細(xì)胞生物學(xué)實驗教程

內(nèi)容概要

　　《高等農(nóng)林院校基礎(chǔ)生物學(xué)系列實驗教材：細(xì)胞生物學(xué)實驗教程》是根據(jù)高等農(nóng)林院校教學(xué)目標(biāo)和多年的教學(xué)實踐編寫而成。主要內(nèi)容包括常用細(xì)胞生物學(xué)儀器使用與操作技術(shù)、細(xì)胞形態(tài)與結(jié)構(gòu)的觀察、細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)與物質(zhì)跨膜運輸、細(xì)胞質(zhì)基質(zhì)與細(xì)胞內(nèi)膜系統(tǒng)、葉綠體與線粒體的觀察、染色體結(jié)構(gòu)與觀察、細(xì)胞骨架的觀察、細(xì)胞培養(yǎng)與分化、細(xì)胞衰老與凋亡的檢測等，涉及細(xì)胞生物學(xué)的基本知識和實驗技能，使用單位可根據(jù)自身教學(xué)條件和教學(xué)時間選做。　　《高等農(nóng)林院?；A(chǔ)生物學(xué)系列實驗教材：細(xì)胞生物學(xué)實驗教程》可作為高等農(nóng)林院校的生物、農(nóng)學(xué)、園藝、植保、動科、水養(yǎng)等專業(yè)本、?？茖W(xué)生的專業(yè)基礎(chǔ)課教材，也可作為相關(guān)專業(yè)研究生、教師和科研人員的參考書。

書籍目錄

第1篇常用細(xì)胞生物學(xué)儀器使用與操作技術(shù) 實驗1普通光學(xué)顯微鏡構(gòu)造與使用 實驗2植物組織石蠟切片的制作 實驗3相差顯微鏡的使用 實驗4熒光顯微鏡的使用 實驗5免疫熒光技術(shù)與應(yīng)用 實驗6透射電子顯微鏡與樣品制備 實驗7掃描電子顯微鏡與樣品制備 實驗8顯微鏡放射自顯影樣品的制備與觀察 實驗9流式細(xì)胞儀的使用 實驗10細(xì)胞電融合技術(shù) 實驗11顯微攝影技術(shù) 實驗12細(xì)胞電泳 實驗13細(xì)胞計數(shù) 實驗14外源基因的導(dǎo)入與表達(dá) 第2篇細(xì)胞形態(tài)與結(jié)構(gòu)的觀察 實驗15細(xì)胞形態(tài)的觀察與細(xì)胞顯微測量 實驗16口腔黏膜上皮細(xì)胞的熒光顯微鏡觀察 第3篇細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)與物質(zhì)跨膜運輸 實驗17膜蛋白質(zhì)的分離 實驗18細(xì)胞吞噬運動的觀察 實驗19細(xì)胞的凝集反應(yīng) 實驗20胞間連絲的觀察與制片技術(shù) 實驗21植物原生質(zhì)體融合與影響因素 實驗22動物細(xì)胞的體外融合 實驗23細(xì)胞膜的通透性 第4篇細(xì)胞質(zhì)基質(zhì)與細(xì)胞內(nèi)膜系統(tǒng) 實驗24細(xì)胞中酶的定位與定性研究 實驗25ATP酶的細(xì)胞化學(xué)鑒定 實驗26過氧化氫酶的細(xì)胞化學(xué)鑒定 實驗27過氧化物酶的細(xì)胞化學(xué)鑒定 實驗28脫氫酶的細(xì)胞化學(xué)鑒定 實驗29細(xì)胞質(zhì)膜和液泡膜微囊的制備與相關(guān)活性測定 實驗30植物細(xì)胞中質(zhì)體的觀察與主要儲藏物質(zhì)的檢驗 第5篇葉綠體與線粒體的觀察 實驗31葉綠體的差速離心分離與觀察 實驗32線粒體的超活染色與觀察 實驗33細(xì)胞器DNA的熒光顯微鏡觀察 第6篇染色體結(jié)構(gòu)與觀察 實驗34去壁低滲法制備植物染色體標(biāo)本 實驗35染色體的吉姆薩（Giemsa）分帶技術(shù) 實驗36果蠅唾腺巨大染色體的制備與觀察 實驗37DNA顯示與細(xì)胞有絲分裂相的觀察 第7篇細(xì)胞骨架的觀察 實驗38微絲的光學(xué)顯微鏡觀察 實驗39微管的免疫熒光顯示 實驗40中間纖維的熒光顯微鏡觀察 第8篇細(xì)胞培養(yǎng)與分化 實驗41動物細(xì)胞的原代培養(yǎng) 實驗42植物原生質(zhì)體的分離與培養(yǎng) 實驗43不定根發(fā)生的細(xì)胞生理學(xué)研究 實驗44生長曲線的測定 實驗45常用的藥物誘導(dǎo)細(xì)胞同步化方法 第9篇細(xì)胞衰老與凋亡的檢測 實驗46類壞死的處理與死、活細(xì)胞鑒別 實驗47細(xì)胞衰老的誘導(dǎo)與檢測 實驗48逆境脅迫導(dǎo)致的細(xì)胞凋亡與檢測 附錄 Ⅰ實驗報告范文 Ⅱ研究性實驗報告范文

章節(jié)摘錄

版權(quán)頁：   插圖：   【方法與步驟】 1.試樣及拍攝要求 （1）選用優(yōu)良干凈的標(biāo)準(zhǔn)載玻片和蓋玻片，玻片內(nèi)無氣泡、外無霉斑，表面無傷痕。載玻片厚約1.5 mm，蓋玻片厚約0.17 mm，樹膠或尤派膠等封固劑調(diào)稀后滴加少許，形成一薄層即可。 （2）標(biāo)本片要清晰，厚薄適度。如拍攝染色體的標(biāo)本，應(yīng)是處于有絲分裂中期的染色體，完好無損、平展逸散。這樣才有利于染色體的計數(shù)和組型分析。 （3）染色片要干凈，既無多余染料也無著色過淺，要著色鮮明適度，膠卷易感，拍攝效果好。 （4）制片整個過程中要保持清潔無塵，無氣泡。 （5）使用高性能的聚光器和物鏡（常用復(fù)消色差物鏡）。 （6）采用科勒（Ktjhler）照明法。 （7）選擇好的拍攝膠卷。 （8）拍攝時應(yīng)準(zhǔn)確聚焦并選擇合理的曝光時間。 （9）沖印方法要正確。 2.拍攝 顯微攝影系列操作中的關(guān)鍵環(huán)節(jié)就是拍攝。鏡檢時，如發(fā)現(xiàn)所要的影像，應(yīng)立即拍照。拍攝前，先對照相系統(tǒng)進(jìn)行檢查，采用科勒照明法，檢查攝影物鏡和目鏡如何組合合理，濾色鏡是否加用，光路合軸、調(diào)準(zhǔn)孔徑光闌和視野光闌以及應(yīng)用低速全色膠卷等。然后再進(jìn)行取景、聚焦和曝光拍攝。 （1）取景和聚焦：通過側(cè)視目鏡取景器對準(zhǔn)拍攝的物體影像范圍，選取感興趣的視野進(jìn)行拍照。①屈光度調(diào)節(jié)：由于觀察者視力不同，對應(yīng)的準(zhǔn)確焦距也不同，因此，取景聚焦前，先要調(diào)節(jié)屈光度，尋找適合觀察者的焦距。在顯微攝影裝置的目鏡取景器近眼端安裝著能左右轉(zhuǎn)動的屈光度調(diào)節(jié)環(huán)，通過旋轉(zhuǎn)調(diào)節(jié)變換透鏡間距，改變焦點距離。調(diào)節(jié)環(huán)旋轉(zhuǎn)范圍為±5屈光度（1屈光度相當(dāng)于眼鏡的100度）。經(jīng)過調(diào)節(jié)，使500度以內(nèi)的近（遠(yuǎn)）視眼的觀察者能脫下眼鏡取景調(diào)焦。在取景器內(nèi)還裝有上刻雙十字線的玻璃屏，當(dāng)調(diào)到雙十字線清晰可辨時即為合適焦距。雙十字線校準(zhǔn)后，不要隨意變動，否則焦距改變。焦距依靠顯微鏡調(diào)焦旋鈕來改變。當(dāng)十字線被看成雙線時，聚焦的影像焦點能清晰地投射在焦平面上；若看到的十字線是單線，即使焦距準(zhǔn)確，其焦點也會落在暗箱的焦平面前后，獲得的影像會模糊不清。當(dāng)左右眼調(diào)換或拍攝者改變時，屈光度需重新進(jìn)行調(diào)節(jié)。②取景：拍攝的對象、范圍和大小決定如何取景。在刻有雙十字線的玻璃屏上，也刻著各種規(guī)格的長方形取景框。底片最終拍攝下的范圍，僅為圓形視野中長方形的部分。例如，拍攝染色體時要拍全一個細(xì)胞的染色體，在最大放大倍數(shù)下使染色體與取景框相接。被拍攝物體的影像中心須位于長方形取景框?qū)蔷€的中心，并使兩者長、短軸相對應(yīng)。需要90°調(diào)整時，轉(zhuǎn)動攝影裝置或載物臺，讓取景框橫軸和影像軸平行，調(diào)換物鏡和目鏡調(diào)節(jié)影像大小。拍攝植物花粉母細(xì)胞顯示減數(shù)分裂的同步性時，則要求拍攝的范圍盡可能大，包含足夠數(shù)量同步分裂的花粉母細(xì)胞，以數(shù)量突出同步性。③聚焦：焦距的調(diào)節(jié)通過旋轉(zhuǎn)顯微鏡的粗調(diào)焦旋鈕和微調(diào)焦旋鈕，改變物鏡前透鏡與標(biāo)本的距離，使視野中物體影像焦點匯聚在暗箱的焦平面上。焦平面要與載物臺平行，否則，調(diào)焦后的影像不能垂直投射到膠卷上，影像會發(fā)生部分模糊。制片標(biāo)本可前、后、左、右移動，取景聚焦后，應(yīng)避免任何顫動，立即按下快門按鈕。例如，拍攝有絲分裂中期染色體時，可對準(zhǔn)兩個染色單體間的空隙部分聚焦。拍攝各種分帶的染色體，亦可對準(zhǔn)帶紋調(diào)焦。同一細(xì)胞內(nèi)各染色體分散，存在層次，往往不在同一水平面上，此時，應(yīng)聚焦在中層染色體上。力爭物鏡和目鏡的焦點深度適中，以擴(kuò)大清晰范圍，也可通過降低物鏡的數(shù)值孔徑，來提高焦點深度。

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