細(xì)胞工程實驗

內(nèi)容概要

　　《細(xì)胞工程實驗》分5章共39個實驗，以動物細(xì)胞培養(yǎng)為基礎(chǔ)，以單克隆抗體制備的技術(shù)體系為主要內(nèi)容，包括骨髓瘤細(xì)胞培養(yǎng)、小鼠免疫、細(xì)胞融合、克隆篩選、抗體檢測和細(xì)胞凍存等，以真核細(xì)胞轉(zhuǎn)基因技術(shù)、小鼠胚胎干細(xì)胞培養(yǎng)和iPSC誘導(dǎo)技術(shù)、流式細(xì)胞儀分析技術(shù)和激光掃描共聚焦顯微鏡技術(shù)等為延伸，并包括植物細(xì)胞工程的主體技術(shù)。由于該類實驗主要是以活細(xì)胞為操作對象，要求實驗的連貫性，所以比較適合集中安排課時，各校在具體教學(xué)中也可根據(jù)自身情況酌情調(diào)整。 本實驗教材為生物技術(shù)專業(yè)技能訓(xùn)練設(shè)計，提供了一個先進、實用、系統(tǒng)而又可供選擇的實驗體系；適用于生物類各本科專業(yè)細(xì)胞工程實驗教學(xué)，也可用于生物相關(guān)專業(yè)的研究生實驗技能訓(xùn)練以及生物?？茖W(xué)校的高級技能強化訓(xùn)練。

書籍目錄

實驗計劃第1章 動物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)1-1 動物細(xì)胞培養(yǎng)實驗的器材準(zhǔn)備1-2 動物細(xì)胞培養(yǎng)用液的配制及過濾除菌1-3 培養(yǎng)細(xì)胞的形態(tài)觀察、大小測定和照相記錄1-4 動物細(xì)胞的傳代培養(yǎng)1-5 動物細(xì)胞的原代培養(yǎng)1-6 培養(yǎng)細(xì)胞的分裂指數(shù)和生長曲線測定1-7 培養(yǎng)細(xì)胞的活性測定1-8 培養(yǎng)細(xì)胞的染色體標(biāo)本制備與分帶技術(shù)1-9 培養(yǎng)細(xì)胞的超低溫凍存與復(fù)蘇第2章 雜交瘤技術(shù)與單克隆抗體制備2-1 抗原制備與小鼠免疫2-2 飼養(yǎng)層細(xì)胞的制備2-3 骨髓瘤細(xì)胞的制備2-4 免疫脾細(xì)胞的制備2-5 細(xì)胞融合和雜交瘤篩選2-6 特異性單克隆抗體的檢測2-7 雜交瘤細(xì)胞的克隆化培養(yǎng)（有限稀釋法）2-8 單克隆抗體的制備與分離純化2-9 雜交瘤細(xì)胞的保存第3章 小鼠胚胎干細(xì)胞體外培養(yǎng)和分化技術(shù)3-1 小鼠超數(shù)排卵3-2 小鼠胚胎成纖維細(xì)胞（MEF）飼養(yǎng)層的制備3-3 小鼠胚胎干細(xì)胞（mESC）的分離培養(yǎng)與傳代3-4 小鼠胚胎干細(xì)胞（mESC）的鑒定3-5 小鼠胚胎干細(xì)胞的體外分化實驗3-6 誘導(dǎo)多潛能干細(xì)胞（iPSC）的制備第4章 植物組織與細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)4-1 植物組織與細(xì)胞培養(yǎng)基的配制4-2 胡蘿卜愈傷組織誘導(dǎo)及繼代培養(yǎng)4-3 胡蘿卜愈傷組織的“器官分化”與“體細(xì)胞胚發(fā)生”4-4 馬鈴薯莖尖培養(yǎng)4-5 胡蘿卜懸浮細(xì)胞培養(yǎng)4-6 胡蘿卜人工種子制作4-7 大麥原生質(zhì)體的分離與電融合第5章 真核細(xì)胞轉(zhuǎn)基因技術(shù)和檢測技術(shù)5-1 磷酸鈣沉淀介導(dǎo)的轉(zhuǎn)基因技術(shù)5-2 陽離子聚合物介導(dǎo)的轉(zhuǎn)基因技術(shù)5-3 脂質(zhì)體介導(dǎo)的轉(zhuǎn)基因技術(shù)5-4 基因槍法介導(dǎo)的轉(zhuǎn)基因技術(shù)5-5 細(xì)胞拆合和細(xì)胞重組5-6 流式細(xì)胞儀分析技術(shù)5-7 激光掃描共聚焦顯微鏡的使用和觀察5-8 細(xì)胞凋亡的誘導(dǎo)及生化檢測附錄1 縮略詞表附錄2 常用培養(yǎng)基和試劑的配制附錄3 常用實驗儀器參考書目

章節(jié)摘錄

　　二、實驗原理　　細(xì)胞培養(yǎng)的本質(zhì)是在人工條件下實現(xiàn)多細(xì)胞生物的基因組以單細(xì)胞無性繁殖的方式進行擴增。細(xì)胞在培養(yǎng)過程中保持其原有特性，因此，細(xì)胞培養(yǎng)成為細(xì)胞增殖、分化、凋亡的研究模型。脫離母體的細(xì)胞，失去了機體免疫系統(tǒng)、解毒系統(tǒng)和緩沖系統(tǒng)的支持，十分脆弱。培養(yǎng)基成分、pH、溫度、氣體條件等的輕微變化就會影響細(xì)胞的正常生長，極微量的有害物質(zhì)就會使培養(yǎng)的細(xì)胞生長不良、產(chǎn)生變異或死亡，微生物污染更是直接導(dǎo)致細(xì)胞培養(yǎng)的失敗。因此，需要嚴(yán)格的無菌條件和環(huán)境控制。潔凈是細(xì)胞培養(yǎng)的基本要求，它包括取材的供體無菌，培養(yǎng)用液和培養(yǎng)用具的無菌，培養(yǎng)環(huán)境和操作過程的無菌，以及觀察環(huán)境的相對無菌。潔凈需要有一個體系來保證，這個體系包括無菌室，超凈工作臺，潔凈的培養(yǎng)箱，無菌的培養(yǎng)器皿、培養(yǎng)用具和培養(yǎng)液，專用儀器設(shè)備，優(yōu)質(zhì)的細(xì)胞培養(yǎng)用水，無菌的試劑及血清等生物添加物，以及良好的管理，從而實現(xiàn)細(xì)胞培養(yǎng)在適宜、可控的環(huán)境下進行，保證細(xì)胞培養(yǎng)的成功。

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