醫(yī)學(xué)分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)

內(nèi)容概要

這本《醫(yī)學(xué)分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)(供臨床醫(yī)學(xué)等專業(yè)用第2版)》由藥立波主編，讀者對(duì)象定位于高等醫(yī)藥院校及研究機(jī)構(gòu)的碩士和博士研究生。主要是作為醫(yī)學(xué)研究生分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)課必修課或選修課教材，同時(shí)也可以作為醫(yī)學(xué)院校研究生課題研究過(guò)程中分子生物學(xué)技術(shù)選擇和應(yīng)用的參考用書(shū)。本書(shū)的主要目的是幫助研究生理解各種分子生物學(xué)技術(shù)的基本原理、主要用途和主要流程，學(xué)會(huì)在研究中正確選用適合各自課題所需求的分子生物學(xué)技術(shù)。

書(shū)籍目錄

緒論
第一章  聚合酶鏈反應(yīng)
  第一節(jié)  PCR技術(shù)概述
  第二節(jié)  PCR的引物設(shè)計(jì)和條件優(yōu)化
  第三節(jié)  PCR產(chǎn)物的鑒定方法
  第四節(jié)  PCR的基本類型及應(yīng)用
  第五節(jié)  實(shí)時(shí)定量PCR
第二章  DNA體外重組
  第一節(jié)  DNA體外重組的基本流程
  第二節(jié)  載體的選擇及準(zhǔn)備
  第三節(jié)  目的DNA片段的獲取
  第四節(jié)  DNA片段與載體的連接
  第五節(jié)  重組DNA轉(zhuǎn)化宿豐細(xì)胞
  第六節(jié)  重組DNA的克隆篩選及鑒定
第三章  DNA序列分析技術(shù)
  第一節(jié)  常規(guī)DNA序列測(cè)定的原理
  第二節(jié)  自動(dòng)激光熒光DNA測(cè)序——第一代測(cè)序技術(shù)
  第三節(jié)  其他DNA序列分析新技術(shù)
第四章  基因突變技術(shù)
  第一節(jié)  體外基因突變和鑒定
  第二節(jié)  細(xì)胞和動(dòng)物的基因誘變和鑒定
第五章  核酸分子雜交
  第一節(jié)  核酸探針及其標(biāo)記
  第二節(jié)  Southem印跡雜交
  第三節(jié)  Northem印跡雜交
  第四節(jié)  其他核酸分子雜交
第六章  外源基因在原核細(xì)胞的表達(dá)
  第一節(jié)  常用表達(dá)系統(tǒng)及其選擇
  第二節(jié)  外源基因的表達(dá)和鑒定
  第三節(jié)  外源基因表達(dá)條件和優(yōu)化
  第四節(jié)  外源基因原核表達(dá)的基本操作
第七章  外源基因在真核細(xì)胞中的表達(dá)
  第一節(jié)  真核表達(dá)載體及宿主
  第二節(jié)  真核細(xì)胞基因?qū)敕椒?br />  第三節(jié)  外源基因在酵母細(xì)胞中的表達(dá)
  第四節(jié)  外源基因在昆蟲(chóng)細(xì)胞中的表達(dá)
  第五節(jié)  外源基因在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中的表達(dá)
第八章  蛋白質(zhì)的分離純化
  第一節(jié)  蛋白質(zhì)分離純化的基本原則
  第二節(jié)  生物樣品的預(yù)處理
  第三節(jié)  蛋白質(zhì)樣品的粗分離
  第四節(jié)  蛋白質(zhì)的層析純化
  第五節(jié)  蛋白質(zhì)的電泳分離和鑒定
  第六節(jié)  純化蛋白質(zhì)的后期處理
  第七節(jié)  蛋白質(zhì)分離純化的綜合策略
第九章  蛋白質(zhì)的定性定量分析
  第一節(jié)  蛋白質(zhì)分子量的測(cè)定
  第二節(jié)  蛋門質(zhì)的等電點(diǎn)測(cè)定
  第三節(jié)  蛋白質(zhì)總含量測(cè)定
  第四節(jié)  特定蛋白質(zhì)的含量測(cè)定
  第五節(jié)  蛋白質(zhì)半衰期測(cè)定
第十章  蛋白的化學(xué)修飾分析
  第一節(jié)  蛋白磷酸化分析
  第二節(jié)  蛋白糖基化分析
  第三節(jié)  其他蛋白共價(jià)修飾分析
第十一章  蛋白質(zhì)的空間結(jié)構(gòu)分析
  第一節(jié)  蛋白質(zhì)的一級(jí)結(jié)構(gòu)分析
  第二節(jié)  蛋白質(zhì)的二級(jí)結(jié)構(gòu)分析
  第三節(jié)  蛋白質(zhì)的晶體空間結(jié)構(gòu)解析
  第四節(jié)  蛋白質(zhì)的液相空間結(jié)構(gòu)解析
  第五節(jié)  蛋白質(zhì)空間結(jié)構(gòu)的預(yù)測(cè)
  第六節(jié)  蛋白質(zhì)的分子結(jié)構(gòu)對(duì)接
第十二章  蛋白質(zhì)相互作用研究技術(shù)
  第一節(jié)  酵母雙雜交法
  第二節(jié)  標(biāo)簽融合蛋白結(jié)合實(shí)驗(yàn)
  第三節(jié)  免疫共沉淀分析
  第四節(jié)  物理學(xué)方法研究蛋白-蛋白相互作用
  第五節(jié)  蛋白-蛋白相互作用預(yù)測(cè)方法
第十三章  蛋白質(zhì)組學(xué)研究相關(guān)技術(shù)
  第一節(jié)  蛋白質(zhì)組雙向凝膠電泳-質(zhì)譜研究技術(shù)
  第二節(jié)  基于多維層析質(zhì)譜的蛋白質(zhì)組研究策略
  第三節(jié)  定量蛋白質(zhì)組學(xué)研究技術(shù)
第十四章  基因表達(dá)譜分析
  第一節(jié)  基因表達(dá)譜分析的基本方法
  第二節(jié)  基因芯片的原理及應(yīng)用
  第三節(jié)  基因芯片的數(shù)據(jù)挖掘
  第四節(jié)  蛋白質(zhì)芯片的原理及應(yīng)用
第十五章  基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控分析
  第一節(jié)  轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)蛋白與DNA的結(jié)合分析
  第二節(jié)  啟動(dòng)子轉(zhuǎn)錄活性分析
  第三節(jié)  DNA甲基化分析
  第四節(jié)  芯片技術(shù)在基因表達(dá)調(diào)控研究中的應(yīng)用
第十六章  非編碼RNA研究策略與方法
  第一節(jié)  miRNA的研究策略及相關(guān)技術(shù)
  第二節(jié)  siRNA的設(shè)計(jì)與應(yīng)用
第十七章  疾病相關(guān)基因的鑒定和分析
  第一節(jié)  鑒定和分析疾病相關(guān)基因的策略
  第二節(jié)  基因分型
  第三節(jié)  突變基因的檢測(cè)
第十八章  遺傳修飾動(dòng)物
  第一節(jié)  小鼠實(shí)驗(yàn)的一般要求
  第二節(jié)  轉(zhuǎn)基因小鼠
  第三節(jié)  基因剔除小鼠
第十九章  基因功能的研究策略
  第一節(jié)  從分子水平研究基因產(chǎn)物的功能特點(diǎn)
  第二節(jié)  從細(xì)胞水平研究基因產(chǎn)物的作用機(jī)制
  第三節(jié)  從整體水平研究基因產(chǎn)物的牛物學(xué)效應(yīng)
附錄
  附錄Ⅰ分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)中的常見(jiàn)錯(cuò)誤
  附錄Ⅱ分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)微量操作技巧
  附錄Ⅲ分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)實(shí)施方案
  附錄Ⅳ分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)資料參考
英中文名詞對(duì)照索引

章節(jié)摘錄

　　分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的可靠性依賴于可重復(fù)性。從來(lái)不可以依據(jù)一次實(shí)驗(yàn)的數(shù)據(jù)來(lái)作出結(jié)論，得到的所有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)都應(yīng)該至少有3次以上的重復(fù)驗(yàn)證；對(duì)于需要主觀判斷的數(shù)據(jù)，如對(duì)形態(tài)學(xué)結(jié)果的人工判讀，最好由多位專業(yè)人員依照相同標(biāo)準(zhǔn)各自獨(dú)立地判讀，再對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。只有可靠的數(shù)據(jù)才能引導(dǎo)你的研究保持正確的方向?！　o(wú)論在任何情況下，都不能人為地改動(dòng)甚至編造數(shù)據(jù)。從事科學(xué)研究需要有專業(yè)奉獻(xiàn)精神和足夠的耐心，不懼風(fēng)險(xiǎn)。人們進(jìn)入科學(xué)研究領(lǐng)域的動(dòng)機(jī)不同，共同的是：只有始終保持對(duì)自然的好奇心和專業(yè)進(jìn)取心，才能身心愉快地應(yīng)對(duì)實(shí)驗(yàn)中的失敗?！　?.數(shù)據(jù)的歸納和保存及時(shí)歸納和整理數(shù)據(jù)，做出必要的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，可以幫助你看到所研究問(wèn)題的實(shí)際趨勢(shì)，從而及時(shí)作出是繼續(xù)實(shí)驗(yàn)，還是適可而止、節(jié)約時(shí)間和資源的決定。數(shù)據(jù)的歸納和整理依賴于高質(zhì)量的實(shí)驗(yàn)記錄。所有實(shí)驗(yàn)所涉及的事項(xiàng)均應(yīng)詳細(xì)記錄，包括重要試劑的生產(chǎn)批次、用量、制備和稀釋方法，反應(yīng)的溫度和時(shí)間，樣品處理方法，測(cè)定用儀器和條件。所有測(cè)定的原始數(shù)據(jù)均應(yīng)翔實(shí)記錄。好的實(shí)驗(yàn)記錄幫助你整理出有意義的結(jié)論，也幫助你找出實(shí)驗(yàn)失敗的原因?！　?.數(shù)據(jù)的意義在分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中，由于主觀或客觀原因，我們不可能總是獲得期望的數(shù)據(jù)，更多的情況下得到的是不理想的結(jié)果。需要仔細(xì)分析這些數(shù)據(jù)，才能分辨出哪些對(duì)自己提出的科學(xué)問(wèn)題是支持的，哪些可能是否定自己的預(yù)期答案的。盡管我們提倡否定思維，但是這并不意味著剛一拿到陰性數(shù)據(jù)就直接否定自己原來(lái)的想法。細(xì)胞活動(dòng)十分復(fù)雜，對(duì)外源信號(hào)的反應(yīng)可能會(huì)被許多因素所掩蓋，如細(xì)胞密度、血清濃度等。我們需要仔細(xì)分析所獲數(shù)據(jù)的條件，才能獲得真正的分子變化規(guī)律。一些出乎意外的實(shí)驗(yàn)結(jié)果往往是重要發(fā)現(xiàn)的出發(fā)點(diǎn)，關(guān)鍵是我們必須有理論和技術(shù)準(zhǔn)備來(lái)面對(duì)這些數(shù)據(jù)?！　?.數(shù)據(jù)的交流剛進(jìn)入科研領(lǐng)域的研究生在實(shí)驗(yàn)中遇到問(wèn)題，應(yīng)該隨時(shí)向周圍有經(jīng)驗(yàn)的同事和導(dǎo)師請(qǐng)教和討論，有些問(wèn)題他們不一定有直接的答案，但是可以提出解決問(wèn)題的線索，因?yàn)樗麄冇羞^(guò)更多失敗的教訓(xùn)。千萬(wàn)不可自己埋頭苦干，重復(fù)別人走過(guò)的很多彎路?！　∪绻玫降膶?shí)驗(yàn)結(jié)果并非預(yù)期，需要鑒別問(wèn)題是技術(shù)性的，還是全局的。在許多情況下，問(wèn)題是技術(shù)性的，是由于實(shí)驗(yàn)條件的不同或操作程序?qū)е?，此時(shí)可以變化條件、檢查操作步驟，以保證獲得的數(shù)據(jù)無(wú)論是否符合自己的預(yù)期，但都是可靠的。全局性的問(wèn)題指的是原本的假設(shè)有偏差或不足，在這種情況下，需要將實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)全面考慮，進(jìn)行補(bǔ)充。遇到技術(shù)性的問(wèn)題，需要和導(dǎo)師及同事加強(qiáng)討論，進(jìn)行修正。對(duì)于課題存在的根本性問(wèn)題，需要再次閱讀文獻(xiàn)，考慮是否在課題的設(shè)計(jì)上進(jìn)行改進(jìn)，甚至更換?！　∪绾闻袛嘌芯窟M(jìn)程是否合理？存在什么問(wèn)題？除了自己思考以外，可以將已經(jīng)獲得的數(shù)據(jù)進(jìn)行整理，無(wú)論是否有機(jī)會(huì)在討論會(huì)上做報(bào)告，都可以將自己的數(shù)據(jù)按照做報(bào)告的形式（如電子幻燈）來(lái)整理，理順研究背景、研究目標(biāo)、研究?jī)?nèi)容、技術(shù)路線，將已獲得的數(shù)據(jù)按照研究?jī)?nèi)容呈現(xiàn)給同事，可以提出問(wèn)題討論；如沒(méi)有機(jī)會(huì)報(bào)告，想象別人會(huì)提出哪些問(wèn)題來(lái)質(zhì)疑這些數(shù)據(jù)，然后試圖回答這些問(wèn)題，在這一過(guò)程中，思路將會(huì)得到完善。很少有研究課題會(huì)始終沿著最初的設(shè)想完成，不斷地修訂計(jì)劃才能引導(dǎo)你保持正確的方向?！　≡诮涣髦?，難免會(huì)遇到對(duì)你的數(shù)據(jù)或結(jié)論的否定意見(jiàn)。不管這些意見(jiàn)出自何人、出于什么樣的目的，對(duì)你的實(shí)驗(yàn)都會(huì)有幫助?？陀^地從質(zhì)疑中獲得完善研究思路和設(shè)計(jì)的信息是最聰明的應(yīng)對(duì)質(zhì)疑的方式?！　　?/pre>








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