高級生物化學實驗

前言

生物化學是生命科學中一門重要的基礎學科。它既是一門理論科學，也是一門實驗科學，與生命科學領域中諸多分支學科（如分子生物學等）及相關產業(yè)（如醫(yī)藥、環(huán)保、能源及食品等）有著千絲萬縷的關系?，F代生物化學技術作為新世紀生命科學發(fā)展的標志性學科，是生物化學學科的主要組成部分，也是我國高等院校生命科學研究生教學領域中的重要環(huán)節(jié)。為了適應生命科學的高速發(fā)展以及加速培養(yǎng)國家生命科學高科技領域人才的步伐，2009年高等教育出版社組織了國內相關高等農林院校教師編寫了這部《高級生物化學實驗》教材。本書是一本具有特色、適用于我國高等農林院校生命科學研究生及高年級本科生生物化學實驗教學的教材，是根據國內外生物化學技術的最新研究成果和發(fā)展趨勢，結合各個學校近十年來的科學研究和實驗教學，經反復修改、充實撰寫而成。本書共分八章及附錄。第1～3章側重于學生基本技能的訓練和培養(yǎng)，如緩沖溶液的作用原理及配制、生物材料的預處理和實驗誤差控制。后續(xù)幾章分別為蛋白質化學與酶學研究技術、核酸化學、糖類和次生代謝物的分離提取等內容。每一章先設置總論，之后提供具有代表性的實驗供學生實踐。全書包含一些生物大分子的分離、層析、電泳等傳統(tǒng)實驗項目，旨在加強研究生基本實驗方法和技能的訓練，又編入了近年發(fā)展起來的蛋白質2DE技術、小RNA分離鑒定等綜合性實驗技術，將生物化學實驗技能集成化。本書旨在培養(yǎng)學生嚴謹求實的科研態(tài)度、分工協(xié)作的團隊精神、創(chuàng)造性思維和獨立分析與解決問題的能力。本書編寫得益于相關院校同行的大力支持。編者均為各高等院校從事生物化學教學的資深教師。他們具有深厚的專業(yè)功底和高度的敬業(yè)精神，業(yè)務精湛，將長期工作在教學第一線的成果集結成文。由于生物化學實驗技術發(fā)展迅速，難免存在錯誤和疏漏，竭誠希望熱心讀者不吝賜教，以便再版時改正。

內容概要

　　《高級生物化學實驗》是根據國內外生物化學技術的最新研究進展和發(fā)展趨勢，結合各高校近十年來的科學研究和實驗教學，經反復修改、充實撰寫而成。編者均為各高等院校從事生物化學教學的資深教師。全書共分8章包含一些生物大分子的分離、層析、電泳等傳統(tǒng)實驗項目，旨在加強研究生基本實驗方法和技能的訓練，同時又編入了近年來發(fā)展起來的一些綜合性實驗技術，將生物化學實驗技能集成化?！陡呒壣锘瘜W實驗》宗旨在于培養(yǎng)學生嚴謹求實的科研態(tài)度、分工協(xié)作的團隊精神、創(chuàng)造性思維和獨立分析與解決問題的能力。書末的附錄還包括了離心原理、常用試劑和溶液的配制等。　　《高級生物化學實驗》適用于高等院校農林和生物學等專業(yè)研究生和本科生選擇使用。

書籍目錄

第一章 緩沖溶液的作用原理及配制第一節(jié) 緩沖溶液的作用原理一、緩沖溶液的作用原理二、緩沖容量與緩沖范圍第二節(jié) 緩沖溶液的配制一、影響緩沖溶液pH的因素及緩沖溶的選擇與配制二、緩沖溶液的應用原則三、不同緩沖溶液的優(yōu)缺點第二章 生物材料的預處理第一節(jié) 生物樣品的保存一、新鮮固態(tài)樣品的保存二、液態(tài)樣品的保存第二節(jié) 生物材料預處理技術一、細胞的破碎二、提取與純化第三章 實驗誤差控制第一節(jié) 實驗誤差一、實驗誤差二、精密度和偏差三、實驗誤差的來源第二節(jié) 提高準確度的方法一、減少系統(tǒng)誤差的方法二、減少偶然誤差的方法三、正確取舍有效數字第四章 蛋白質研究技術與方法第一節(jié) 蛋白質分離純化的一般方法一、以蛋白質溶解度為基礎的分離方法二、以蛋白質電荷性質為基礎的分離方法三、以蛋白質分子大小為基礎的分離方法四、以蛋白質生物活性為基礎的分離方法第二節(jié) 蛋白質分離純化的新技術與新方法一、蛋白質二維熒光差異凝膠電泳技術二、毛細管電泳三、反相液相色譜法四、反膠團萃取法五、蛋白質分離方法的選擇、組合和優(yōu)化實驗一蛋白質含量測定法I．微量凱氏定氮法(Kjeldahl法)Ⅱ．雙縮脲法(Biuret法)Ⅲ．Folin一酚試劑法(Lowry法)Ⅳ．考馬斯亮藍法(Bradford法)V．紫外吸收法Ⅵ．二喹啉甲酸法(BCA法)實驗二 小麥鈣調蛋白的分離、純化實驗三 小麥鈣調蛋白的抗體制備及檢測實驗四 植物組織蛋白質二維電泳分離分析第五章 酶學研究技術與方法第一節(jié) 酶活力測定及酶的純度與回收率一、酶活力測定二、純化方法與條件的比較標準三、純度標準第二節(jié) 酶活力測定的常用技術和方法一、量氣法二、比色法與分光光度法實驗五 苯丙氨酸解氨酶的純化及活性測定I．PAL的提取及測定——離心和鹽析的應用Ⅱ．PAL的純化——分子篩和離子交換層析的應用實驗六 Eadie-Hofstee法測定辣根過氧化物酶的K和實驗七 酶偶聯(lián)分析法測定植物己糖激酶的活力實驗八 兩相分配法制備大豆子葉質膜及其純度鑒定實驗九 金屬螯合親和層析分離純化玉米SOD實驗十 大豆胰蛋白酶抑制劑的分離提取以及生物化學性質表征第六章 核酸研究技術和方法第一節(jié) 核酸研究的基本要求一、材料與方法的選擇二、選擇的原則三、核酸完整性的保持第二節(jié) 技術路線的設計一、核酸的釋放二、核酸的分離與純化三、核酸質量與提取步驟的關系四、核酸的濃縮、沉淀與洗滌實驗十一 植物基因組DNA的提取及含量、純度檢測I．植物基因組DNA的提取(CTAB法)Ⅱ．植物DNA純度的鑒定——紫外分光光度計法Ⅲ．植物DNA相對分子質量的測定——瓊脂糖凝膠電泳法實驗十二 一步法共提取昆蟲中腸DNA、RNA及蛋白質實驗十三 小RNA的分離純化I．小RNA分離、純化及修飾Ⅱ．修飾后小RNA的克隆轉化及測序Ⅲ．測序結果的生物信息學分析實驗十四 油菜CDNA文庫的構建I．植物組織總RNA的提取及電泳分析Ⅱ．CDNA文庫的構建實驗十五Southern印跡第七章 糖類研究技術和方法第一節(jié) 糖生物化學研究總論第二節(jié) 糖的提取及純化第三節(jié) 多糖的組成分析第四節(jié) 多糖的結構分析實驗十六 還原糖和總糖的測定實驗十七 非還原糖的高效液相色譜分析實驗十八 可溶性糖的硅膠G薄層層析實驗十九 黏多糖——肝素效價的測定實驗二十 水溶性苦瓜多糖的制備及分離純化實驗二十一 醋酸纖維素薄膜電泳鑒定山楂多糖實驗二十二 多糖結構分析I．糖含量測定Ⅱ．單糖組成分析Ⅲ．糖鏈的序列測定第八章 植物次生代謝物概述第一節(jié) 次生代謝物的概念與特性一、次生代謝物的概念二、次生代謝物的特性第二節(jié) 次生代謝物的研究方法一、同位素示蹤法二、細胞培養(yǎng)法三、熒光標記法四、單細胞凝膠電泳法實驗二十三 紅豆杉紫杉醇生物堿的分離與鑒定實驗二十四 植物倍半萜的分離與酸化度分析實驗二十五 黃連中黃連素的提取及其紫外光譜分析I．黃連中黃連素的提?、颍S連素的紫外光譜分析實驗二十六 虎杖蒽醌類成分的提取分離及結構鑒定實驗二十七 植物材料中總黃酮分離提取及鑒定實驗二十八 從茶葉中提取咖啡因附錄附錄一 離心技術附錄二 常用蛋白質Mr標準參照物附錄三 常用緩沖溶液的配制方法附錄四 實驗室中常用酸堿的相對密度和濃度附錄五 硫酸銨飽和度的常用表附錄六 常用相關網站主要參考文獻

章節(jié)摘錄

插圖：對于分辨率較高的不連續(xù)聚丙烯酰胺凝膠電泳而言，還存在另一種效應——樣品的濃縮效應。不連續(xù)PAGE是以孔徑大小不同的聚丙烯酰胺為支持物，采用電泳基質的不連續(xù)體系，即凝膠孔徑的不連續(xù)性、緩沖溶液離子成分的不連續(xù)性、pH的不連續(xù)性、電流的不連續(xù)性和電泳過程中自動形成的電位梯度的不連續(xù)性，使樣品在不連續(xù)的兩相之間積聚濃縮成很窄的一條區(qū)帶（10-cm），然后再進行電泳分離。所用的凝膠由兩部分組成：一部分是分離膠（垂直電泳時為下層），與連續(xù)電泳膠相似，用于把蛋白質分開；另一部分是濃縮膠（垂直電泳時為上層），它使樣品壓縮成很窄的一條區(qū)帶。樣品的濃縮效應基于電泳基質的不連續(xù)性：①由于兩種凝膠孔徑不同，蛋白向下移動到兩層凝膠界面時，阻力突然加大，速度變小，這樣就在兩層凝膠交界處使待分離的蛋白質區(qū)帶變窄，濃度增高；②上層濃縮膠緩沖溶液pH為6.7 左右，下層分離膠pH為8.8 左右，兩種緩沖溶液都是Tris-HCl，由于Cl全部解離，它分布在整個凝膠內；蛋白質樣品加在加樣孔內，浸在pH8.3 的Tris一甘氨酸緩沖液中，電泳一開始，有效泳動率最大的Cl迅速跑到前面，成為快離子（前導離子）；在pH6.7 條件下解離度僅有0.1 9／6～19，6的甘氨酸（Gly）有效泳動率最低，跑在最后面，成為慢離子（尾隨離子）。這樣，快、慢離子之間形成一個不斷泳動的界面。在pH6.7 條件下帶有負電荷的蛋白質，其有效泳動率介于快、慢離子之間，逐漸形成一個區(qū)帶。

編輯推薦

《高級生物化學實驗》是全國高等學校農林規(guī)劃教材。

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