生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)教程

內(nèi)容概要

《生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)教程》介紹了生物化學(xué)研究中重要的實(shí)驗(yàn)技術(shù)原理，包括紙層析技術(shù)、薄層層析技術(shù)、離子交換層析技術(shù)、凝膠過濾層析技術(shù)、分光光度技術(shù)、電泳技術(shù)、蛋白質(zhì)免疫印跡技術(shù)等。在介紹了每一種實(shí)驗(yàn)技術(shù)原理之后，都列舉了數(shù)個(gè)應(yīng)用該技術(shù)解決實(shí)際研究問題的基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)，內(nèi)容豐富，不同學(xué)校不同專業(yè)可根據(jù)實(shí)際情況進(jìn)行選做。另外，《生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)教程》還增加了以蛋白質(zhì)、酶、多糖和核酸等生物大分子的提取、純化、定量、活性測(cè)定等為研究?jī)?nèi)容的綜合性實(shí)驗(yàn)，每一個(gè)綜合性實(shí)驗(yàn)涵蓋了多種生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)，能培養(yǎng)學(xué)生對(duì)所學(xué)知識(shí)的綜合運(yùn)用能力和創(chuàng)新實(shí)踐能力。
《生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)教程》可作為綜合性、農(nóng)林、師范等高等院校生物科學(xué)類相關(guān)專業(yè)本科生實(shí)驗(yàn)教材，也可作為從事生命科學(xué)教學(xué)與研究人員的參考書。

作者簡(jiǎn)介

無(wú)

書籍目錄

前言
 第一篇 實(shí)驗(yàn)要求
第一章 生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)基本要求
 第一節(jié) 生化實(shí)驗(yàn)室學(xué)生實(shí)驗(yàn)守則
 第二節(jié) 實(shí)驗(yàn)室安全及防護(hù)知識(shí)
 第三節(jié) 生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)報(bào)告
 第二篇 實(shí)驗(yàn)技術(shù)原理與基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)
第二章 生物物質(zhì)的定性鑒定
 第一節(jié) 氨基酸和蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)及性質(zhì)
 第二節(jié) 核酸的結(jié)構(gòu)組成特點(diǎn)
 第三節(jié) 糖的基本性質(zhì)
 第四節(jié) 酶的催化特性
 第五節(jié) 實(shí)驗(yàn)部分
 實(shí)驗(yàn)一 蛋白質(zhì)的雙縮脲反應(yīng)
 實(shí)驗(yàn)二 蛋白質(zhì)和氨基酸的茚三酮反應(yīng)
 實(shí)驗(yàn)三 蛋白質(zhì)的黃色反應(yīng)
 實(shí)驗(yàn)四 蛋白質(zhì)的沉淀反應(yīng)
 實(shí)驗(yàn)五 蛋白質(zhì)的兩性性質(zhì)及等電點(diǎn)的測(cè)定
 實(shí)驗(yàn)六 酵母RNA的提取與鑒定
 實(shí)驗(yàn)七 糖的呈色反應(yīng)及還原糖的檢測(cè)
 實(shí)驗(yàn)八 α-淀粉酶的激活劑、抑制劑及其特異性分析
 實(shí)驗(yàn)九 肌糖原的酵解作用研究
 實(shí)驗(yàn)十 生物氧化作用研究
第三章 紙層析技術(shù)
 第一節(jié) 紙層析基本原理
 第二節(jié) 影響相對(duì)遷移率的主要因素
 第三節(jié) 實(shí)驗(yàn)部分
 實(shí)驗(yàn)一 氨基酸的紙層析分離
 實(shí)驗(yàn)二 紙層析法檢測(cè)谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性
第四章 薄層層析技術(shù)
 第一節(jié) 薄層層析原理
 第二節(jié) 固定相支持介質(zhì)的選擇
 第三節(jié) 實(shí)驗(yàn)部分
 實(shí)驗(yàn)一 硅膠薄層層析法分離鑒定水果中的糖類物質(zhì)
 實(shí)驗(yàn)二 DEAE-纖維素薄層層析分離鑒定核苷酸
第五章 離子交換層析技術(shù)
 第一節(jié) 離子交換層析原理
 第二節(jié) 核酸蛋白質(zhì)檢測(cè)儀的構(gòu)造及使用
 第三節(jié) 實(shí)驗(yàn)部分
 實(shí)驗(yàn)一 離子交換法制備無(wú)離子水
 實(shí)驗(yàn)二 DEAE-Cellulose柱層析分離純化大蒜超氧化物歧化酶
第六章 凝膠過濾層析技術(shù)
 第一節(jié) 凝膠過濾層析原理
 第二節(jié) 實(shí)驗(yàn)部分
 實(shí)驗(yàn)一 分子篩過濾層析脫鹽
 實(shí)驗(yàn)二 分子篩層析法分離蛋白質(zhì)及相對(duì)分子質(zhì)量測(cè)定
第七章 親和層析技術(shù)
第八章 離心技術(shù)
第九章 分光光度技術(shù)
 第一節(jié) 分光光度技術(shù)的原理
 第二節(jié) 分光光度計(jì)的構(gòu)造及使用
 第三節(jié) 實(shí)驗(yàn)部分
 實(shí)驗(yàn)一 雙縮脲法測(cè)定蛋白質(zhì)含量
 實(shí)驗(yàn)二 Folin-酚試劑法測(cè)定蛋白質(zhì)濃度
 實(shí)驗(yàn)三 紫外吸收法測(cè)定蚯蚓提取液的蛋白質(zhì)含量
 實(shí)驗(yàn)四 考馬斯亮藍(lán)染色法測(cè)定蛋白質(zhì)濃度
 實(shí)驗(yàn)五 花椰菜DNA的提取與二苯胺法測(cè)定DNA的含量
 實(shí)驗(yàn)六 植物組織中可溶性糖含量的測(cè)定(蒽酮比色法)
 實(shí)驗(yàn)七 兔肝轉(zhuǎn)氨酶活力測(cè)定
 實(shí)驗(yàn)八 酵母發(fā)酵過程中無(wú)機(jī)磷的利用(定磷法)
第十章 電泳技術(shù)
 第一節(jié) 電泳的基本原理
 第二節(jié) 電泳的分類
 第三節(jié) 常用的電泳技術(shù)
 第四節(jié) 染色方法
 第五節(jié) 電泳有關(guān)的儀器及使用
 第六節(jié) 實(shí)驗(yàn)部分
 實(shí)驗(yàn)一 醋酸纖維素薄膜電泳分離血清蛋白
 實(shí)驗(yàn)二 聚丙烯酰胺凝膠電泳分離大蒜超氧化物歧化酶
 實(shí)驗(yàn)三 SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳測(cè)定超氧化物歧化酶的相對(duì)分子質(zhì)量
 實(shí)驗(yàn)四 等電聚焦電泳法測(cè)定雞卵類黏蛋白的等電點(diǎn)
第十一章 蛋白質(zhì)免疫印跡技術(shù)
 第一節(jié) 蛋白質(zhì)免疫印跡技術(shù)原理
 第二節(jié) 抗血清的制備
第十二章 滴定技術(shù)
 第一節(jié) 概述
 第二節(jié) 實(shí)驗(yàn)部分
 實(shí)驗(yàn)一 溫度、pH對(duì)糖化酶活力的影響
 實(shí)驗(yàn)二 果蔬中維生素C的定量測(cè)定(2，6-二氯酚靛酚滴定法)
 第三篇 綜合性實(shí)驗(yàn)
第十三章 實(shí)驗(yàn)舉例
 實(shí)驗(yàn)一 微量凱氏定氮法測(cè)定牛奶蛋白質(zhì)含量
 實(shí)驗(yàn)二 雞卵類黏蛋白的分離純化、活性及相對(duì)分子質(zhì)量測(cè)定
 實(shí)驗(yàn)三 蛋白質(zhì)免疫印跡檢測(cè)小鼠肝臟、脾臟及血液超氧化物歧化酶
 實(shí)驗(yàn)四 胰蛋白酶米氏常數(shù)及最大反應(yīng)速度的測(cè)定
 實(shí)驗(yàn)五 胰蛋白酶的固定化及其性質(zhì)
 實(shí)驗(yàn)六 親和層析純化蚯蚓絲氨酸蛋白酶
 實(shí)驗(yàn)七 植物過氧化物同工酶提取、活性測(cè)定及電泳鑒定
 實(shí)驗(yàn)八 大豆多糖的提取及測(cè)定
 實(shí)驗(yàn)九 定磷法測(cè)定酵母核糖核酸的含量
 實(shí)驗(yàn)十 小鼠肝臟DNA的提取及測(cè)定
 實(shí)驗(yàn)十一 兔肝總RNA的提取及RT-PCR
參考文獻(xiàn)
附錄一 常用標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制和標(biāo)定
附錄二 常用緩沖液的配制方法
附錄三 硫酸銨飽和度的調(diào)整用表
附錄四 柱層析材料

章節(jié)摘錄

版權(quán)頁(yè)：   插圖：    【操作步驟】 （一）糖的呈色反應(yīng) 1.Molisch反應(yīng) 取6支試管編號(hào)，分別加入1滴各種糖液（本實(shí)驗(yàn)用阿拉伯糖濃度為10g／L）和2滴Molisch試劑，搖勻，傾斜試管，慢慢加入1mL濃硫酸，小心豎直試管。注意：不要搖動(dòng)試管，使糖液和硫酸分層，觀察交界處顏色變化。 2.蒽酮反應(yīng) 取6支試管編號(hào)，分別加入1mL蒽酮溶液及各種糖液4滴（本實(shí)驗(yàn)用阿拉伯糖濃度為10g／L），混勻，觀察顏色變化。 3.Seliwanoff反應(yīng) 取6支試管編號(hào)，分別加入1mL Seliwanoff試劑及各種糖液4滴（本實(shí)驗(yàn)用阿拉伯糖濃度為20g／L），混勻，一起放人沸水浴中，比較各管顏色變化及出現(xiàn)顏色的先后順序。 4.Bial反應(yīng) 取6支試管編號(hào)，分別加入1mL Bial試劑及各種糖液2滴（本實(shí)驗(yàn)用阿拉伯糖濃度為10g／L），混勻，一起放人沸水浴中，觀察各管顏色變化的過程。 （二）還原糖的測(cè)定 1.Fehling反應(yīng) 取6支試管編號(hào)，分別加入1mL Fehling試劑A和1mL Fehling試劑B，混勻，再分別加入各種糖液4滴（本實(shí)驗(yàn)用阿拉伯糖濃度為20g／L），混勻，沸水浴2～3min，冷卻，觀察沉淀和顏色變化。 2.Benedict反應(yīng) 取6支試管編號(hào)，分別加入2mL Benedict試劑及各種糖液4滴（本實(shí)驗(yàn)用阿拉伯糖濃度為20g／L），沸水浴3～5min，比較各管顏色變化過程。 3.Barfoed反應(yīng) 取6支試管編號(hào)，分別加入1mL Barfoed試劑及各種糖液4滴（本實(shí)驗(yàn)用阿拉伯糖濃度為20g／L），沸水浴3～5min，觀察各管顏色變化，繼續(xù)沸水浴20min，比較各管顏色變化及順序。 【結(jié)果與分析】 如實(shí)記錄本實(shí)驗(yàn)所用糖液的幾種呈色反應(yīng)快慢及顏色深淺和沉淀多少，結(jié)合實(shí)驗(yàn)原理，分析實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象及原因。 【注意事項(xiàng)】 1.Molisch反應(yīng)非常靈敏，10mg／L葡萄糖或1mg／L蔗糖即能呈現(xiàn)陽(yáng)性反應(yīng)。過濃的果糖溶液，由于硫酸的焦化作用，將呈現(xiàn)紅色及褐色而不呈紫色，需稀釋糖液濃度。 2.果糖的Seliwanoff反應(yīng)十分迅速，呈鮮紅色，而葡萄糖所需時(shí)間長(zhǎng)，且只能產(chǎn)生黃色至淡紅色。戊糖亦與Seliwanoff試劑反應(yīng)，戊糖經(jīng)酸脫水生成糠醛，與間苯二酚縮合生成綠色至藍(lán)色產(chǎn)物。 3.Bial反應(yīng)中，如果遇到未知糖呈色不明顯，可用3倍體積水稀釋，并加人1mL戊醇，搖動(dòng)，若醇液呈藍(lán)綠色，即為陽(yáng)性反應(yīng)。

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