現(xiàn)代醫(yī)學實驗方法

前言

經(jīng)過兩度春秋，本書的修訂再版終于同讀者見面了，我們感到由衷的欣慰。本書第1版是由國內(nèi)外54個醫(yī)學院校、科研機構(gòu)中的162位博士／博士后編寫、由76位老一輩專家審閱、內(nèi)容涵蓋廣泛的一本基礎(chǔ)醫(yī)學研究參考書。本書于1997年由人民衛(wèi)生出版社正式出版，至今已有11年時間。近年來，新的醫(yī)學實驗方法不斷涌現(xiàn)，技術(shù)革新日新月異，因此，從醫(yī)學研究的前沿性考慮，我們根據(jù)本書編委會的討論意見，于2005年8月召開的首屆中國現(xiàn)代醫(yī)學研究方法暨學科交叉創(chuàng)新研討會（CSMECKI會議）上組織了本書的修訂再版工作。本次修訂再版共有11位新編委和32位新參編人員加入，修訂歷時2年時間。新完成的第2版《現(xiàn)代醫(yī)學實驗方法》全書共200萬字，收集了近年來最新的實驗方法。主要內(nèi)容包括形態(tài)學方法、細胞功能研究方法、亞細胞結(jié)構(gòu)、蛋白質(zhì)與細胞因子、分子生物學方法、免疫學、醫(yī)學化學分析方法、整體與器官功能、動物及疾病模型、科研設(shè)計和統(tǒng)計學分析等10個方面。修改后的《現(xiàn)代醫(yī)學實驗方法》刪除了部分陳舊或少用的方法，納入了近10年最新和常用的實驗技術(shù)。如：第2版新增的“掃描共聚焦顯微鏡技術(shù)”、“RNA干擾技術(shù)”、“生物芯片技術(shù)”均為近年來發(fā)展起來的新技術(shù)。內(nèi)容上，第2版較第1版更加全面、新穎和實用。在新、老編委共同努力下完成的第2版《現(xiàn)代醫(yī)學實驗方法》，是集體智慧的結(jié)晶，也是眾多科技工作者辛勤勞動及合作的成果，包含了經(jīng)過無數(shù)次科研實踐總結(jié)得出的實用、可行和獨特的新方法。相信本書將對推動我國醫(yī)學科研的發(fā)展具有重要的指導作用與參考價值。由于參編者眾多，大家又是在不同地方分頭寫作，所以雖然大家為此書的編寫投入了極大的熱情，我們在統(tǒng)編中也花費了大量的時間，但不妥之處難免，望廣大前輩和同道們不吝指正。從有編書的想法，組織實施，到完成書稿及統(tǒng)編工作，這不知疲倦的600多個日日夜夜給我們留下了許多難忘的回憶，我們深深感謝中山大學醫(yī)學院、北京大學醫(yī)學部、上海交通大學醫(yī)學院、華中科技大學同濟醫(yī)學院、佳木斯大學醫(yī)學院、蚌埠醫(yī)學院以及其他各大醫(yī)學院校的領(lǐng)導、老師及同志們，感謝他們大力支持和積極參與本書的編寫和修訂再版工作，是他們在提供便利的同時，又給予了必要的人力、物力支援，我們也感謝那些為此書的編著而付出勞動的人們，雖然此書的編寫已告一段落，但那么多難忘的同志之誼、同學之情都已深深地印在我們的腦海中。

內(nèi)容概要

　　《現(xiàn)代醫(yī)學實驗方法(精)》為《現(xiàn)代醫(yī)學實驗方法》之第二版，全書共230余萬字，收集了近年來最新的實驗方法，主要內(nèi)容包括有形態(tài)學方法、細胞功能研究方法、亞細胞結(jié)構(gòu)、蛋白質(zhì)與細胞因子、分子生物學方法、免疫學、醫(yī)學化學分析方法、整體與器官功能、動物及疾病模型、科研設(shè)計和統(tǒng)計學分析等10個方面。可供各大專院校作為教材使用，也可供從事相關(guān)工作的人員作為參考用書使用。

書籍目錄

第一篇 形態(tài)學方法第一章 形態(tài)學電鏡技術(shù)第一節(jié) 透射電鏡技術(shù)一、基本原理二、超薄切片技術(shù)三、觀察及記錄第二節(jié) 掃描電鏡技術(shù)一、概況二、掃描電鏡的生物樣品制備三、鑄型掃描技術(shù)第三節(jié) 冷凍制樣和冷凍蝕刻電鏡技術(shù)一、物理固定（冷凍固定）二、快速冷凍方法三、冷凍蝕刻樣品制備四、冷凍蝕刻圖像的解釋五、冷凍置換法六、冷凍超薄切片技術(shù)第四節(jié) 免疫電鏡技術(shù)一、概述二、鐵蛋白免疫電鏡技術(shù)三、酶免疫電鏡技術(shù)四、膠體金免疫電鏡技術(shù)五、其他免疫電鏡技術(shù)第五節(jié) 電鏡原位雜交技術(shù)一、概述二、幾種電鏡原位雜交技術(shù)操作程序三、電鏡原位雜交的注意事項第六節(jié) 電鏡酶細胞化學技術(shù)一、基本原理二、樣品制備基本流程三、常用的電鏡酶細胞化學方法四、電鏡酶細胞化學的注意事項第七節(jié) 電鏡X射線顯微分析技術(shù)一、基本原理和檢查方法二、生物樣品制備方法三、電鏡X射線顯微分析技術(shù)在生物醫(yī)學領(lǐng)域中的應用第八節(jié) 電鏡放射自顯影技術(shù)一、放射性核素標記二、電鏡放射自顯影樣品制備第九節(jié) 負染色技術(shù)一、染色液二、染色方法三、注意事項四、負染色結(jié)果的判讀第十節(jié) 原子力顯微鏡一、概述二、原子力顯微鏡操作方法三、原子力顯微鏡的應用第二章 逆行追蹤及免疫細胞化學方法第一節(jié) 辣根過氧化物酶法一、基本原理二、主要儀器設(shè)備三、主要試劑四、實驗步驟五、注意事項第二節(jié) 熒光素逆行標記法一、原理及應用二、儀器設(shè)備三、試劑四、實驗步驟五、注意事項第三節(jié) 免疫熒光法一、原理及應用二、主要儀器設(shè)備三、主要試劑四、實驗步驟五、注意事項第四節(jié) 酶標記抗體法一、原理及應用二、主要儀器設(shè)備三、主要試劑四、染色步驟五、注意事項第五節(jié) 非標記抗體過氧化物酶-抗過氧化物酶法（PAP法）一、原理及應用二、主要儀器設(shè)備三、主要試劑四、實驗步驟五、注意事項第六節(jié) 抗生物素蛋白.生物素.過氧化物酶復合體法（ABC法）一、原理及應用二、儀器設(shè)備三、主要試劑四、實驗步驟五、注意事項第七節(jié) HRP逆行追蹤與免疫細胞化學（PAP法）結(jié)合法一、原理及應用二、儀器設(shè)備和試劑三、實驗步驟四、注意事項第八節(jié) 熒光素逆行標記與免疫熒光結(jié)合法一、原理及應用二、儀器設(shè)備三、主要試劑四、實驗步驟五、注意事項第九節(jié) 雙重和多重免疫標記一、基本原理二、標記方法第十節(jié) 免疫組織化學染色操作的注意事項、對照設(shè)計及結(jié)果判斷一、免疫組織化學染色操作的注意事項二、對照設(shè)計三、免疫組織化學染色結(jié)果的判斷第三章 掃描共聚焦顯微鏡技術(shù)第一節(jié) 基本原理一、激光光源二、激光共聚焦顯微鏡的成像原理三、激光掃描共聚焦顯微鏡的基本結(jié)構(gòu)四、激光掃描共聚焦顯微鏡在生物醫(yī)學研究領(lǐng)域的應用第二節(jié) 熒光定性、定量測量一、標本的制備二、激光掃描共聚焦顯微鏡掃描和采集樣品圖像的一般步驟三、熒光探針的性質(zhì)四、熒光的定性和定量測量第三節(jié) 實驗分析、功能和應用一、實驗分析的信息形式二、直方圖分析三、動態(tài)觀察四、熒光光漂白后的光恢復——活細胞內(nèi)分子運動的測定五、細胞間通訊的測定六、免疫熒光的定量測定七、生物活性物質(zhì)活性封閉解封閉的測定八、細胞膜流動性的測定九、細胞斷層掃描與三維重建十、黏附細胞分選十一、細胞激光顯微外科術(shù)第四節(jié) 常用熒光染料的染色方法一、用BCECF測定pH值二、用SNARF定量定比例測定pH值三、用Indo-1測量細胞內(nèi)Ca2+四、用Fluo-3測定細胞內(nèi)Ca2+五、用CFDA測定細胞間通訊六、用DiBAC測定膜電位的變化七、用Rhodamine123標記活細胞的線粒體八、用AO熒光染色顯示RNA和DNA九、用PI和EB熒光染色顯示DNA第四章 形態(tài)測量學方法第一節(jié) 目鏡測微器定量分析一、概述二、測量工具的使用方法三、二維圖像的測量四、三維結(jié)構(gòu)參數(shù)的計算第二節(jié) 定量分析的影響因素一、誤差分析二、切片組織變化對估計的影響三、切片厚度的影響四、抽樣原則第三節(jié) 計算機圖像分析和三維結(jié)構(gòu)重建一、概述二、圖像分析儀簡介三、圖像分析儀工作程序四、三維結(jié)構(gòu)重建切片的制作、定位和圖像輸入第五章 常規(guī)組織形態(tài)學研究方法第一節(jié) HE染色的應用和局限性一、HE染色原理二、染液及溶液的配制三、染色程序和方法四、染色結(jié)果五、HE染色的應用和局限性六、HE染色常見問題及其處理方法第二節(jié) 固定液的選擇及要點一、常用固定劑的成分和作用二、常用固定液三、固定液的選擇及應用要點第三節(jié) 特殊細胞的形態(tài)學鑒定方法一、肺泡Ⅱ型細胞二、胃腺上皮細胞三、潘氏細胞四、產(chǎn)肽激素細胞（APUD細胞）五、腎小球旁細胞六、垂體細胞七、松果體細胞八、胰島細胞九、嗜鉻細胞十、肥大細胞十一、神經(jīng)元的鑒定方法十二、神經(jīng)膠質(zhì)細胞十三、神經(jīng)干細胞第六章 原位分子雜交及應用第一節(jié) 原位分子雜交組織化學技術(shù)基本原則一、雜交前準備二、雜交三、雜交后處理四、雜交后顯示五、對照實驗和原位雜交結(jié)果的判斷第二節(jié) 原位雜交探針制備和標記一、探針制備二、探針標記三、核苷酸探針標記第三節(jié) 常見原位雜交方法一、組織和細胞的原位分子雜交二、熒光原位雜交三、原位末端標記技術(shù)（PRINS）四、原位聚合酶鏈反應（ISPCR）第二篇 細胞功能檢測方法第七章 普通細胞培養(yǎng)方法第一節(jié) 培養(yǎng)室儀器設(shè)備及試劑一、培養(yǎng)室儀器、器械及器皿二、培養(yǎng)試劑第二節(jié) 細胞分離技術(shù)一、梯度沉降分離法二、等密度沉降分離法三、流式細胞儀分離法第三節(jié) 原代分離細胞培養(yǎng)一、原理和應用二、實驗步驟三、注意事項第四節(jié) 細胞克隆化一、有限稀釋法二、平皿克隆分離法三、軟瓊脂克隆分離法四、單細胞顯微操作法第五節(jié) 組織塊培養(yǎng)一、原理和應用二、實驗步驟三、注意事項第六節(jié) 器官培養(yǎng)方法一、表玻皿器官培養(yǎng)法二、不銹鋼金屬網(wǎng)格法三、Maximow單蓋片法四、Wolff培養(yǎng)法五、擴散盒培養(yǎng)法第七節(jié) 無血清培養(yǎng)一、無血清培養(yǎng)基的組成二、在原代培養(yǎng)細胞中的應用三、注意事項第八節(jié) 體內(nèi)細胞培養(yǎng)及細胞培養(yǎng)新技術(shù)一、體內(nèi)細胞培養(yǎng)（動物體內(nèi)細胞接種）二、細胞培養(yǎng)新技術(shù)第九節(jié) 細胞培養(yǎng)中飼（滋）養(yǎng)細胞的制備及成纖維細胞的去除一、飼（滋）養(yǎng)細胞和成纖維細胞的制備二、細胞培養(yǎng)中多余成纖維細胞的去除第十節(jié) 細胞培養(yǎng)中污染檢測和排除一、污染的概念二、污染種類及表現(xiàn)三、污染的預防及消除四、支原體污染的對策第十一節(jié) 培養(yǎng)細胞的觀察一、細胞培養(yǎng)常規(guī)檢查（活細胞直接觀察）二、細胞生物學檢測第十二節(jié) 培養(yǎng)細胞的凍存、復蘇與運輸一、細胞凍存二、復蘇方法三、細胞運輸?shù)诎苏?特殊細胞培養(yǎng)方法及細胞培養(yǎng)方法的應用第一節(jié) 胚胎干細胞的分離培養(yǎng)和純化一、試劑及其配制二、胚胎干細胞和培養(yǎng)三、飼養(yǎng)層細胞的制備四、胚胎干細胞的鑒定五、胚胎干細胞的建系第二節(jié) 神經(jīng)細胞培養(yǎng)方法一、概述二、實驗動物及動物年齡的選擇三、培養(yǎng)方法四、培養(yǎng)神經(jīng)細胞的觀察和鑒定五、注意事項第三節(jié) 神經(jīng)干細胞分離培養(yǎng)與純化一、實驗動物及動物年齡的選擇二、大鼠神經(jīng)干細胞的分離培養(yǎng)（新生大鼠腦皮質(zhì)）三、人類神經(jīng)干細胞分離培養(yǎng)四、神經(jīng)干細胞的傳代與純化五、神經(jīng)干細胞的鑒定六、神經(jīng)干細胞系的建立第四節(jié) 肝細胞、Kupffer和Ito細胞的分離與培養(yǎng)一、概述二、細胞的分離與培養(yǎng)三、注意事項第五節(jié) 血管平滑肌細胞的分離與培養(yǎng)一、血管平滑肌細胞培養(yǎng)方法二、原代培養(yǎng)的平滑肌形態(tài)及其鑒別第六節(jié) 心肌細胞的分離與培養(yǎng)一、概述二、乳鼠心肌細胞的分離與培養(yǎng)三、成年鼠心肌細胞的分離與培養(yǎng)第七節(jié) 內(nèi)皮細胞的分離與培養(yǎng)一、培養(yǎng)方法二、內(nèi)皮細胞的鑒定三、注意事項第八節(jié) 造血干細胞培養(yǎng)一、造血干細胞的采集二、造血干細胞的分離和保存三、造血干細胞的體外擴增第九節(jié) 人外周血淋巴細胞短期培養(yǎng)一、儀器設(shè)備二、培養(yǎng)方法第十節(jié) 特殊免疫細胞的培養(yǎng)一、LAK細胞的制備二、TIL細胞的制備三、胸腺上皮細胞培養(yǎng)第十一節(jié) 脂肪細胞培養(yǎng)一、脂肪細胞來源二、脂肪細胞的分離純化與鑒別三、培養(yǎng)方法四、脂肪細胞生物學性狀觀察第十二節(jié) 人皮膚成纖維細胞培養(yǎng)一、試劑二、實驗步驟第三篇 亞細胞結(jié)構(gòu)及功能檢測方法第四篇 蛋白質(zhì)與細胞因子的功能檢測第五篇 分子生物學方法第六篇 免疫學方法第七篇 醫(yī)學化學分析方法第八篇 整體功能與器官功能檢測方法第九篇 實驗動物、動物手術(shù)和動物模型第十篇 醫(yī)學科研設(shè)計、統(tǒng)計學分析、醫(yī)學科研結(jié)果的計算機處理

章節(jié)摘錄

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《現(xiàn)代醫(yī)學實驗方法(第2版)》為人民衛(wèi)生出版社出版。

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