分子生物學(xué)實驗指導(dǎo)

前言

　　當(dāng)今的生命科學(xué)研究正在基因組、轉(zhuǎn)錄組、蛋白質(zhì)組三個層次上展開。在生命過程中，基因組是藍圖，轉(zhuǎn)錄組是紐帶，蛋白質(zhì)組則是執(zhí)行生命活動的功能分子群體。而在分子水平上對基因、RNA和蛋白質(zhì)進行研究的技術(shù)構(gòu)成了分子生物學(xué)實驗技術(shù)的主要內(nèi)容。當(dāng)前的分子生物技術(shù)幾乎已滲透到生命科學(xué)研究的所有領(lǐng)域，因而分子生物學(xué)實驗技術(shù)已成為生命科學(xué)及其相關(guān)學(xué)科教學(xué)與科研不可缺少的部分。為了適應(yīng)分子生物技術(shù)的發(fā)展，落實培養(yǎng)研究型創(chuàng)新人才的目標(biāo)，我們在第一版《分子生物學(xué)實驗指導(dǎo)》的基礎(chǔ)上，補充更新了原有實驗內(nèi)容，增加了一些最新進展的實驗技術(shù)，編寫成分子生物學(xué)實驗技術(shù)教材，供生命科學(xué)各專業(yè)的本科生及研究生選用?！　”窘滩姆譃閮蓚€部分：基礎(chǔ)實驗與高級實驗。本書將第一版所選的11個實驗進行了必要的修改與更新，增加用RACE—PCR方法克隆全長基因的方法一起組成基礎(chǔ)實驗部分，可作為本科生分子生物學(xué)實驗教學(xué)的必修內(nèi)容。在此基礎(chǔ)上，本書精選了真核基因的原核表達、凝膠遷移率變動分析、基因產(chǎn)物的核定位、蛋白質(zhì)的親和層析、基于2一DE／MS的蛋白質(zhì)組學(xué)分析技術(shù)、植物的農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化、側(cè)翼未知序列克隆及啟動子的功能分析等實驗組成高級實驗部分，可作為本科生或者研究生分子生物學(xué)實驗教學(xué)的必修內(nèi)容。正如第一版緒言中所指出的那樣，所有實驗除了概述、實驗步驟外，還有結(jié)果分析及問題討論。在結(jié)果分析部分編者們將自己最新研究成果組合進去并加以說明，供讀者在準(zhǔn)確判斷結(jié)果時參考。書末的附錄部分包括簡單微生物操作技術(shù)、常用試劑及溶液的配制、實驗室安全、常用數(shù)據(jù)等，供需要這些知識的讀者參考。

內(nèi)容概要

　　為反映分子生物學(xué)的最新技術(shù)，適應(yīng)研究型創(chuàng)新人才的培養(yǎng)要求，《分子生物學(xué)實驗指導(dǎo)》在第1版的基礎(chǔ)上，補充更新了原有實驗內(nèi)容，增加了一些最新進展的實驗技術(shù)。全書分為兩個部分：基礎(chǔ)實驗與高級實驗?；A(chǔ)實驗部分選編了12個基礎(chǔ)實驗，內(nèi)容包括核酸分離與定量、分子雜交、轉(zhuǎn)化與基因克隆、PCR及其實時定量分析等。高級實驗部分選編了10個高級實驗，內(nèi)容涉及真核基因的原核表達、凝膠遷移率變動分析、基因產(chǎn)物的核定位、蛋白質(zhì)的親和層析、基于2一DE／MS的蛋白質(zhì)組學(xué)分析技術(shù)、植物的農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化、側(cè)翼未知序列克隆及啟動子的功能分析等。所有實驗除了概述、實驗步驟外，還有結(jié)果分析、問題討論，以及思考題。在結(jié)果分析部分，作者將自己最新研究成果組合進去并加以說明，供讀者在準(zhǔn)確判斷結(jié)果時參考。書后有附錄，內(nèi)容包括微生物操作、常用試劑及溶液的配制、實驗室安全、常用生物學(xué)數(shù)據(jù)等?！　　斗肿由飳W(xué)實驗指導(dǎo)》適用于本科分子生物學(xué)實驗教學(xué)，也可供相關(guān)科研人員參考。

書籍目錄

第一篇 基礎(chǔ)　實驗實驗一 質(zhì)粒DNA的提取、酶切與電泳鑒定實驗二 重組DNA分子的構(gòu)建、篩選與鑒定實驗三 大腸桿菌感受態(tài)細胞的制備及質(zhì)粒DNA分子導(dǎo)入原核細胞實驗四 聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)擴增DNA片段實驗五 DNA序列分析實驗六 植物總RNA的提取及其電泳鑒定實驗七 DNA的分子雜交實驗八 RNA的分子雜交實驗九 蛋白質(zhì)的Wester、n印跡分析實驗十 同步PCR定量核酸分子實驗十一 用mRNA的差異顯示法分離特異表達的基因片段實驗十二 用RACE—POR方法克隆全長基因第二篇 高級　實驗實驗十三 真核基因在原核細胞中的表達實驗十四 DNA結(jié)合蛋白的凝膠遷移率變動分析實驗十五 轉(zhuǎn)錄因子的核定位實驗十六 酵母單雜交　實驗實驗十七 基于2-DE／MS的蛋白質(zhì)組學(xué)分析實驗十八 蛋白質(zhì)的定量分析實驗十九 蛋白質(zhì)的免疫親和層析實驗二十 煙草葉盤與農(nóng)桿菌共培養(yǎng)獲得轉(zhuǎn)基因植株實驗二十一 染色體步行法克隆側(cè)翼未知序列實驗二十二 植物啟動子的功能分析附錄一、常用試劑、溶液及緩沖液的配制二、常用培養(yǎng)基和抗生素的配制三、生物樣品的貯存、郵送與實驗室安全四、常用生物學(xué)數(shù)據(jù)

章節(jié)摘錄

　　實驗十九蛋白質(zhì)的免疫親和層析　　1概述　　親和層析是利用待分離物質(zhì)和它的特異性配體間具有專一親和力而進行分離的一類層析技術(shù)。親和層析純化過程簡單、迅速，分離效率高，被廣泛用于生物大分子的分離純化。常見的具有專一親和力的生物分子對主要有：抗原與抗體、生物素與親和素、酶與其底物、維生素與它的特異結(jié)合蛋白、激素與受體蛋白，以及凝集素與糖蛋白等。其中利用抗原與抗體之間高特異性的親和力而進行的親和層析稱為免疫親和層析。它的基本原理是將針對靶蛋白的抗體（或抗原）作為配體固定到固相支持介質(zhì)上形成有結(jié)合活性的免疫吸附劑，當(dāng)含有靶蛋白的蛋白質(zhì)混合物流經(jīng)時其中的靶蛋白會被免疫吸附劑捕獲而其他蛋白則隨流動相流出；利用抗原與抗體相互作用的可逆性，用能夠破壞這種相互作用的洗脫劑進行洗脫即可獲得高度純化的靶蛋白（圖19．1）。洗脫方案可以是pH的改變，也可用試劑如KSCN和尿素等?！　?951年，Campbell等首次建立了免疫親和層析方法，他們將抗原固定到特定的纖維素介質(zhì)上，成功地進行了抗體純化。隨后大量類似的免疫親和層析的應(yīng)用相繼出現(xiàn)，被用來純化抗體、激素、多肽、酶類、受體和重組蛋白等。免疫親和層析已成為一種非常重要的生物組分分離技術(shù)。

圖書封面

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