(xué)檢驗實驗指導(dǎo)

內(nèi)容概要

本教材分二十六個實驗及自主設(shè)計性實驗。第一部分分子生物學(xué)檢驗技術(shù)實驗室，包括分子生物學(xué)檢驗技術(shù)實驗須知、分子生物學(xué)檢驗技術(shù)實驗室介紹、分子生物學(xué)檢驗技術(shù)常用儀器及分子生物學(xué)實驗室生物安全。實驗內(nèi)容包括六大部分：核酸的分離與純化；核酸擴增技術(shù)；核酸分子雜交技術(shù)；分子克隆技術(shù)；其他分子檢驗技術(shù)及自主設(shè)計性實驗。每個實驗包括原理、器材、試劑、操作步驟、結(jié)果討論、注意事項、臨床意義。附錄包括常用試劑和緩沖液的配制等。有的實驗內(nèi)還包含若干個小實驗供選擇，各?？筛鶕?jù)自身條件、要求的不同，進行取舍和組合，建議實驗教學(xué)時數(shù)為30~60學(xué)時。
本書具有以下特點：①注重對學(xué)生進行分子生物學(xué)檢驗技術(shù)的基礎(chǔ)知識和技能的訓(xùn)練，從微量取液器的使用到分子生物學(xué)實驗室的規(guī)范操作及基本的實驗。分子生物學(xué)實驗中的試劑配制非常復(fù)雜，我們力求盡量詳細，以方便教學(xué)；②注重對有臨床應(yīng)用或者有應(yīng)用前景的分子生物學(xué)檢驗技術(shù)及項目的介紹，如PCR技術(shù)、基礎(chǔ)突變的檢測等；⑧注重對綜合性、設(shè)計性、研究性實驗的介紹，加強對學(xué)生綜合分析能力的培養(yǎng)：實驗中有的部分是根據(jù)科研課題改編而成，內(nèi)容新，方法先進，更有利于學(xué)生掌握新知識、新技術(shù)；④自主設(shè)計性實驗的開設(shè)，能開拓學(xué)生思維，提高學(xué)生的創(chuàng)新能力。

書籍目錄

第一部分　分子生物學(xué)檢驗技術(shù)實驗室
　一、分子生物學(xué)檢驗技術(shù)實驗須知
　二、分子生物學(xué)檢驗技術(shù)實驗室介紹
　三、分子生物學(xué)檢驗技術(shù)常用儀器
　四、分子生物學(xué)實驗室生物安全
第二部分　核酸的分　離與純化
　實驗一 真核基因組DNA的分離與純化
　實驗二 真核細胞mRNA的分離與純化
　實驗三 質(zhì)粒DNA的提取
　實驗四 核酸的鑒定
第三部分　核酸擴增技術(shù)
　實驗五 聚合酶鏈反應(yīng)
　實驗六 PCRRFLP檢測Nras癌基因突變
　實驗七 等位基因特異性擴增法檢測結(jié)核分枝桿菌rpoB基因突變
　實驗八 TRAP銀染法檢測端粒酶活性
　實驗九 多重PCR檢測d地中海貧血基因缺失
　實驗十 PCR-SSCP檢測凝血因子V基因突變
　實驗十一 實時PCR檢測乙型肝炎病毒(HBV)核酸
　實驗十二 反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)檢測fl-actin mRNA
第四部分　核酸分子雜交技術(shù)
　實驗十三 探針的制備
　實驗十四 DNA分子雜交
　實驗十五 RNA分子雜交
　實驗十六 熒光原位雜交
　實驗十七 用反向點雜法進行p一地中海貧血基因診斷
第五部分分子克隆技術(shù)
　實驗十八 質(zhì)粒DNA的限制性內(nèi)切酶酶切
　實驗十九 目的片段的連接
　實驗二十 感受態(tài)細胞的制備及重組子轉(zhuǎn)化
　實驗二十一 重組子的鑒定
第六部分其他分子檢驗技術(shù)
　實驗二十二 真核細胞基因轉(zhuǎn)染技術(shù)
　實驗二十三 Western印跡
　實驗二十四 雙向聚丙烯酰胺凝膠電泳
　實驗二十五 HLA基因分型
　實驗二十六 乙型肝炎病毒基因分型(芯片法)
第七部分 自主設(shè)計性實驗
附錄 分子生物學(xué)檢驗技術(shù)實驗中常用試劑和緩沖液的配制

章節(jié)摘錄

版權(quán)頁：插圖：（2）每天實驗結(jié)束之后一定要滅菌實驗臺及安全操作裝置。如實驗中發(fā)生污染，需立即加以滅菌。（3）與實驗有關(guān)之生物材料之廢棄物，在丟棄前需做滅菌處理。被污染的器具需先經(jīng)高壓滅菌后，再清洗使用或丟棄。（4）不得用口做吸量操作。（5）實驗室內(nèi)禁止飲食、吸煙及保存食物。（6）操作重組體時需戴手套以防污染，操作完畢后及離開實驗室前需洗手。（7）在所有的操作中，應(yīng)盡量避免產(chǎn)生氣霧（例如，把燒熱的接種用白金環(huán)及接種針插入培養(yǎng)基時，若發(fā)生大量氣霧，就可能造成污染）。亦應(yīng)避免將吸管或針筒內(nèi)之液體用力射出。（8）要從實驗室搬離被污染物品時，必須將其放入堅固且不外漏的容器，并在實驗室內(nèi)密封之后，才可運出。（9）防除實驗室的非實驗用生物，如昆蟲及鼠類等。（10）若有其他方法可用，應(yīng)避免使用針頭。（11）實驗室內(nèi)，要穿著實驗衣，離開前要脫掉。（12）禁止對實驗性質(zhì)不了解的人進入實驗室。（13）實驗進行中，要在實驗室之入口，標(biāo)示“P2級實驗室”，并掛上“P2級實驗進行中”的標(biāo)示。而且保存重組體之冰箱及冷凍庫也要做同樣的標(biāo)示。（14）實驗室要經(jīng)常清理，保持清潔，不得放置與實驗無關(guān)的物品。（15）安全操作裝置內(nèi)的HEPA過濾器，在更換前、定期檢查時及實驗內(nèi)容變更時，需密封安全操作裝置。（16）若在此級實驗室內(nèi)同時進行P1級的實驗時，需明確劃分實驗區(qū)域，小心進行操作。（二）基因擴增實驗室基因擴增實驗室是以體外擴增檢測DNA或RNA為目的的實驗室。由于體外基因擴增的高靈敏度，因此對其實驗室有較嚴(yán)格的要求?；驍U增實驗室應(yīng)嚴(yán)格分區(qū)操作，各個區(qū)域需要有專用的儀器設(shè)備。一般要求基因擴增實驗在四個分隔開的工作區(qū)域內(nèi)進行，即分成四個區(qū)：試劑貯存和準(zhǔn)備區(qū)、樣本制備區(qū)、擴增反應(yīng)混合物配制和擴增區(qū)、擴增產(chǎn)物分析區(qū)。試劑貯存和準(zhǔn)備區(qū)主要進行貯存試劑的制備、試劑的分裝和主反應(yīng)混合液的制備。此區(qū)域需配備的儀器設(shè)備有普通冰箱、混勻器、微量移液器及消耗品等。樣本制各區(qū)主要進行樣本的處理與保存、核酸（DNA、RNA）提取、貯存及加入到擴增反應(yīng)管和測定mRNA時cDNA的合成等。需要配備的儀器設(shè)備包括普通冰箱、低溫冰箱、高速臺式離心機、混勻器、水浴箱、微量移液器、超凈工作臺等。擴增反應(yīng)混合物配制和擴增區(qū)主要進行DNA或cDNA的擴增。由于擴增后的核酸量特別大，是最易導(dǎo)致污染（即所謂“產(chǎn)物污染”）的地方。配備的儀器設(shè)備包括核酸擴增儀，微量移液器等。最后一個區(qū)域是擴增產(chǎn)物分析區(qū)，主要進行擴增產(chǎn)物的分析、鑒定，如瓊脂糖凝膠電泳、聚丙烯酰胺凝膠電泳、膜上或微孔板上探針雜交、印跡轉(zhuǎn)移、核酸測序等。（三）細胞培養(yǎng)室細胞培養(yǎng)室是進行體外培養(yǎng)工作的實驗室，它有別于一般的實驗室。細胞培養(yǎng)室最好是按標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)室的設(shè)計方案建立專用的實驗室，設(shè)計原則是防止微生物污染和有害物的影響，環(huán)境要求清潔、空氣清新、無塵和干燥。

編輯推薦

《臨床分子生物學(xué)檢驗實驗指導(dǎo)(第3版)》供醫(yī)學(xué)檢驗專業(yè)用。

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