現(xiàn)代病原生物學研究技術

內(nèi)容概要

本書是一本比較全面的病原生物學研究技術指導用書。書中主要涉及現(xiàn)代生物學技術、分子生物學技術、免疫學技術、遺傳與進化技術，以及基因組、蛋白組、轉(zhuǎn)錄組、代謝組等組學技術。

書籍目錄

第一章 核酸的分離與純化
第二章 目的基因的獲取
第三章 基因的擴增及鑒定
第四章 基因的克隆與鑒定
第五章 基因的表達與分析
第六章 表達產(chǎn)物的分離、純化與鑒定
第七章 蛋白質(zhì)功能
第八章 芯片技術
第九章 組學技術
第十章 基因多態(tài)性及種群遺傳
第十一章 免疫學技術
第十二章 疫苗研究
第十三章 診斷技術
第十四章 轉(zhuǎn)基因技術
第十五章 微生物培養(yǎng)技術
第十六章 寄生蟲培養(yǎng)技術
第十七章 寄生蟲病傳播模型的構建技術
第十八章 生態(tài)學研究技術
第十九章 監(jiān)測技術
第二十章 預防控制效果評價技術
第二十一章 其他技術
第二十二章 動物模型

章節(jié)摘錄

　　通?？刹捎眉毎蚪M織中的全蛋白質(zhì)組分進行蛋白質(zhì)組分析，也可以進行樣品預分級，即采用各種方法將細胞或組織中的全體蛋白質(zhì)分成幾部分，分別進行蛋白質(zhì)組研究。樣品預分級的主要方法包括根據(jù)蛋白質(zhì)溶解性和蛋白質(zhì)在細胞中不同的細胞器定位進行分級，不僅可以提高低豐度蛋白質(zhì)的上樣量和檢測，還可以針對某一細胞器的蛋白質(zhì)組進行研究。（一）蛋白質(zhì)的提取進行樣品制備時，首先要明確其研究目的。研究目的是獲得盡可能多的蛋白，還是所感興趣的某些蛋白；是要求全蛋白表達譜，還是可重復的清晰圖譜；是需要讓蛋白變性后進行雙向電泳，還是需要保持蛋白質(zhì)的活性。目的不同，蛋白質(zhì)提取液的成分就不同。如更注重保持蛋白質(zhì)的活性，則需用等緩沖液；要進行雙向電泳，提取液就需含強變性劑等成分。　　1.組織細胞破碎有些蛋白質(zhì)分泌于細胞外，用適當?shù)娜軇┛芍苯犹崛?；有些則存在于細胞內(nèi)，這類蛋白質(zhì)又有游離蛋白質(zhì)和結(jié)合蛋白質(zhì)之分，前者游離在細胞質(zhì)中，后者則與細胞器緊密結(jié)合。欲抽提存在于細胞內(nèi)的蛋白質(zhì)時，首先應將組織細胞粉碎以便抽提。細胞破碎主要采用機械裂解和化學法，兩者聯(lián)合有協(xié)同作用，可盡可能地溶解和解聚蛋白。此外細胞破碎時會逸出蛋白酶，處理過程中添加PMSF等蛋白酶抑制劑可保持蛋白的完整性。同時，操作應盡量在低溫條件下進行，所使用的溶液最好先經(jīng)過預冷處理?！　。?）機械破碎：包括研磨法、機械勻漿法、超聲破碎法、壓力杯法、凍融裂解法和滲透溶胞法等?！　?）研磨法：研磨法是最常用的組織細胞破碎方法。將細胞組織置研缽中，研磨成粉末。為了提高研磨效果，可加入少許石英砂研磨。采用勻漿器也能把細胞破碎，此法多用于實驗室。　　2）機械勻漿法：這類方法一般較為劇烈，用組織搗碎器（8000～10000r／rain）或電動勻漿器處理可將細胞破碎。但機械勻漿時須保持低溫環(huán)境，以防溫度升高引起蛋白質(zhì)變性，且時間不宜過長?！　?）超聲破碎法：是借助聲波的震動力破碎細胞的有效方法。為了防止電器長時間運轉(zhuǎn)產(chǎn)熱過多，樣品處理應在冰浴中進行，并采用間歇處理的辦法，即超聲處理10秒后放置10秒，然后再超聲處理，如此反復1～2分鐘。用超聲波處理細菌和酵母菌懸液時，時間可適當延長?！　　?/pre>








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