基礎(chǔ)生物化學(xué)實驗

內(nèi)容概要

　　《基礎(chǔ)生物化學(xué)實驗》本著少而精、應(yīng)用靈活的原則，共選編了19個具有代表性、較為成熟的生物化學(xué)實驗，包括定量分析技術(shù)、層析技術(shù)、電泳技術(shù)、生物大分子制備技術(shù)和免疫學(xué)技術(shù)，涵蓋了生物大分子定量測定、分離純化及鑒定的常用實驗技術(shù)。其中既有基礎(chǔ)實驗，也有提高性、探究性的實驗。絕大多數(shù)實驗內(nèi)容相對獨立，在6—16學(xué)時內(nèi)可以完成。在實際教學(xué)中，可以將多個相關(guān)的實驗有機地聯(lián)系在一起組合成綜合性實驗，構(gòu)成每學(xué)期80—120學(xué)時的教學(xué)內(nèi)容，以期通過綜合、多樣性的實驗內(nèi)容，對學(xué)生進行科學(xué)實驗的系統(tǒng)訓(xùn)練，加強學(xué)生的基本操作技能，提高學(xué)生動腦和動手能力，培養(yǎng)學(xué)生理論與實踐相結(jié)合的分析問題、解決問題的能力?！　　痘A(chǔ)生物化學(xué)實驗》可作為綜合性大學(xué)、師范、醫(yī)藥和農(nóng)林院校等生物科學(xué)及相關(guān)專業(yè)的本科生物化學(xué)實驗指導(dǎo)教材，也可供相關(guān)專業(yè)的研究生參考。

書籍目錄

第一章 定量分析技術(shù)實驗一單糖定量測定——3，5一二硝基水楊酸法實驗二蛋白質(zhì)定量測定(I)——Folin酚法實驗三蛋白質(zhì)定量測定(Ⅱ)——考馬斯亮藍(lán)法實驗四蛋白質(zhì)定量測定(Ⅲ)——紫外吸收法實驗五核酸定量測定(I)——定磷法實驗六核酸定量測定(Ⅱ)——紫外吸收法參考文獻第二章 層析技術(shù)實驗七凝膠過濾層析——測定蛋白質(zhì)相對分子質(zhì)量實驗八離子交換層析——分離核苷酸實驗九親和層析——分離谷胱甘肽轉(zhuǎn)硫酶附：谷胱甘肽轉(zhuǎn)硫酶的動力學(xué)研究實驗十金屬螯合層析——分離超氧化物歧化酶實驗十一薄層層析——蛋白質(zhì)氨基酸組成分析參考文獻第三章 電泳技術(shù)實驗十二聚丙烯酰胺凝膠凈電荷電泳——乳酸脫氫酶同工酶的鑒定實驗十三SDS一聚丙烯酰胺凝膠電泳——測定蛋白質(zhì)相對分子質(zhì)量實驗十四聚丙烯酰胺凝膠等電聚焦電泳——測定蛋白質(zhì)等電點參考文獻第四章 生物大分子制備技術(shù)實驗十五細(xì)胞色素c的制備及含量測定實驗十六豬脾DNA的提取附：二苯胺顯色法測定脫氧核糖核酸含量參考文獻第五章 免疫學(xué)技術(shù)實驗十七抗血清的制備和抗體的純化實驗十八抗體效價測定及組分鑒定——雙向擴散，對流免疫電泳，微量免疫電泳，雙向免疫電泳實驗十九酶聯(lián)免疫吸附測定——間接法測定抗體效價參考文獻附錄一、常用緩沖溶液的配制方法二、硫酸銨飽和度的常用計算表三、常用市售酸、堿的濃度四、常用蛋白質(zhì)相對分子質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)參照表五、某些蛋白質(zhì)的物理性質(zhì)六、一些常見蛋白質(zhì)等電點參考值七、常用離子交換纖維素八、離子交換層析介質(zhì)的技術(shù)數(shù)據(jù)九、凝膠過濾層析介質(zhì)的技術(shù)數(shù)據(jù)十、部分親和層析介質(zhì)的技術(shù)數(shù)據(jù)十一、各種層析介質(zhì)所允許的最大操作壓十二、離心機轉(zhuǎn)數(shù)與相對離心力(RcF)的換算

章節(jié)摘錄

版權(quán)頁：插圖：從抗原的化學(xué)結(jié)構(gòu)上看，決定機體產(chǎn)生免疫應(yīng)答的是抗原分子上一些特定的化學(xué)基團，稱為抗原決定簇，它們是誘導(dǎo)機體產(chǎn)生抗體并與抗體結(jié)合的部位。抗原抗體反應(yīng)的高度特異性能精確區(qū)分抗原間的微細(xì)差別，這種特異性是由抗原表面決定簇的化學(xué)組成、空間排列和立體構(gòu)型決定的，抗原決定簇與抗體分子超變區(qū)的空間結(jié)構(gòu)互補決定了高特異性。相同抗原分子可具有多種不同的抗原決定簇，不同抗原分子也可以具有相似的抗原決定簇，在與抗體反應(yīng)時可能出現(xiàn)交叉反應(yīng)。抗原與抗體以非共價鍵結(jié)合，這種結(jié)合是相當(dāng)穩(wěn)定的，也是可逆的，在酸、堿或者高鹽的條件下兩者可以解離，解離后抗原和抗體仍保持原有的性質(zhì)?？乖瓫Q定簇和抗體分子可變區(qū)的空間構(gòu)型互補程度不同，抗原與抗體分子之間結(jié)合力強弱也不同，抗原和抗體互補程度越高，則親和力越強，越不容易解離?？乖贵w反應(yīng)過程首先是特異結(jié)合階段，這一結(jié)合過程僅需幾秒鐘到幾分鐘，因此肉眼觀察不到；然后是可見反應(yīng)階段，抗原與抗體間進一步交聯(lián)而形成網(wǎng)格狀聚集物，出現(xiàn)肉眼可見的沉淀，這一階段速度要慢得多，需數(shù)分鐘、數(shù)小時乃至數(shù)日，并且受溫度、離子強度和酸堿度等外界因素的影響。通?？乖卸鄠€抗原決定簇，可刺激多種具有相應(yīng)抗原受體的B細(xì)胞產(chǎn)生多種針對不同抗原決定簇的抗體?？乖c相應(yīng)的抗體具有表面結(jié)合的特性，由于抗原是多價的，所以可結(jié)合多個抗體分子。具有抗體活性的免疫球蛋白的基本結(jié)構(gòu)是由4條肽鏈組成，包括2條相同的輕鏈和2條相同的重鏈，由二硫鍵連接形成一個四肽鏈分子（圖5-2）?？贵w一般有2個抗原結(jié)合點，只能結(jié)合2個抗原分子的抗原決定簇，故稱抗體是二價的?？扇苄钥乖c抗體比例合適時，可結(jié)合形成較大的不溶性免疫復(fù)合物，在反應(yīng)體系中出現(xiàn)肉眼可見的不透明的沉淀物，這種抗原抗體反應(yīng)稱為沉淀反應(yīng)，具有特異性和可逆性?？乖c抗體的比例決定結(jié)合物的大小和能否出現(xiàn)肉眼可見的沉淀現(xiàn)象（圖5-3）。在一定量的抗體中加入不同量的抗原時，產(chǎn)生抗原一抗體復(fù)合物的數(shù)量可分成3個區(qū)帶，其中等價帶中抗原、抗體比例最合適，形成大且多的抗原一抗體復(fù)合物，出現(xiàn)明顯的沉淀反應(yīng)，此時在反應(yīng)體系中測不出或有極低的游離抗原或抗體；抗體過剩帶和抗原過剩帶中，抗原和抗體比例均不合適，所形成的結(jié)合物小且少，反應(yīng)體系中存在著大量游離的抗原或抗體（圖5-4）。因此在抗原抗體的檢測中，應(yīng)調(diào)整抗原和抗體的比例，得到肉眼可見的沉淀反應(yīng)。

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《基礎(chǔ)生物化學(xué)實驗》是普通高等教育“十一五”國家級規(guī)劃教材之一。

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