生物化學(xué)與分子生物實驗學(xué)

內(nèi)容概要

《生物化學(xué)與分子生物實驗學(xué)》共三篇十二章，內(nèi)容涵蓋生物化學(xué)有關(guān)糖類、脂類、酶、氨基酸以及分子生物學(xué)有關(guān)蛋白質(zhì)與核酸的理化理論與實驗內(nèi)容，針對大學(xué)本科相關(guān)實驗涉及常用儀器及實驗技術(shù)方法進行詳細講解和闡述。為提高學(xué)生創(chuàng)新能力和綜合實驗技能，《生物化學(xué)與分子生物實驗學(xué)》安排了綜合性、探索性實驗部分并對設(shè)計原則與方法進行介紹。同時結(jié)合當今生物化學(xué)與分子生物學(xué)實驗技術(shù)前沿，對應(yīng)用較多較廣的生物芯片實驗技術(shù)和蛋白質(zhì)組學(xué)實驗技術(shù)進行補充和講解；結(jié)合生物信息學(xué)應(yīng)用，《生物化學(xué)與分子生物實驗學(xué)》增加數(shù)據(jù)庫的使用?！渡锘瘜W(xué)與分子生物實驗學(xué)》具有完整系統(tǒng)的知識體系，實驗理論詳盡充分，可以應(yīng)用為獨立設(shè)置實驗課程的實驗教材。
《生物化學(xué)與分子生物實驗學(xué)》適合作為本科生或碩士研究生實驗技術(shù)課的教材使用，也可供有關(guān)科技人員參考。

作者簡介

宋海星、何浪、王丹

書籍目錄

前言第一篇 基本原理與實驗第一章 常用基本儀器的使用第一節(jié) 分光光度計的使用第二節(jié) 離心機的使用第三節(jié) 電泳儀的使用第四節(jié) PCR儀的使用第二章 基本實驗技術(shù)第一節(jié) 層析技術(shù)第二節(jié) 分光光度技術(shù)第三節(jié) 離心技術(shù)第四節(jié) 透析超濾沉淀法第三章 糖分子第一節(jié) 糖的分子結(jié)構(gòu)第二節(jié) 糖分子的理化性質(zhì)第三節(jié) 實驗內(nèi)容第四章 脂分子第一節(jié) 血脂的組成和理化特性第二節(jié) 脂類的氧化分解第三節(jié) 實驗內(nèi)容第五章 酶分子第一節(jié) 酶的分子結(jié)構(gòu)第二節(jié) 酶的理化性質(zhì)第三節(jié) 影響酶活性的因素第四節(jié) 實驗內(nèi)容第六章 氨基酸分子第一節(jié) 氨基酸的分子結(jié)構(gòu)第二節(jié) 氨基酸的理化性質(zhì)第三節(jié) 實驗內(nèi)容第七章 蛋白質(zhì)化學(xué)第一節(jié) 蛋白質(zhì)物理化學(xué)性質(zhì)第二節(jié) 蛋白質(zhì)的分離純化第三節(jié) 實驗內(nèi)容第八章 核酸分子第一節(jié) 核酸的性質(zhì)第二節(jié) PCR技術(shù)第三節(jié) DNA重組第四節(jié) 實驗內(nèi)容第二篇 綜合性、探索性實驗第九章 探索性實驗設(shè)計第一節(jié) 實驗設(shè)計的選題第二節(jié) 醫(yī)學(xué)分子實驗設(shè)計的原理與方法第三節(jié) 數(shù)據(jù)的記錄與處理第四節(jié) 設(shè)計性實驗的指導(dǎo)與考核第五節(jié) 實驗報告和論文的撰寫第六節(jié) 實驗內(nèi)容第十章 生物芯片實驗第一節(jié) 生物芯片實驗原理第二節(jié) 生物芯片實驗方法第十一章 蛋白質(zhì)組學(xué)實驗第一節(jié) 蛋白組學(xué)研究策略和內(nèi)容第二節(jié) 蛋白質(zhì)組學(xué)研究技術(shù)第三節(jié) 蛋白質(zhì)組實驗準備第四節(jié) 蛋白質(zhì)組實驗操作第五節(jié) 數(shù)據(jù)庫搜索(Databases search)第六節(jié) 蛋白質(zhì)組實驗數(shù)據(jù)庫及實驗試劑配制第三篇 實驗數(shù)據(jù)庫的使用及實驗室管理第十二章 生物醫(yī)學(xué)文獻數(shù)據(jù)庫第一節(jié) 中文文獻數(shù)據(jù)庫第二節(jié) 外文文獻數(shù)據(jù)庫第三節(jié) 部分常用專業(yè)網(wǎng)站附錄一 實驗室日常管理規(guī)定附錄二 常用緩沖液的配制

章節(jié)摘錄

版權(quán)頁：   插圖：   4.超濾裝置 超濾裝置一般由若干超濾組件構(gòu)成。通?？煞譃榘蹇蚴?、管式、螺旋卷式和中空纖維式四種主要類型。由于超濾法處理的液體多數(shù)是含有水溶性生物大分子、有機膠體、多糖及微生物等。這些物質(zhì)極易黏附和沉積于膜表面上，造成嚴重的濃差極化和堵塞，這是超濾法最關(guān)鍵的問題，要克服濃差極化，通?？杉哟笠后w流量，加強湍流和攪拌。 5.超濾技術(shù)的應(yīng)用 在生物制品中應(yīng)用超濾法有很高的經(jīng)濟效益，例如，供靜脈注射的25％人胎盤血白蛋白（即胎白）通常是用硫酸銨鹽析法、透析脫鹽、真空濃縮等工藝制備的，該工藝流程硫酸銨耗量大，能源消耗多，操詐時間長，透析過程易產(chǎn)生污染。改用超濾工藝后，平均回收率可達97.18％；吸附損失為1.69％；透過損失為1.23％；截留率為98.77％。大幅度提高了白蛋白的產(chǎn)量和質(zhì)量，每年可節(jié)省硫酸銨6.2噸，自來水16 000噸。 超濾技術(shù)的應(yīng)用有很好的前景，應(yīng)引起足夠的重視。 三、沉淀技術(shù) 沉淀是溶液中的溶質(zhì)由液相變成固相析出的過程。此方法的基本原理是根據(jù)不同物質(zhì)在溶劑中的溶解度不同而達到分離的目的，不同溶解度的產(chǎn)生是由于溶質(zhì)分子之間及溶質(zhì)與溶劑分子之間親和力的差異而引起的，溶解度的大小與溶質(zhì)和溶劑的化學(xué)性質(zhì)及結(jié)構(gòu)有關(guān)，溶劑組分的改變或加入某些沉淀劑以及改變?nèi)芤旱膒H、離子強度和極性都會使溶質(zhì)的溶解度產(chǎn)生明顯的改變。 在生物大分子制備中最常用的幾種沉淀方法是：中性鹽沉淀（鹽析法），多用于各種蛋白質(zhì)和酶的分離純化；有機溶劑沉淀，多用于蛋白質(zhì)和酶、多糖、核酸以及生物小分子的分離純化；選擇性沉淀（熱變性沉淀和酸堿變性沉淀），多用于除去某些不耐熱的和在一定pH下易變性的雜蛋白；等電點沉淀，用于氨基酸、蛋白質(zhì)及其他兩性物質(zhì)的沉淀，但此法單獨應(yīng)用較少，多與其他方法結(jié)合使用；有機聚合物沉淀，是發(fā)展較快的一種新方法，主要使用PEG聚乙二醇（polyethyene glycol）作為沉淀劑。 1.中性鹽沉淀（鹽析法） 在溶液中加人中性鹽使生物大分子沉淀析出的過程稱為“鹽析”。除了蛋白質(zhì)和酶以外，多肽、多糖和核酸等都可以用鹽析法進行沉淀分離，20％～40％飽和度的硫酸銨可以使許多病毒沉淀，43％飽和度的硫酸銨可以使DNA和rRNA沉淀，而tRNA保留在上清。鹽析法應(yīng)用最廣的還是在蛋白質(zhì)領(lǐng)域，已有80多年的歷史，其突出的優(yōu)點是：①成本低，不需要特別昂貴的設(shè)備；②操作簡單、安全；③對許多生物活性物質(zhì)具有穩(wěn)定作用。 （1）基本原理：蛋白質(zhì)和酶均易溶于水，因為該分子的—COOH、—NH2和—OH都是親水基團，這些基團與極性水分子相互作用形成水化層，包圍于蛋白質(zhì)分子周圍形成1～100nm顆粒的親水膠體，削弱了蛋白質(zhì)分子之間的作用力，蛋白質(zhì)分子表面極性基團越多，水化層越厚，蛋白質(zhì)分子與溶劑分子之間的親和力越大，因而溶解度也越大。親水膠體在水中的穩(wěn)定因素有兩個：電荷和水膜。因為中性鹽的親水性大于蛋白質(zhì)和酶分子的親水性，所以加入大量中性鹽后，奪走了水分子，破壞了水膜，暴露出疏水區(qū)域，同時又中和了電荷，破壞了親水膠體，蛋白質(zhì)分子即形成沉淀。 （2）鹽析的操作方法：最常用的是固體硫酸銨加入法。欲從較大體積的粗提取液中沉淀蛋白質(zhì)時，往往使用固體硫酸銨，加入之前要先將其研成細粉不能有塊，要在攪拌下緩慢均勻少量多次地加入，尤其到接近計劃飽和度時，加鹽的速度更要慢一些，盡量避免局部硫酸銨濃度過大而造成不應(yīng)有的蛋白質(zhì)沉淀。鹽析后要在冰浴中放置一段時間，待沉淀完全后再離心與過濾。在低濃度硫酸銨中鹽析可采用離心分離，高濃度硫酸銨常用過濾方法，因為高濃度硫酸銨密度太大，要使蛋白質(zhì)完全沉降下來需要較高的離心速度和較長的離心時間。

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