生化實(shí)驗(yàn)方法和技術(shù)

前言

《生化實(shí)驗(yàn)方法和技術(shù)》自1981年（第一版）出版以來(lái)，深受高等院校生物學(xué)系的大學(xué)生、研究生以及其他生物學(xué)工作者的歡迎。本書經(jīng)過(guò)9次印刷，仍不敷應(yīng)用。讀者們通過(guò)本書的使用，也來(lái)信對(duì)本書提出了許多寶貴意見和建議。這些情況使編者深受鼓舞，成為改寫再版的動(dòng)力。另一方面，20世紀(jì)70年代以來(lái)，生物化學(xué)和分子生物學(xué)發(fā)生了深刻的變化。尤其重組DNA技術(shù)使我們有可能從分子水平上認(rèn)識(shí)基因組的組成和它的表達(dá)機(jī)理。。DNA的分子克隆和序列測(cè)定豐富了我們對(duì)于基因和蛋白質(zhì)的認(rèn)識(shí)。用基因工程的定點(diǎn)突變方法可以產(chǎn)生全新的蛋白質(zhì)。利用在細(xì)菌中進(jìn)行基因的克隆和表達(dá)可以大量產(chǎn)生醫(yī)用的蛋白質(zhì)，如胰島素、干擾素等。雜交瘤方法產(chǎn)生專一性的單克隆抗體為生物學(xué)和醫(yī)學(xué)研究開辟了新的途徑。這些進(jìn)展要求生物化學(xué)的實(shí)驗(yàn)教材作出相應(yīng)的改變，也是這種認(rèn)識(shí)促使編者決心再版。再版的編寫原則仍然是從加強(qiáng)基礎(chǔ)的觀點(diǎn)出發(fā)，側(cè)重于給學(xué)生以生物化學(xué)和分子生物學(xué)中基本的實(shí)驗(yàn)方法和技能訓(xùn)練，同時(shí)也注意增加一些新近發(fā)展起來(lái)的、重要的生物化學(xué)研究方法和技術(shù)，作為大學(xué)生、研究生進(jìn)入生物化學(xué)和分子生物學(xué)研究領(lǐng)域的準(zhǔn)備。本書第一版共八章61個(gè)實(shí)驗(yàn)。在改編過(guò)程中，刪除了第一版中8個(gè)實(shí)驗(yàn)，改編重寫了9個(gè)實(shí)驗(yàn)，保留了44個(gè)實(shí)驗(yàn)。再版新增“基因工程和蛋白質(zhì)工程技術(shù)”一章，新增實(shí)驗(yàn)29個(gè)，共九章82個(gè)實(shí)驗(yàn)。新增和改編重寫的實(shí)驗(yàn)，和以往一樣，都經(jīng)過(guò)學(xué)生做過(guò)，或者是教師、研究生在研究工作中經(jīng)常應(yīng)用的實(shí)驗(yàn)技術(shù)。這些實(shí)驗(yàn)可以說(shuō)是比較成熟和經(jīng)過(guò)反復(fù)驗(yàn)證的。再版附錄部分增加了“分子生物學(xué)及基因工程常用資料”和“新型層析介質(zhì)及其性質(zhì)”兩部分。參加再版新增實(shí)驗(yàn)編寫工作的有：張庭芳、李令媛、胡美浩、徐長(zhǎng)法、朱圣賡、黃儀秀、郭振泉、王重慶、王素云、周先碗、郝福英、李云蘭、肖能慮、茹炳根、倪逸聲等。再版最后的統(tǒng)一編審工作由張龍翔、張庭芳、李令媛共同完成。較長(zhǎng)時(shí)期參加生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)的李德昌和其他教師以及教學(xué)輔助人員對(duì)選定實(shí)驗(yàn)提出過(guò)很好的意見。再版編寫大綱曾在1993年10月由國(guó)家教委生物學(xué)教學(xué)指導(dǎo)委員會(huì)生化組在黃山召開的生物化學(xué)專業(yè)實(shí)驗(yàn)研討會(huì)上討論。參加會(huì)議的有南京大學(xué)、武漢大學(xué)、復(fù)旦大學(xué)、中山大學(xué)、吉林大學(xué)、山。東大學(xué)、華東師范大學(xué)、安徽大學(xué)、北京大學(xué)、高等教育出版社等單位的代表。他們提出了很多寶貴意見。高等教育出版社譚麗霞責(zé)任編輯為再版的出版做了大量工作。編者在此一并致謝。

內(nèi)容概要

　　該書在第一版基礎(chǔ)上進(jìn)行修訂，增加“基因工程和蛋白質(zhì)工程技術(shù)”一章，附錄增加了“分子生物學(xué)及基因工程常用資料”和“新型層析介質(zhì)及其性質(zhì)”。全書共九章82個(gè)實(shí)驗(yàn)和附錄。本書在注意加強(qiáng)基本實(shí)驗(yàn)方法和技能訓(xùn)練的同時(shí)，引進(jìn)了一些新近發(fā)展起來(lái)的、重要的生物化學(xué)及分子生物學(xué)研究方法和技術(shù)?！　”緯晒┥瘜I(yè)大學(xué)生和有關(guān)專業(yè)研究生作實(shí)驗(yàn)課教材，也可供有關(guān)教師和科研人員參考。

書籍目錄

序第一章　糖　實(shí)驗(yàn)一　3，5-二硝基水楊酸比色定糖法　實(shí)驗(yàn)二　細(xì)菌細(xì)胞壁糖的薄層層析　實(shí)驗(yàn)三　葡糖-1-磷酸的制備及其純度測(cè)定第二章　脂類　實(shí)驗(yàn)四　紅細(xì)胞膜的制備及其結(jié)構(gòu)成分的分析　實(shí)驗(yàn)五　脂質(zhì)體的制備　實(shí)驗(yàn)六　包裹藥物脂質(zhì)體的制備　實(shí)驗(yàn)七　靶向脂質(zhì)體的制備　實(shí)驗(yàn)八　豬心肌線粒體、亞線粒體的制備及可溶性腺苷三磷酸酶的提純　實(shí)驗(yàn)九　豬心線粒體腺苷三磷酸酶復(fù)合體在脂質(zhì)體上的重組第三章　蛋白質(zhì)　實(shí)驗(yàn)十　苯甲酰L-酪氨酰胺的合成　實(shí)驗(yàn)十一　N-乙酰-L-酪氨酸乙酯的合成　實(shí)驗(yàn)十二　雙甘二肽的合成　實(shí)驗(yàn)十三　胱氨酸的制備　實(shí)驗(yàn)十四　總氮量的測(cè)定——微量凱氏定氮法　實(shí)驗(yàn)十五　蛋白質(zhì)及肽的N末端氨基酸FDNB分析法　實(shí)驗(yàn)十六　蛋白質(zhì)及肽的N末端氨基酸DNS分析法——聚酰胺薄膜層析技術(shù)　實(shí)驗(yàn)十七　羧肽酶法測(cè)定蛋白質(zhì)及肽的C末端氨基酸　實(shí)驗(yàn)十八　蛋白質(zhì)及肽的序列分析——PTH分析法　實(shí)驗(yàn)十九　DABITC/PITC雙偶合法測(cè)定蛋白質(zhì)序列　實(shí)驗(yàn)二十　鄰苯二甲醛熒光分析法及其在肽檢測(cè)中的應(yīng)用　實(shí)驗(yàn)二十一　血清蛋白質(zhì)的紙上電泳　實(shí)驗(yàn)二十二　聚丙烯酰胺凝膠盤狀電泳分離蛋白質(zhì)　實(shí)驗(yàn)二十三　SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳法測(cè)定蛋白質(zhì)的相對(duì)分子質(zhì)量（M1）　實(shí)驗(yàn)二十四　聚丙烯酰胺梯度凝膠電泳法測(cè)定蛋白質(zhì)的相對(duì)分子質(zhì)量（M1）　實(shí)驗(yàn)二十五　聚丙烯酰胺凝膠等電聚焦電泳法測(cè)定蛋白質(zhì)等電點(diǎn)　實(shí)驗(yàn)二十六　蛋白質(zhì)相對(duì)分子質(zhì)量（M1）的測(cè)定——凝膠層析法　實(shí)驗(yàn)二十七　細(xì)胞色素c的制備及測(cè)定　實(shí)驗(yàn)二十八　雞卵類粘蛋白的制備　實(shí)驗(yàn)二十九　牛腦鈣調(diào)素的分離純化及活性測(cè)定　　[附]蛋白質(zhì)含量的測(cè)定法　　[附1]雙縮脲法　　[附2]Folin-酚試劑法（Lowry法）　　[附3]考馬斯亮藍(lán)染色法（Bradford法）　　[附4]紫外吸收法第四章　酶　實(shí)驗(yàn)三十　胰蛋白酶的動(dòng)力學(xué)研究　實(shí)驗(yàn)三十一　脲酶的動(dòng)力學(xué)研究　　[附]康維微量等溫蒸餾定氨法　實(shí)驗(yàn)三十二　?；窱的制備及活力測(cè)定　　[附]氨基酸含量的測(cè)定法　　[附1]茚三酮溶液顯色法　　[附2]甲醛滴定法　實(shí)驗(yàn)三十三　豬胰蛋白酶的結(jié)晶及活力測(cè)定　實(shí)驗(yàn)三十四　親和層析法純化胰蛋白酶　實(shí)驗(yàn)三十五　乳酸脫氫酶同工酶的制備及活力測(cè)定……第五章  核酸第六章  基因工程和蛋白質(zhì)工程技術(shù)第七章  免疫化學(xué)第八章  組織代謝第九章  放射性同位素附錄

章節(jié)摘錄

插圖：薄層層析是一種微量而快速的層析方法。該方法是把吸附劑或支持劑（例如硅膠或硅藻土）涂布在玻璃板上成為一薄層，將要分析的樣品滴加到薄層上，然后用合適的溶劑進(jìn)行展開，使樣品中各個(gè)成分分離，最后進(jìn)行定性鑒定和定量測(cè)定。因?yàn)閷游鍪窃谖絼┑谋由线M(jìn)行的，所以稱為薄層層析。實(shí)際上，薄層層析和柱層析、紙層析在原理上和操作上都是很相似的。柱層析是把吸附劑裝在管中形成一個(gè)柱，在柱上進(jìn)行分離。紙層析是用紙作為支持劑進(jìn)行層析。薄層層析則是用鋪于玻璃板上的吸附劑薄層進(jìn)行層析。但是薄層層析兼?zhèn)淞酥鶎游龊图垖游鰞烧叩膬?yōu)點(diǎn)。因?yàn)楸訉游鍪窃诔ㄩ_的薄層上操作的，所以它和紙層析一樣，在確定混合的組分是否分開和顯色等方面都比較方便，只要把顯色劑直接噴到薄層上即可觀察。而柱層析則要把層析譜從柱中推出或進(jìn)行洗脫，然后分段收集洗脫液才能設(shè)法鑒定。在顯色方面，紙層析的缺點(diǎn)是不能用腐蝕性的顯色劑，而薄層層析（如果用硅膠、氧化鋁、硅藻土等無(wú)機(jī)物鋪成薄層）卻能耐受濃硫酸這類試劑的作用。柱層析所需的樣品量較大，不適于小量樣品的分離；紙層析只適用于小量樣品的分離，又不能用于較大量樣品的分離和精制。

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《生化實(shí)驗(yàn)方法和技術(shù)》由高等教育出版社出版。

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