中醫(yī)藥研究常用分子生物學技術

內容概要

分子生物學技術是當代中醫(yī)藥實驗研究的領先技術。本教材根據(jù)衛(wèi)生部教材辦公室的統(tǒng)一要求，從中醫(yī)藥研究實際出發(fā)，常用分子生物學技術及其在中醫(yī)藥研究中的運用，以加強中醫(yī)藥研究生的科研思維、方法和能力的培養(yǎng)，著重解決能否用、為何用、怎樣用的問題，更好地促進中醫(yī)藥的研究與發(fā)展。本書分7個部分：一是緒論。介紹分子生物學技術在中醫(yī)藥研發(fā)中應用的現(xiàn)狀，深入淺出地介紹如何用和怎樣用以及本書各章節(jié)的結構與不同技術間的關系。二是分子生物學常用基本技術。三是DNA的研究方法。四是RNA的研究方法。五是蛋白質的研究方法。六是基因功能與表達調控的研究方法。七是分子生物學常用網(wǎng)絡資源及利用。本書適用于中醫(yī)藥專業(yè)的研究生以及非中醫(yī)藥學科從事分子生物學領域研究的研究生及其工作者。

書籍目錄

第一章  緒論    一、分子生物學技術在中醫(yī)藥研究中的實例    二、分子生物學技術在中醫(yī)藥研究中的現(xiàn)狀    三、中醫(yī)藥研究經(jīng)常使用的分子生物學技術及本書的安排    四、加強分子生物學技術在中醫(yī)藥研發(fā)中的應用，是新時期中醫(yī)藥繼承與發(fā)展的迫切需要第二章  分子生物學常用基本技術  第一節(jié)  重組質粒  第二節(jié)  質粒轉化大腸桿菌  第三節(jié)  陽性單菌落擴增與小量DNA制備  第四節(jié)  酶切重組質粒，電泳分離所插入的DNA  第五節(jié)  從凝膠中回收DNA    附：瓊脂糖凝膠DNA回收試劑盒及其方法  第六節(jié)  大量質粒DNA制備  第七節(jié)  哺乳類動物細胞的培養(yǎng)    附：細胞庫簡介  第八節(jié)  植物細胞懸浮培養(yǎng)  第九節(jié)  氣相色譜一質譜聯(lián)用  第十節(jié)  流式細胞儀分析第三章  DNA的研究方法  第一節(jié)  哺乳類動物基因組DNA的提取  第二節(jié)  植物基因組DNA的提取  第三節(jié)  基因組文庫的建立與篩選  第四節(jié)  DNA印跡雜交  第五節(jié)  聚合酶鏈式反應    附：多重PCR  第六節(jié)  DNA雙脫氧鏈終止法測序  第七節(jié)  動、植物藥材的ISSR指紋圖譜  第八節(jié)  中藥RAPD指紋圖譜第四章  RNA的研究方法  第一節(jié)  總RNA提取  第二節(jié)  mRNA的分離  第三節(jié)  RNA印跡雜交  第四節(jié)  反轉錄聚合酶鏈式反應  第五節(jié)  熒光實時定量PCR  第六節(jié)  原位雜交  第七節(jié)  基因芯片  第八節(jié)  cDNA矩陣  第九節(jié)  差異展示PCR  第十節(jié)  cDNA庫建立  第十一節(jié)  基因全序列cDNA庫篩選  第十二節(jié)  迅速擴增cDNA末端的PCR技術第五章  蛋白質的研究方法  第一節(jié)  哺乳類動物組織蛋白質的提取  第二節(jié)  植物組織蛋白質的提取  第三節(jié)  蛋白質印跡雜交  第四節(jié)  酶聯(lián)免疫吸附試驗  第五節(jié)  免疫組織化學  第六節(jié)  單克隆抗體制備技術  第七節(jié)  蛋白質雙向電泳第六章  基因功能與表達調控的研究方法  第一節(jié)  RNA干擾  第二節(jié)  smallRNA的提取與分析  第三節(jié)  報道基因與基因調控元件的檢測  第四節(jié)  點突變PCR  第五節(jié)  基因敲除  第六節(jié)  DNA酶I足跡法  第七節(jié)  凝膠阻滯分析  第八節(jié)  植物細胞的基因轉化第七章  分子生物學常用網(wǎng)絡資源及利用  第一節(jié)  美國國家生物技術信息中心(NCBD)  第二節(jié)  GenBank數(shù)據(jù)庫查詢與搜索  第三節(jié)  基礎局部比對搜索工具(BLAST)  第四節(jié)  EST的電子延伸  第五節(jié)  cDNA序列的蛋白閱讀框架分析(ORF)、染色體定位，及其在機體各組織中的表達預測  第六節(jié)  PCR引物或序列寡核苷酸探針的在線設計  第七節(jié)  蛋白質分析附錄    一、分子生物學實驗常用儀器設備    二、常用生物學數(shù)據(jù)    三、常用載體    四、分子克隆常用酶    五、常用儲存液的配制    六、常用液體培養(yǎng)基    七、常用緩沖液    八、常用酸堿溶液的濃度與分子量    九、不同濃度酸堿液的pH值    十、核酸的純化(用酚／氯仿抽提)    十一、核酸濃縮    十二、分光光度法測定DNA及RNA含量    十三、Sephadex的水化    十四、放射性度量單位和數(shù)據(jù)    十五、科學單位    十六、離心速度和離心力換算    十七、分子生物學名詞術語英漢對照

章節(jié)摘錄

第一章 緒論分子生物學技術已成為當代中醫(yī)藥研究與發(fā)展領域的領先技術，并得到廣泛的應用。中醫(yī)藥專業(yè)的醫(yī)、教、研工作者，尤其是研究生，對學習和運用分子生物學技術的熱情十分高漲，其中研究生已成為中醫(yī)藥行業(yè)采用該技術的生力軍和主要力量。然而，與國內外西醫(yī)界相比，分子生物學技術在中醫(yī)藥研發(fā)中的應用還存在著很大的差距，概括起來，主要表現(xiàn)在以下三個方面：1．知識普及不夠一些中醫(yī)學者、研究生以及其他領域關注中醫(yī)的學者和人士對分子生物學技術和（或）中醫(yī)學了解不多，對該技術在中醫(yī)藥研發(fā)中是否能夠用、為何用、如何用、對中醫(yī)學術的繼承和發(fā)展有什么幫助等知之甚少，存在許多困惑，以致在研發(fā)中對是否采用該技術猶豫不決，甚至形成學術阻力。2．研發(fā)投入不足總體上，中醫(yī)學、中醫(yī)基礎學科的實驗研究投入少，研究經(jīng)費不富裕，人力投入不夠，研究效率低、積累薄、成果少；伴隨的是一些實驗室的儀器設備配置不合理、不配套、使用率低，以及研究經(jīng)驗少等，限制了當代中醫(yī)學對新的生命現(xiàn)象和生命調控機制的探索與發(fā)現(xiàn)，阻礙了中醫(yī)學術的發(fā)展。3．技術使用不當 由于以上原因，中醫(yī)實驗研究所采用的技術總體上還比較落后，研究深度和廣度不夠，大多停留在觀察個別已知基因轉錄和蛋白表達多寡的層面上，未能深入探索基因的轉錄與翻譯的調控，以及罕見和未知基因的功能；或一味追求一些技術新、價格昂貴的設備和方法，與原有實驗積累不相銜接，檢測數(shù)據(jù)不能有效地消化，造成浪費?？傊?，分子生物學技術在中醫(yī)藥研發(fā)中能否用、為何用、如何用的問題還沒有得到根本的解決。因此，加大普及該技術的力度，尤其是介紹中醫(yī)藥研究與發(fā)展中的運用是當務之急。下面以中醫(yī)藥防治惡性腫瘤機制方面開展的研究為例，介紹分子生物學技術在中醫(yī)藥研究中的應用。

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